右旋雷貝拉唑鈉對大鼠消化性潰瘍的藥效研究

林曉冬，劉 娜，劉 純，鄭曉霞，房紹英，程艷玲，郭秀麗

（1. 山東大學 藥學院，山東 濟南 250001；2. 山東省藥學科學院 新藥評價中心，山東 濟南 250101）

消化性潰瘍?。╬eptic ulcer disease ，PUD）主要發生于胃和十二指腸，是由胃酸、胃蛋白酶自身消化所致的黏膜局限性組織缺損、炎癥與壞死性病變，深達黏膜肌層[1]。公認的PUD的發病機制有：幽門螺桿菌（Helicobacter pylori，Hp）感染、胃酸及胃蛋白酶等損傷因子和黏膜自身保護能力的降低[2-3]。

右旋雷貝拉唑[dexrabeprazole，R-(+)-rabeprazole]是新型苯并咪唑類質子泵抑制劑（proton pump inhibitor，PPI），通過抑制胃酸分泌的限速酶H+, K+-ATP酶（H+, K+-ATPase）起到抑制胃酸的作用。右旋雷貝拉唑是雷貝拉唑旋光異構體的右旋體，雷貝拉唑本身具有受肝臟CYP2C19 基因多態性的影響小、H+, K+-ATP酶亞基結合位點多等優勢[4]。與其他已上市的PPI單一旋光異構體埃索拉唑、右旋蘭索拉唑、左旋泮托拉唑相比，右旋雷貝拉唑具有個體差異小、起效更快、藥效持久等優勢[5]。因此右旋雷貝拉唑有可能成為治療PUD的首選藥物之一。

已有研究表明，右旋雷貝拉唑鈉對胃食管反流病、非甾體抗炎藥引起的胃潰瘍有顯著的抑制作用，是主要藥效活性成分[6-7]。我們采用大鼠潰瘍模型對右旋雷貝拉唑鈉、左旋雷貝拉唑鈉及消旋雷貝拉唑鈉治療消化性潰瘍的作用進行了對比研究，為右旋雷貝拉唑鈉相關臨床研究和開發提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器

AY220型電子分析天平（日本島津公司）；YP3001N型電子天平，JY1002型電子天平（上海精密科學儀器公司）。

1.2 藥物和試劑

注射用右旋雷貝拉唑鈉（山東省藥學科學院，批號：130403）；注射用左旋雷貝拉唑鈉（山東省藥學科學院，批號：20130401），注射用雷貝拉唑鈉（山東省藥學科學院，批號120101）。0.9 %氯化鈉注射液（辰欣藥業，批號1212055301）；冰乙酸（天津廣成，批號20120409）；戊巴比妥鈉（德國默克公司，批號100808）。

1.3 實驗動物和環境設施

SPF級CD（SD）大鼠210 只，雌雄各半，北京維通利華實驗動物技術有限公司提供。飼養環境：SPF級，室溫20～25 ℃，日溫差≤3 ℃，換氣次數10～20次/h，濕度40 %～70 %，壓強梯度20～50 Pa，晝夜明暗交替照明12 h/12 h。

2 方法

2.1 大鼠胃酸分泌功能

健康CD（SD）大鼠70只，禁食不禁水24 h后，按性別、體重隨機分為7組，即右旋雷貝拉唑鈉0.9，1.8，3.6 mg/kg組，左旋雷貝拉唑鈉對照組，雷貝拉唑鈉對照組，模型對照組，假手術組，每組10只，雌雄各5只。

造模前各組大鼠經尾靜脈注射相應的藥物溶液1次（5 ml/kg），模型對照組和假手術組同法給予生理鹽水。給藥完畢1 h后，各組大鼠以1 %戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，將動物仰臥固定，腹部手術區碘伏消毒，醫用酒精脫碘。取腹部劍突下正中切口，鈍頭鑷子將胃引出腹腔，避開血管，在幽門和十二指腸的交界處穿線將幽門結扎。將胃放回原位，縫合腹壁切口，碘伏消毒。術后將動物放回飼養籠，禁食禁水5 h后，麻醉處死大鼠，摘取全胃，收集胃液，3000 r/min離心20 min。取全部上清，量其體積，酸堿滴定法測定胃總酸含量，計算胃酸總分泌量、pH值及胃酸分泌抑制率[8-9]。

2.2 大鼠幽門結扎型胃潰瘍

健康CD（SD）大鼠70只，禁食不禁水54 h后，分組、給藥、手術，方法同2.1項。術后禁食禁水18 h后，麻醉處死各組大鼠。摘取全胃，沿胃大彎剪開胃腔，以生理鹽水輕柔漂洗后，測量判定胃黏膜面潰瘍程度，計算胃潰瘍指數、胃潰瘍抑制率。

胃潰瘍指數評分采用Guth法[10]：斑點糜爛計1分，糜爛長度<1 mm計2分，1～2 mm計3分，2～4 mm計4分，＞4 mm計5分。寬度＞1 mm時，分值×2。胃潰瘍抑制率=（模型對照組潰瘍指數-給藥組潰瘍指數）/模型對照組潰瘍指數×100 %。

