鼻咽癌局部微環境中腫瘤浸潤炎癥細胞亞群分布及密度與臨床病理特征相關性分析

汪文利

鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是國內比較常見的一種惡性腫瘤疾病，其發病部位一般在鼻咽腔側壁或者頂部位置。NPC發病機制比較復雜，研究表明除去環境和遺傳等因素，NPC的發病與愛波斯坦-巴爾病毒(Epstein-Barr Virus,EBV)感染密切相關[1-2]。NPC是一種有著較強侵襲和轉移能力的惡性腫瘤，同時其發病初期較為隱蔽，導致大部分患者在NPC晚期時才確診。近年來隨著生物學的不斷發展，大量的研究證實腫瘤局部微環境在腫瘤病情的發生發展過程中有著重要的作用。腫瘤微環境是指腫瘤病變細胞與正常組織中間的位置，其復雜的構成和腫瘤細胞間的相互作用，是目前國內外的研究熱點[3-4]。而腫瘤性疾病和慢性炎癥已經被大量研究所證實兩者存在密切的聯系，本次研究通過分析NPC局部微環境中腫瘤浸潤炎癥細胞亞群分布及密度與臨床病理特征的相關性，來為NPC的臨床診療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年3月至2017年3月間，于本院住院并接受治療的NPC患者共186例，其中男性121例，女性65例，平均年齡(44.3±8.7)歲。納入標準：符合NPC診斷標準的患者[5]；自愿加入本次研究的患者。 排除標準：有過放化療史的患者；合并伴有其他腫瘤疾病的患者；不愿加入本次研究的患者。

1.2 研究方法

將準備好的石蠟標本，取3 μm切片，在常規脫蠟操作后，采用免疫組化法檢測各炎癥細胞亞群的分布和浸潤情況。所有T淋巴細胞使用CD3標記，B淋巴細胞采用CD20標記，細胞毒性淋巴細胞采用CD8標記，調節性T細胞采用FOXP3標記，NK細胞采用CD56標記，CD1a和CD83分別標記未成熟和成熟樹突狀細胞，NE標記中性粒細胞，肥大細胞則采用類胰蛋白酶(Tryptase)進行標記。為檢測各個細胞亞群的密度，首先選出陽性染色明顯的區域，并選出其中有代表性的5個不重復區域，采用40倍物鏡攝取視野并計算視野內所有陽性細胞的數量，然后根據5個觀察結果取出平均值為細胞亞群密度。根據結果采用Spearman相關性分析法分析各淋巴細胞亞群之間的相關性，進一步分析其浸潤密度與NPC各個臨床病理特征的相關性，包括病理分型、區域淋巴結轉移情況臨床分期以及局部腫瘤侵犯分級。

1.3 統計方法

2 結果

2.1 NPC患者炎癥細胞亞群的分布情況

分析免疫組化法檢測結果發現，在NPC組織中，CD3和CD8多呈圓形，在腫瘤灶巢和間質內出現了大量浸潤；CD20則大多為圓形和梭形，多分布于NPC腫瘤間質；CD56并沒有大量浸潤，其一般分布間質內，也以圓形和梭形為主；FOXP3細胞核以圓形為主，并且在間質和癌巢內出現了大量的浸潤；CD1a主要存在于癌巢內，沒有規則的形態，CD83則多存在于間質內，同樣沒有規則的形態；NE和Tryptase主要存在于腫瘤間質，以圓形和梭形為主。

2.2 炎癥細胞亞群浸潤密度分析

本次研究中，所有患者都檢測到了CD3、CD8、FOXP3、CD20、NE和Tryptase細胞浸潤，CD3是NPC微環境主要浸潤的炎癥細胞，而CD8、FOXP3、CD20和NE在NPC微環境組織中浸潤明顯，CD1a、CD83、CD56和Tryptase浸潤則比較少。見表1。

