多西他賽注射液在不同pH溶媒中的穩定性研究

鄧玉曉，劉葵葵，趙思太，孫晉瑞

（山東省藥學科學院 山東省化學藥物重點實驗室，山東 濟南 250101）

多西他賽（docetaxel）又名泰索帝、多西紫杉醇，主要用于治療晚期乳腺癌、卵巢癌、非小細胞肺癌，對頭頸部癌、小細胞肺癌、胃癌、胰腺癌、黑色素瘤等也有一定療效[1]。多西他賽屬紫杉烷類抗腫瘤藥，它通過加強微管蛋白聚合作用和抑制微管解聚作用，形成穩定的非功能性微管束，破壞腫瘤細胞的有絲分裂，達到抗腫瘤作用[2-3]。多西他賽的細胞內濃度是紫杉醇的4倍，且在細胞內滯留時間更長，因此具有更強的抗腫瘤活性[4]。

目前，國內外多西他賽的說明書均標示配制好的多西他賽注射用溶液應在室溫及正常光線下，于4 h內使用。多西他賽在酸性或堿性條件下結構會發生開環或重排[5]，而傳統溶媒0.9 %氯化鈉注射液和5 %葡萄糖注射液的pH均小于5.5[6]，經檢測，0.9 %氯化鈉注射液的pH為5.40左右，5 %葡萄糖注射液的pH為4.0左右，導致藥物溶液穩定性差。鑒于溶媒的pH對多西他賽的溶解度和穩定性的影響和對臨床用藥造成的不便，特設計本實驗內容，意在考察多西他賽注射液與不同pH的溶媒配伍后的穩定性，為多西他賽注射液的溶媒要求及溶媒的選擇提供一些實驗依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器

LC-20AT高效液相色譜儀（日本島津公司）；SPD-M20A二極管陣列檢測器（日本島津公司）；PB-10精密酸度計（賽多利斯）。

1.2 藥品

多西他賽對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號100666-201202）；多西他賽注射液（齊魯制藥，批號6L0062C50，規格1 ml:40 mg）；0.9 %氯化鈉注射液（辰欣藥業，批號1612240564，規格500 ml:4.5 g）；5 %葡萄糖注射液（山東齊都藥業，批號2C1611102，規格500 ml:25 g）；濃鹽酸（國藥集團，批號20160301，含量36.0 %～38.0 %）；碳酸氫鈉（國藥集團，AR，批號20161215）；其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 溶液的制備[7-8]

2.1.1 不同pH 0.9 %氯化鈉溶液和5 %葡萄糖溶液的制備 分別取0.9 %氯化鈉注射液和5 %葡萄糖注射液各7份，每份50 ml，用3.6 %稀鹽酸，5 %碳酸氫鈉水溶液分別調節pH至2.50，4.00，5.40，6.50，7.50，9.00，10.00。

2.1.2 陰性對照溶液的制備 取多西他賽注射液專用溶劑分別經不同pH的0.9 %氯化鈉溶液或5 %葡萄糖溶液稀釋，作為陰性對照溶液。

2.1.3 對照品溶液 精密稱取多西他賽對照品6.0 mg，置入10 ml量瓶，用流動相定容，得濃度為0.6 mg/ml的多西他賽對照品溶液。

2.1.4 供試品溶液 根據多西他賽注射液的說明書要求和臨床用藥情況，設計溶液配制方法：精密稱取多西他賽注射液60.0 mg，用多西他賽注射液專用溶媒溶解后，置入100 ml量瓶，用不同pH的0.9 %氯化鈉溶液或5 %葡萄糖溶液定容，得濃度為0.6 mg/ml的多西他賽供試品溶液

2.2 含量測定[9-10]

2.2.1 色譜條件及專屬性 色譜柱：Intersil ODS-3；流動相：乙腈/水=3/2；流速：1.0 ml/min；檢測波長：230 nm；柱溫：25 ℃；進樣量：20 μl。

在上述色譜條件下，用多西他賽專用溶劑、對照品溶液和供試品溶液分別進樣檢測，理論板數以多西他賽峰計算不低于3000，拖尾因子為1.03。色譜圖見圖1。由圖可見，多西他賽的保留時間為7.3 min，多西他賽專用溶劑不影響多西他賽的含量檢測。

圖1 陰性對照溶液、多西他賽對照品溶液、供試品溶液的HPLC譜圖

2.2.2 標準曲線的制備 精密量取多西他賽對照品溶液1 ml，置入2 ml量瓶，用流動相定容，配成濃度為300 μg/ml的對照品溶液，精密稱取多西他賽對照品4.0 mg，置入10 ml量瓶，用流動相定容，然后倍半稀釋，配成濃度為400，200，100 μg/ml的對照品溶液，分別按2.2.1項色譜條件進樣并記錄色譜。以多西他賽對照品濃度C（μg/ml）對峰面積A作線性回歸?；貧w方程為A=16 566C-9 017（R2=0.9996，n=5），多西他賽在100～600 μg/ml的濃度范圍內線性關系良好。

