仔豬腹瀉病原菌的分離與鑒定

逯海峰

摘 要 2017年7月，45日齡仔豬出現了食欲減退、消瘦、嚴重腹瀉，個別發病仔豬出現死亡。為了確定引起仔豬腹瀉死亡的病原，通過膠體金試紙條檢測豬瘟、偽狂犬、圓環、藍耳抗原為陰性。無菌采集病死仔豬的肝臟、心血、肺臟等病料組織中分離得到了2株病原菌，分別命名為XJ-1株和XJ-2株，通過培養特性、形態學觀察、生化特性檢測、等等方法對分離到的2株病原菌進行鑒定，結果顯示，1株為沙門氏菌，另1株為大腸桿菌。對2株病原菌用口服方式攻毒小白鼠驗證其致病性，結果顯示，對2株病原菌均有很強的致病性。用K-B藥敏紙片法對2株病原菌進行藥敏試驗分析其耐藥性，結果表明，2株病原菌均對恩諾沙星、阿米卡星、頭孢克肟、頭孢曲松、氟苯尼考4種藥物敏感，對其他的藥物存在不同程度的耐藥性。

關鍵詞 仔豬；腹瀉；致病性大腸桿菌；沙門氏菌；藥敏試驗

隨著我國畜牧業的發展，豬的養殖數量越來越多，逐漸形成了規模化、集約化養殖模式，豬的健康養殖越來越來越受到養殖戶的重視。在養豬的過程中，仔豬的腹瀉病越來越嚴重，豬瘟、偽狂犬、圓環、藍耳病、致病性大腸桿菌病、沙門氏菌、綠膿桿桿菌多種病毒性和細菌性疾病均能能引起仔豬的嚴重腹瀉，其中，致病性大腸桿菌和雞沙門氏菌引起仔豬腹瀉為臨床多發，成為臨床上仔豬常見病，感染率和死亡率均較高，嚴重影響養豬業的發展 [1-2]。

仔豬大腸桿菌病是由某些特定血清型的致病性大腸桿菌所引起的仔豬以腹瀉為主傳染性疾病，主要包括仔豬黃痢、仔豬白痢和仔豬水腫病3種疾病，其中，仔豬大腸桿菌病在臨床上以仔豬白痢和仔豬黃痢較為常見，危害仔豬最為嚴重[3]。仔豬沙門菌病是由沙門菌屬的豬霍亂沙門菌、鼠傷寒沙門菌、腸炎沙門菌等不同血清型的沙門氏菌株引起的一種仔豬的高熱傳染病，1～4月齡的仔豬多發，急性為敗血癥，慢性為壞死性腸炎[4-6]。近年來，致病性大腸桿菌和沙門氏菌混合感染引起仔豬腹瀉問題日益嚴重，尤其當混合感染時，發病率和死亡率都較高，不易控制，在治療時，應進行藥敏試驗分析耐藥性，合理用藥。

1 仔豬腹瀉臨床癥狀

仔豬突然發生腹瀉，排出漿（糊）狀糞便，呈乳白、灰白、黃白色，偶有綠色，有時糞中帶有氣泡，氣味腥臭，肛門失禁，初期腹瀉次數少，精神沉郁，腰背拱起，行動遲緩，被毛粗亂無光，體表不潔，肛門周圍、尾根染糞，食欲減退，喜飲冷水，發育遲滯。病程長者達一周以上，短者2～3天，雖能自行康復，但多因嚴重脫水、營養障礙而成僵豬。

2 仔豬腹瀉剖檢變化

對腹瀉死亡仔豬進行剖檢，觀察病理學變化，剖檢可見死仔豬胃黏膜潮紅腫脹，以幽門部最明顯，上附黏液，胃內充有凝乳塊，少數嚴重病例胃黏膜有出血點。肝和膽囊稍腫大。心冠狀溝脂肪膠樣浸潤，心肌柔軟。腸黏膜潮紅，腸內容物呈黃白色，稀粥狀，有酸臭味，有的腸管空虛或充滿氣體，腸壁菲薄而透明。嚴重病例黏膜有出血點及部分黏膜表面脫落。腸系膜淋巴結腫大。腎臟呈蒼白色

3 病毒性疾病的檢測

采集病死仔豬的心血分離血清，按照豬瘟、偽狂犬、圓環、藍耳抗原膠體金試紙條說明進行檢測。結果顯示，豬瘟、偽狂犬、圓環、藍耳抗原膠體金檢測為陰性。

4 細菌分離培養

無菌采集病死仔豬的肝臟、心血、肺臟等病料組織，分別接種于麥康凱培養基上和SS瓊脂培養基上，37℃恒溫培養12h后，結果顯示， 1株在SS瓊脂培養基長出了周圍無色半透明，部分中間帶黑色菌落，革蘭氏染色結果顯示，分離菌株為中等大小、兩端略圓的直桿狀革蘭氏陰性菌。另1株在麥康凱培養基上長出了濕潤的、邊緣光滑整齊、粉紅色菌落。蘭氏染色鏡檢結果，呈兩端鈍圓革蘭氏陰性桿狀菌。與報道沙門氏菌和大腸桿菌的培養特性和形態特征一致

5 分離菌株的生化鑒定

1株發酵麥芽糖、甘露醇、葡萄糖、枸櫞酸鹽； 不發尿素、酵乳糖、蔗糖；吲哚試驗呈陰性，產生H2S，被鑒定為沙門氏菌，另1株能分解鼠李糖、麥芽糖、葡萄糖、甘露醇、山梨醇；木糖和阿拉伯糖并產酸產氣，V-P試驗呈陰性，吲哚和甲基紅反應成陽性，被鑒定為大腸桿菌。

6 致病性試驗

2株能致死小白鼠，對死亡的小鼠剖檢后進行分離鑒定，結果顯示，2組所分離菌株與大腸桿菌和沙門氏菌一致。對照組小白鼠健康存活，因而，證實了2株病原菌具有很強的致病性。

7 藥敏試驗結果

對分離的2株病原菌進行藥敏試驗，按照美國臨床檢驗標準委員會（NCCLS）推薦的標準K-B紙片法進行試驗操作和結果判斷。結果顯示，大腸桿菌和沙門氏菌均對恩諾沙星、阿米卡星、頭孢克肟、頭孢曲松、氟苯尼考4種藥物敏感；沙門氏菌株對大觀霉素、林可霉素、慶大霉素3種藥物中敏，大腸桿菌對林可霉素、氧氟沙星2種藥物中敏。

8 小結

從無菌采集病死仔豬體內分離到了2株病原菌，被鑒定為沙門氏菌和大腸桿菌。2株病原菌均有很強的致病性。藥敏結果表明，2株病原菌均對恩諾沙星、阿米卡星、頭孢克肟、頭孢曲松、氟苯尼考4種藥物敏感，對其他的藥物存在不同程度的耐藥性。

參考文獻：

[1]陳茹. 陜西某豬場仔豬腹瀉病原菌的分離鑒定[D].西北農林科技大學，2015.

[2]王斌，任偉，王青虎. 仔豬腹瀉的病原鑒定與綜合防治措施[J]. 畜禽業，2015，（01）：4-5.

[3]李心海，王兵，張林吉，遲蘭.豬大腸桿菌病病原的鑒定及藥敏試驗研究[J]. 黑龍江畜牧獸醫，2014，（08）：75-76.