基于QuEChERS前處理的液相色譜—紫外檢測(cè)串聯(lián)柱后衍生熒光法測(cè)定蔬菜水果中13種農(nóng)藥殘留

陳楠 馬世柱 姚德祥 黎小鵬 梁錦填 周嘉誠(chéng)

摘要 在運(yùn)用QuEChERS法對(duì)蔬果樣品進(jìn)行前處理的基礎(chǔ)上，使用高效液相色譜紫外檢測(cè)-衍生-熒光法測(cè)定常見蔬果中吡蟲啉、啶蟲脒、多菌靈和10種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量。結(jié)果表明，13種農(nóng)藥儀器方法檢出限在0.003～0.050 mg/kg之間，加標(biāo)回收率在70.5%～112.0%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.46%～8.10%之間，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性良好，相關(guān)系數(shù)在0.998 3～0.999 9之間。此方法操作簡(jiǎn)便，有機(jī)溶劑用量少，準(zhǔn)確度和精密度好，適合配備了高效液相色譜儀的基層實(shí)驗(yàn)室對(duì)常見蔬菜水果進(jìn)行農(nóng)藥多殘留檢測(cè)。

關(guān)鍵詞 農(nóng)藥多殘留檢測(cè)；高效液相色譜；紫外檢測(cè)-衍生-熒光法；QuEChERS

中圖分類號(hào) S481+.8 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2018）13-0116-02

Determination of 13 Pesticides in Fruits and Vegetables with QuEChERS by HPLC-VWD-Post Column Derivatization-FLD

CHEN Nan MA Shi-zhu YAO De-xiang LI Xiao-peng LIANG Jin-tian ZHOU Jia-cheng

（Sanxiang Inspection and Testing Station of Agricultural Products in Province Guangdong，Zhongshan Guangdong 528463）

Abstract Based on the pre-treatment of fruits and vegetables samples by QuEChERS method，imidacloprid，acetamiprid，carbendazim and 10 carbamate pesticides in common fruits and vegetables were researched by HPLC-UV-Post column derivatization.Conclusions of detecting methods were that the limits of detection were in the range of 0.003-0.050 mg/kg.The average spiked recoveries ranged from 70.5% to 112.0% with relative standard deviations of 0.46%-8.10%.The calibration curves all had good linear relationships with correlation coefficients 0.998 3-0.999 9.This method is easy to operate，with less organic solvent consumption，accurate and reliable，good accuracy and precision，which is suitable for primary laboratory with HPLC to carry out detection of pesticide residues in fruits and vegetables.

Key words determination of multiple pesticide residues；HPLC；VWD-Post Column Derivatization-FLD；QuEChERS

蔬菜、水果的農(nóng)藥殘留問題日益受到人們關(guān)注，對(duì)農(nóng)殘的監(jiān)測(cè)技術(shù)要求越來越高，許多基層實(shí)驗(yàn)室逐步配置氣相色譜儀和液相色譜儀，按檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)[1-3]進(jìn)行農(nóng)殘測(cè)定，但部分方法前處理效率低，不符合農(nóng)業(yè)生產(chǎn)規(guī)律，過多的廢液、廢料對(duì)環(huán)境不友好。美國(guó)農(nóng)業(yè)部農(nóng)業(yè)研究服務(wù)中心的Anastassi-ades M等開發(fā)了一種快速、簡(jiǎn)便、價(jià)格低廉的預(yù)處理方法用于高質(zhì)量的農(nóng)藥多殘留物分析，簡(jiǎn)稱為QuEChERS法[4]。近年來，國(guó)內(nèi)QuEChERS法的研究運(yùn)用火熱[5-6]，但未見高效液相色譜紫外檢測(cè)串聯(lián)柱后衍生熒光法測(cè)定蔬果農(nóng)殘的相關(guān)報(bào)道。本文參考基層實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)施配備情況，運(yùn)用QuE-ChERS前處理，使用高效液相色譜紫外檢測(cè)串聯(lián)柱后衍生熒光法，對(duì)幾種常見蔬果中13種農(nóng)藥殘留進(jìn)行快速篩查。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

安捷倫1260高效液相色譜儀，配紫外、熒光檢測(cè)器，柱后衍生儀（Pickering，Vector PCX），超純水機(jī)（銳思捷，Spring R20），電子天平，渦旋混合器，高速冷凍離心機(jī)，水浴氮吹儀，食品料理機(jī)。