2.3 大鼠乙酸型十二指腸潰瘍

健康CD（SD）大鼠70只，禁食不禁水24 h后，分組，方法同2.1項。動物麻醉后，仰臥位固定于手術板，腹部手術區碘伏消毒，醫用酒精脫碘。劍突下1 cm正中切口，暴露十二指腸。將一內徑5 mm的醫用級聚丙烯管的光滑切面緊貼十二指腸起始部漿膜面，向管內注入70 %乙酸60 μl，30 s后移出聚丙烯管，迅速用無菌吸水棉吸去殘留的乙酸，用10 ml生理鹽水沖洗并引流后，縫合腹壁。各組大鼠經尾靜脈注射相應的藥物溶液（5 ml/kg），模型對照組和假手術組同法給予生理鹽水。每天給藥1 次，連續7 d。

末次給藥2 h后，麻醉處死，取出胃及十二指腸上部。從乙酸貼敷的對面縱行剖開十二指腸，以生理鹽水輕柔漂洗后，測量十二指腸潰瘍的長徑和短徑，計算十二指腸潰瘍面積、十二指腸潰瘍抑制率。十二指腸潰瘍面積=π×長徑×短徑/4[11]。十二指腸潰瘍抑制率=（模型對照組潰瘍面積-給藥組潰瘍面積）/模型對照組潰瘍面積×100 %。

2.4 數據統計

試驗數據使用SPSS 19.0統計軟件分析，以±s表示，數據服從正態分布，且方差齊，采用LSD檢驗。P<0.05認為有統計學意義。

3 結果

3.1 胃酸總分泌量、pH值及胃酸分泌抑制率

與模型組比較，右旋雷貝拉唑鈉1.8，3.6 mg/kg組和雷貝拉唑鈉3.6 mg/kg組胃酸總分泌量均顯著減少（P<0.01），右旋雷貝拉唑鈉1.8，3.6 mg/kg組和雷貝拉唑鈉3.6 mg/kg組胃液pH值顯著升高（P<0.05，P<0.01）。本試驗條件下，假手術組個體動物胃酸分泌量過少，本測試方法不適用。右旋雷貝拉唑鈉1.8 mg/kg組胃酸總分泌量、胃液pH均優于左旋雷貝拉唑鈉1.8 mg/kg組，但差異無統計學意義（P＞0.05）。右旋雷貝拉唑鈉3.6 mg/kg組胃酸總分泌量、胃液pH均優于雷貝拉唑鈉3.6 mg/kg組，但差異無統計學意義（P＞0.05）。胃酸分泌抑制率由高到低順序為：右旋雷貝拉唑鈉3.6 mg/kg組＞雷貝拉唑鈉3.6 mg/kg組＞右旋雷貝拉唑鈉1.8 mg/kg組＞右旋雷貝拉唑鈉0.9 mg/kg組＞左旋雷貝拉唑鈉1.8 mg/kg組＞模型對照組。具體結果見表1。

表1 右旋雷貝拉唑鈉對單純幽門結扎大鼠胃酸分泌的影響（±s，n=10）

表1 右旋雷貝拉唑鈉對單純幽門結扎大鼠胃酸分泌的影響（±s，n=10）

注：*P<0.05，** P<0.01 vs 模型組

/mg·kg-1胃酸總分泌量/μmol·h-1pH值胃酸分泌抑制率/%假手術組 － － － －模型對照組 － 93.12±29.83 1.02±0.11 0.00右旋雷貝拉唑鈉組組別 劑量0.9 65.22±49.51 1.12±0.14 29.96 1.8 50.02±28.25** 1.17±0.16* 46.28 3.6 39.32±32.99** 1.30±0.19** 57.77 1.8 70.38±34.44 1.05±0.10 24.42雷貝拉唑鈉組 3.6 46.24±31.38** 1.24±0.21** 50.34左旋雷貝拉唑鈉組

3.2 胃潰瘍指數、胃潰瘍抑制率

幽門結扎型胃潰瘍大鼠單次尾靜脈注射給藥5 h后，與模型組比較，右旋雷貝拉唑鈉1.8、3.6 mg/kg組和雷貝拉唑鈉3.6 mg/kg組潰瘍指數顯著降低（P<0.05，P<0.01）。右旋雷貝拉唑鈉1.8 mg/kg組胃潰瘍指數、胃潰瘍抑制率均優于左旋雷貝拉唑鈉1.8 mg/kg組。右旋雷貝拉唑鈉3.6 mg/kg組胃潰瘍指數、胃潰瘍抑制率均優于雷貝拉唑鈉3.6 mg/kg組。胃潰瘍抑制率由高到低順序為：右旋雷貝拉唑鈉3.6 mg/kg組＞雷貝拉唑鈉3.6 mg/kg組＞右旋雷貝拉唑鈉1.8 mg/kg組＞左旋雷貝拉唑鈉1.8 mg/kg組＞右旋雷貝拉唑鈉0.9 mg/kg組＞模型對照組。具體結果見表2。