表1 NPC組織中炎癥細胞浸潤密度

2.3 炎癥細胞亞群相關性

通過Spesrman相關性分析發現，CD3、CD8、FOXP3和CD20 4種淋巴細胞亞群兩兩之間都存在顯著的正相關(P<0.01)；NE和CD3、CD8、FOXP3、tryptase細胞亞群之間顯著正相關(P<0.01)；CD56和CD3、CD8、CD20細胞亞群間顯著正相關(P<0.01)；其中CD3和CD83、CD8、CD20之間關系密切(P<0.01)。見表2。

2.4 NPC臨床病癥與炎癥細胞亞群相關性

分析各炎癥細胞亞群和病例特征之間相關性發現，NPC腫瘤分型與CD3、CD20、NE、CD83細胞存在相關(P<0.05)；區域淋巴結轉移情況及臨床分期與FOXP3、NE和tryptase存在正相關(P<0.05)；NFC局部腫瘤侵犯分級與CD56呈負相關(P<0.05)。見表3。

表2 NPC局部微環境各個炎癥細胞亞群相關性分析

表3 NPC臨床病癥與炎癥細胞亞群相關性(個/高倍視野)

3 討論

目前，NPC的治療以放射療法為主。統計表明，放射治療在早期NPC患者的臨床治療中，5年生存率達到了80%以上，取得了較為理想的治療效果，但是在晚期NPC的治療中，5年生存率只有60%左右，而且一旦NPC患者病情出現遠處轉移，就必須采用具有較大副作用的化療療法進行治療[6-7]。隨著醫學水平的不斷發展，大量研究發現，腫瘤局部會出現免疫抑制環境，而免疫抑制環境會導致患者免疫系統失去抗腫瘤功能，同時炎癥在腫瘤病情的發展中繼續起到促進作用[8-9]。因此，通過對NPC腫瘤細胞局部微環境中炎癥細胞亞群的研究和分析，對于我們認識NPC的發病機制和發病過程、提高NPC的治療效果有著重要的意義。

腫瘤微環境作為醫學界研究的重點和熱點，被發現在腫瘤細胞的生長、免疫逃逸以及轉移等方面都發揮著重要的作用，而腫瘤微環境中的炎癥反應是其一大基本特征。有研究表明，炎癥反應能夠產生大量促進腫瘤細胞生長和轉移的細胞因子[10]。本次研究發現CD3+T細胞是NPC微環境主要浸潤的炎癥細胞，而CD20+B淋巴細胞、FOXP3+Treg和中性粒細胞以及CD8+CTL細胞僅次于CD3+T細胞，其他如肥大細胞、樹突狀細胞和CD56+NK細胞則最少。中性粒細胞、肥大細胞和各種淋巴細胞間均存在著正相關，這與以往的研究結果一致。調節性T細胞能夠促進腫瘤細胞的免疫逃逸，而腫瘤微環境中的免疫抑制因子能夠刺激并提高CD8+CTL中負性刺激因子的表達，導致其對腫瘤細胞的殺傷力大打折扣[11]。國內關于Treg細胞的研究表明其能在腫瘤患者體內具有免疫抑制作用，這與本次研究結果一致，其與NPC的臨床分期存在正相關，其免疫抑制作用得到了證實。本次研究發現，NK細胞在NPC組織中少量浸潤，其數量和NPC腫瘤的局部侵犯分級存在負相關，而以往的研究表明NK細胞具有免疫監視等重要作用，其抗腫瘤作用得到了證實。本次研究中發現未成熟樹突狀細胞在NPC組織中明顯更多，而隨著其臨床分期的提高，其浸潤開始降低，這與國內其他研究結果一致[12]。而對肥大細胞的統計分析發現，其腫瘤浸潤會有助于腫瘤細胞的生長和轉移，加速NPC的病情發展。

綜上所述，鼻咽癌微環境中腫瘤浸潤炎癥細胞亞群之間普遍存在著正相關，其中肥大細胞和中性粒細胞在鼻咽癌間質中浸潤普遍，其浸潤密度越高，鼻咽癌病情越嚴重。鼻咽癌微環境浸潤炎癥細胞亞群在鼻咽癌的病情發展過程中起到促進作用，這些特性將會有利于臨床治療鼻咽癌尋找新的治療靶點。