2.2.3 精密度試驗 取多西他賽對照品溶液低（100 μg/ml）、中（300 μg/ml）、高（600 μg/ml）3個濃度質量控制（QC）樣品，平行進行5樣本分析，連續測定3 d，根據隨行的標準曲線方程，計算QC樣品的測得濃度，計算日內和日間精密度。日內精密度RSD為0.74 %，日間精密度RSD為1.35 %。表明該方法的精密度良好。

2.2.4 回收率試驗 取多西他賽供試品溶液分別倍半稀釋，得不同pH的0.9 %氯化鈉溶液或5 %葡萄糖溶液的低（100 μg/ml）、中（300 μg/ml）、高（600 μg/ml）3個濃度QC樣品，平行進行5樣本分析，測定藥物峰面積，代入隨行的標準曲線方程中計算測得濃度，與實際濃度進行比較求得回收率。結果表明，該方法的回收率在98.12 %～101.54 %內，RSD小于2 %，表明該方法穩定可靠，符合要求。

2.2.5 穩定性考察 在室溫正常光線條件下，多西他賽注射液與不同pH的0.9 %氯化鈉溶液或5 %葡萄糖溶液配伍后，分別于 0，2，4，6，8，10，12 h取樣，按2.2項色譜條件進樣，分別精密量取供試品溶液與對照品溶液20 μl進樣，記錄色譜圖峰面積，按外標法計算含量。以0 h時的多西他賽含量為100 %，計算多西他賽百分含量隨時間的變化。結果見表1，表2。

表1 多西他賽注射液與不同pH 0.9 %氯化鈉溶液配伍后的穩定性實驗結果/%

表2 多西他賽注射液與不同pH 5 %葡萄糖溶液配伍后的穩定性實驗結果/%

由表1、表2可見，pH為6.50和7.50時，多西他賽注射液與0.9 %氯化鈉溶液配伍后，放置12 h后其含量下降RSD值分別為2.50 %和2.56 %（RSD＞2 %）；與5 %葡萄糖溶液配伍后，放置12 h后其含量下降RSD值分別為2.50 %和2.55 %（RSD＞2%）。結果表明，室溫正常光線條件下，pH為6.50和7.50時，多西他賽含量在配制后12 h才有明顯下降。

pH為5.40和9.00時，多西他賽注射液與0.9 %氯化鈉溶液配伍后，放置8 h后其含量下降RSD值分別為2.32 %和2.45 %（RSD＞2 %）；與5 %葡萄糖溶液配伍后，放置8 h后其含量下降RSD值分別為2.34 %和2.46 %（RSD＞2 %）。結果表明，室溫正常光線條件下，pH為5.40和9.00時，多西他賽含量在配置后8 h有明顯下降。

在H為4.00和10.00時，多西他賽注射液與0.9 %氯化鈉溶液配伍后，放置6 h后其含量下降RSD值分別為2.52 %和2.41 %（RSD＞2 %）；與5 %葡萄糖溶液配伍后，放置6 h后其含量下降RSD值分別為2.50 %和2.40 %（RSD＞2 %）。結果表明，室溫正常光線條件下，pH為4.00和10.00時，多西他賽含量在配置后6 h即有明顯下降。

pH為2.50時，多西他賽注射液與0.9 %氯化鈉溶液配伍后，放置4 h后其含量下降RSD值為2.52 %（RSD＞2 %）；與5 %葡萄糖溶液配伍后，放置4 h后其含量下降RSD值為2.53 %（RSD＞2 %）。結果表明，室溫正常光線條件下，pH為2.50時，多西他賽含量在配置后4 h即有明顯下降。

3 討論

我們參考了相關文獻[7-10]，考察了不同比例乙腈-水，甲醇-水，甲醇-乙腈-水系統作為流動相時色譜峰情況，結果顯示，采用乙腈-水（3:2）為流動相，色譜峰對稱性好，達峰時間適當，條件穩定，主峰完全分離；波長選擇方面，多西他賽在190，230 nm處均有最大吸收，為避免溶劑的末端吸收，選擇230 nm為檢測波長。

綜上所述，由于多西他賽的結構原因，溶媒的pH會對多西他賽的溶解度和穩定性造成較大影響。臨床應用過程中，選擇pH 為6.50～7.50的溶媒或對現有溶媒的pH進行適當的調整使其pH位于6.50～7.50之間，更有利于多西他賽注射液配伍后的存放與使用。