熒光素鈉水溶液濃度熒光光度法研究

夏春苗

摘要：本文探討了熒光素鈉水溶液濃度的熒光光度法分析，根據不同濃度的熒光素鈉水溶液熒光強度的差別繪制濃度標準曲線，用以未知濃度樣品的分析，該方法操作簡單，測試結果準確。

關鍵詞：熒光素鈉水溶液；熒光強度；含量曲線

前言

熒光素鈉是一種紅棕色的熒光染料，英文名為Fluorescein sodium，中文別名水合熒光胺二鈉鹽，CAS號我518-47-8，分子式為C20H12Na2O5，易溶于水及乙醇，帶有強的黃綠色熒光。

分子結構：由于具有易溶于水的黃綠色熒光，所以常被配成注射液用于醫學診斷性眼底和虹膜血管的血管造影檢查和引導腫瘤切除，也可做成示蹤劑用于地質鉆井液研究等。熒光素鈉水溶液使用過程中，如何快速準確地檢測其濃度就是一個迫切需要解決的問題。由于熒光分光光度法具有相對較高的靈敏性和檢測下限，故本文探討了熒光光度法分析熒光素鈉水溶液濃度的方法。

1 實驗部分

1.1 實驗目的

檢測未知的熒光素鈉水溶液濃度

實驗原理

熒光素鈉水溶液在紫外光激發下發射出黃綠色熒光，熒光強度隨水溶液的濃度變化而變化，故可以通過熒光光度計檢測未知樣品的熒光強度，根據熒光強度推算未知樣品中熒光素鈉的濃度。

1.3主要儀器與試劑

主要儀器：Hitachi F-7000 熒光光度計，萬分之一分析天平，

250ml容量瓶10個，藥匙，移液管等

主要試劑：純凈水，熒光素鈉標準品，未知樣品

1.4 實驗步驟

1.配制樣品

稱取熒光素鈉標準品0.20g準確至0.001g，放入100ml容量瓶中，用純凈水定容至刻度。搖勻溶解，得試樣A。

用移液管吸取試樣A 1ml，于100ml容量瓶，用純凈水稀釋至刻度，搖勻，得試樣B。

分別用移液管吸取試樣B 1ml、2ml、4ml、8ml、12ml、16ml和20ml至100ml容量瓶中，用純凈水釋至刻度，搖勻，得試樣，濃度分別為20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml、320μg/ml、400μg/ml。

2.熒光發射光譜

用熒光光度計分別測試樣C1、C2、C3、C4、C5、C6和C7的發射光譜，測試條件：激發波長：490nm，檢測范圍380-720nm，掃描速度：240nm/min，發射光譜譜如圖1所示：

由圖1可以看出，熒光素鈉在480-600nm有明顯熒光，其中最大發射波長是513nm。

3.繪制標準曲線

試樣C1、C2、C3、C4、C5、C6和C7的濃度和最大發射波長513nm處的熒光強度如表1所示：

用熒光強度對標準溶液濃度繪制標準曲線，如下：

由上圖可知，熒光素鈉水溶液在20-400μg/ml的濃度下與熒光強度成很好的線性關系，線性回歸方程為：y=10.066x-109.52，R2=0.9988，其中 x為樣品濃度（μg/ml），y為樣品的熒光強度。

4.未知樣品測定

將未知樣品稀釋至一定濃度后按上述方法測試其熒光強度（熒光強度范圍：150-4000），按上述的線性回歸方程y=10.066x-109.52即可計算出未知樣品中熒光素鈉的濃度。

5.結語

本文利用熒光素鈉水溶液在紫外光激發下發射出黃綠色熒光的特性，采用熒光光度計，繪制樣品濃度與熒光強度的標準曲線y=10.066x-109.52，根據標準曲線即可快速準確地計算出未知樣品的濃度。由于不同的熒光光度計等分析儀器測試的熒光強度略有偏差，在使用熒光光度法分析熒光素鈉水溶液濃度時，標準曲線標需重新標定。

參考文獻：

[1]陳寅，王源等.HPLC法測定熒光素鈉注射液含量和有關雜質[J].藥物分析雜質，2008，28（6）：961～963.

[2]李伯平，郭冬發.分光光度法測定鉆井液中示蹤劑熒光素鈉 [J].中國無機分析化學，2013，3（1）：38～40.

[3]李紅軍，何雄奎，等.環境因素對熒光素鈉溶液熒光強度的影響[J].吉林農業大學學報，2008，30（1）：49～51.63.

[4]孫衍增.熒光素鈉熒光壽命的測定[J].分析化學，2000，28（11）：1413～1416.