甲醇、乙腈均為色譜純；QuEChERS萃取試劑包（安捷倫，5982-5650CH）；15 mL分散固相萃取凈化管（安捷倫，5982-5656CH）；0.2 μm尼龍濾膜（安捷倫，5191-4286）；柱后衍生試劑包（Pickering，含水解試劑CB130、OPA稀釋劑CB-910、鄰苯二甲醛OPA、巰基乙醇）；13種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品均購(gòu)自農(nóng)業(yè)部環(huán)境質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 樣品處理。①樣品制備：抽取不少于1 000 g的樣品，將可食部分切碎，混勻于食物料理機(jī)中充分勻漿，分裝保存，制成待測(cè)樣，于-18 ℃冰箱中保存，備用。②樣品提取和凈化：準(zhǔn)確稱取 10.00 g樣品于50 mL離心管中，加 10.0 mL乙腈（提前置于-4 ℃冰箱1～2 h），渦旋混合30 s，加入QuEChERS萃取試劑包，迅速振散混勻，渦旋1 min，8 000 r/min冷凍離心5 min。取6 mL上清液于15 mL分散固相萃取凈化管中，渦旋混合1 min，8 000 r/min離心5 min，取2.00 mL上清液50 ℃水浴氮吹至近干，加入1.00 mL 50%甲醇水混勻，過膜待測(cè)。

1.2.2 儀器條件。色譜柱為Pickering氨基甲酸酯分析專用柱（C8，4.6 mm×250 mm×5 μm，貨號(hào)0846250）；柱溫42 ℃；進(jìn)樣體積10 μL；流速1.2 mL/min。洗脫程序（水%∶甲醇%）為0 min，95%∶5%；1 min，90%∶10%；26 min，30%∶70%；28 min，0%∶100%；30 min，95%∶5%；后運(yùn)行5 min。串聯(lián)方式為色譜柱→紫外檢測(cè)器→柱后衍生儀→熒光檢測(cè)器；紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)270 nm，15.8 min變?yōu)?46 nm，17 min變?yōu)?86 nm；柱后衍生條件為溫度100 ℃，水解試劑和OPA試劑流速均為0.3 mL/min；熒光檢側(cè)器激發(fā)波長(zhǎng)330 nm，發(fā)射波長(zhǎng)465 nm。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制。13種標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇配成混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液，其中氨基甲酸酯類農(nóng)藥濃度為10 mg/L，吡蟲啉、啶蟲脒和多菌靈濃度為50 mg/L，貯存于-18 ℃冰箱中，有效期為6個(gè)月；以氨基甲酸酯類農(nóng)藥濃度計(jì)算，用50%甲醇水稀釋成濃度為0.01、0.02、0.05、0.10、0.20、0.50 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。現(xiàn)配現(xiàn)用，以各色譜峰面積為縱坐標(biāo)、樣品濃度為橫坐標(biāo)，分別進(jìn)行線性回歸處理，外標(biāo)法定量。

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線與檢出限

13種農(nóng)藥在29 min內(nèi)完全分離，響應(yīng)良好（圖1、2），濃度范圍內(nèi)線性良好，以3倍基線噪聲所對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品濃度為儀器檢出限，檢出限低于標(biāo)準(zhǔn)限量[7]，各項(xiàng)試驗(yàn)數(shù)據(jù)見表1。

2.2 回收率和方法精密度

通過在空白樣品（經(jīng)檢測(cè)不含目標(biāo)化合物）中加標(biāo)進(jìn)行回收率和方法精密度測(cè)試。取菜心、結(jié)球白菜、葉用芥菜、普通白菜、葉用萵苣、番茄、葡萄和草莓共8種蔬果的空白樣品，用1.2.3所配的13種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液進(jìn)行加標(biāo)，使樣品吡蟲啉、啶蟲脒、多菌靈含量為0.25、0.05 mg/kg 2個(gè)濃度水平，10種氨基甲酸酯類農(nóng)藥含量為0.5、0.1 mg/kg 2個(gè)水平濃度，每個(gè)水平濃度檢測(cè)3次。取批內(nèi)平均值，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD。番茄樣品的3-羥基克百威和涕滅威有基線干擾，影響定性定量，通過NH2固相萃取小柱凈化后干擾依然存在。部分氨基甲酸酯類農(nóng)藥熱穩(wěn)定性較差，水浴溫度不能過高且氮吹不得過干。

3 結(jié)論

綜上所述，本方法操作簡(jiǎn)便，有機(jī)溶劑用量少，準(zhǔn)確度和精密度良好，適合配備了高效液相色譜儀的基層實(shí)驗(yàn)室對(duì)常見蔬菜水果進(jìn)行13種農(nóng)藥殘留快速篩查。

4 參考文獻(xiàn)

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