表2 右旋雷貝拉唑鈉對大鼠胃潰瘍的影響（±s，n=10）

表2 右旋雷貝拉唑鈉對大鼠胃潰瘍的影響（±s，n=10）

注：*P<0.05，** P<0.01 vs 模型組

/mg·kg-1胃潰瘍指數胃潰瘍抑制率/%假手術組 － － －模型對照組 － 44.1±13.65 0.00右旋雷貝拉唑鈉組組別 劑量0.9 35.7±18.06 19.05 1.8 23.3±11.64* 47.17 3.6 15.6± 9.03** 64.63左旋雷貝拉唑鈉組 1.8 33.3±17.04 24.49雷貝拉唑鈉組 3.6 23.0±8.27* 47.85

3.3 十二指腸潰瘍面積、十二指腸潰瘍抑制率

乙酸型十二指腸潰瘍大鼠經尾靜脈注射給藥7 d后，與模型組比較，右旋雷貝拉唑鈉1.8，3.6 mg/kg組、雷貝拉唑鈉3.6 mg/kg組的十二指腸潰瘍面積顯著降低（P<0.01）。與左旋雷貝拉唑鈉1.8 mg/kg組比較，右旋雷貝拉唑鈉1.8 mg/kg組十二指腸潰瘍面積顯著降低（P<0.01），十二指腸潰瘍抑制率明顯升高。右旋雷貝拉唑鈉3.6 mg/kg組十二指腸潰瘍指數、十二指腸潰瘍抑制率均優于雷貝拉唑鈉3.6 mg/kg組。十二指腸潰瘍抑制率由高到低順序為：右旋雷貝拉唑鈉3.6 mg/kg組＞雷貝拉唑鈉3.6 mg/kg組＞右旋雷貝拉唑鈉1.8 mg/kg組＞右旋雷貝拉唑鈉0.9 mg/kg組＞左旋雷貝拉唑鈉1.8 mg/kg組＞模型對照組。具體結果見表3。

表3 右旋雷貝拉唑鈉對大鼠十二指腸潰瘍的影響（ ±s，n=10）

表3 右旋雷貝拉唑鈉對大鼠十二指腸潰瘍的影響（ ±s，n=10）

注：** P<0.01 vs 模型組；△△P<0.01 vs 左旋雷貝拉唑鈉組

組別 劑量/mg·kg-1十二指腸潰瘍面積/mm2十二指腸潰瘍抑制率/%假手術組 － － －模型對照組 － 6.04±1.37 0.00右旋雷貝拉唑鈉組0.9 4.98±1.33 17.63 1.8 4.09±0.86**△△ 32.42 3.6 2.82±0.63** 53.34左旋雷貝拉唑鈉組 1.8 5.81±1.94 3.88雷貝拉唑鈉組 3.6 3.90±0.97** 35.51

4 討論

H+, K+-ATP酶位于胃壁黏膜層，能以大約每小時1 %的速度重新生成，每天可生成25 %，半衰期約50 h，由于H+, K+-ATP酶是胃酸分泌的限速酶，因此H+,K+-ATP酶抑制劑是目前最有效的抑制胃酸的藥物[12]。PPI是目前治療Hp感染、胃食管反流病、吻合口潰瘍、慢性胃炎和卓-艾綜合征等胃酸相關性疾病的首選藥物和重要的診斷手段[13-14]，對非甾體抗炎藥引起的胃潰瘍同樣有效[15]。

研究表明，雷貝拉唑鈉主要通過非酶途徑代謝，其異構體的大鼠和犬體內藥動學參數均無性別差異，且無構型轉化[16-17]。不同異構體在犬體內血藥濃度-時間曲線存在差異[18]，其原因可能是細胞色素P450 CYP2C18、CYP2C21的基因型在不同種屬間存在差異所致[19-20]。相比左旋雷貝拉唑，CYP2C19基因多態性對右旋雷貝拉唑的影響更大[21]。右旋雷貝拉唑對H+, K+-ATP酶活性抑制作用強于左旋雷貝拉唑，且在水應激潰瘍模型、吲哚美辛誘導潰瘍模型和幽門結扎模型中具有優勢[22]。

本研究結果表明，右旋雷貝拉唑鈉1.8，3.6 mg/kg通過抑制胃酸分泌、減少胃酸總分泌量、升高胃液pH，對胃潰瘍、十二指腸潰瘍均具有抑制作用。雷貝拉唑鈉臨床已知的不良反應有：腹瀉、頭痛、鼻炎、咽炎、惡心、腹痛、血清胃泌素水平升高等，但組織學改變不顯著，腎功能損害和輕中度肝功能損害無需調整劑量[23]。由于右旋雷貝拉唑鈉潛在臨床的不良反應和藥物相互作用的報道較少，應得到重視。在仿制藥臨床前藥理毒理學評價過程中，針對藥物的自身特點具體問題具體分析，結合藥物臨床信息進行評估和預測同樣具有十分重要的意義[24]。