杜德燕,方鵬飛,朱冬梅,鄒智坤,嚴 成,郭健寶
(華派生物工程集團有限公司,四川成都641400)
豬支原體肺炎(Mycoplasmal pneumonia of suline,MPS)是由豬肺炎支原體(Mycoplasmahyopneumoniae,M.hyopneumonic)引起的一種豬的慢性呼吸道傳染病,臨床表現為慢性非生產性咳嗽。該病在我國常稱為豬喘氣病(或氣喘病),國外常稱為豬地方性流行性肺炎,這種病在世界廣泛流行,特別是集約化生產程度高的國家和地區,給全球養豬業帶來了巨大的經濟損失。豬支原體肺炎造成的經濟損失與日體重(daily weight gain,DWG)的降低、死亡率的增加、飼料利用率的下降以及給藥治療導致的成本增加等有關。同時該病也增加了其他呼吸道病原體的易感性,比如多殺性巴氏桿菌、胸膜肺炎放線桿菌、化膿隱秘桿菌和豬鏈球菌等,同時豬肺炎支原體也是豬呼吸道疾病綜合征(porcine respiratory disease complex,PRDC)的主要病原體。
在豬屠宰場能觀察到肺炎是最常見的肺部病變之一,患病率從19%到79%不等,導致這些肺損傷的最主要細菌性呼吸道病原體之一就是豬肺炎支原體,豬肺炎支原體在肺臟具有較高的繁殖力和能夠誘導較為嚴重的炎癥過程,無數的豬肺炎支原體攻毒試驗證明,在無并發癥感染的情況下,豬支原體肺炎的肺炎病變范圍主要集中在左右肺的尖、心、膈葉的前三分之一和中間葉,眼觀可見有紫紅色至灰白色的呈橡皮樣的實變結節,從肺臟切面上看,肺實質顏色相對均一。當然如果繼發了其他病原菌感染,肺炎病變則較復雜。豬支原體肺炎引起的豬肺炎病變不僅影響著豬的呼吸系統,還影響著平均日體重的增加,有研究報告顯示,由豬支原體肺炎引起的肺炎每10%病變區域可以導致體重少增加23~37 g/d,進而影響到每頭豬的利潤率[1-3]??傊?,有相當多的研究顯示,肺炎病變影響著體重的增加,為驗證兩者的關系,本試驗將免疫與非免試驗豬的肺炎病變和體重之間相關性進行探討,也為豬肺炎支原體疫苗的合理評價提供參考。
1.1 試驗分組 102頭14日齡的健康易感仔豬由四川省華派生物制藥有限公司定點豬場提供。所有試驗豬均為豬呼吸道疾病綜合征、豬偽狂犬病、豬瘟靜脈血抗原陰性豬,副豬嗜血桿菌、支原體肺炎、傳染性胸膜肺炎母源抗體陰性豬,已觀察3 d,完全健康。將試驗豬隨機分為12組,其中10組為免疫組各9頭,分別免疫不同廠家的疫苗,另外2組分別為空白對照組和攻毒對照組各6頭,各組試驗豬嚴格隔離飼養。
1.2 試驗設計 免疫組的試驗豬14日齡首免0.5
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煙曲霉在自然界廣泛存在,潮濕環境有利于霉菌繁殖,環境中存在大量霉菌孢子,可以通過飼料和空氣侵入體內。機體低抗力正常情況下,不會繁殖。企鵝由南極引入溫帶飼養,飼養環境潮濕,企鵝年齡較大(已飼養17年)導致免疫力低下,所以在肺臟、氣囊等處繁殖,出現霉菌病變。
頭份,28日齡按相同的方式和劑量進行二免,二免后4周進行攻毒試驗,攻毒方法為所有免疫豬和攻毒對照豬均進行氣管內接種豬支原體肺炎濟南系攻強毒凍干肺組織毒100MID,攻毒后對臨床癥狀進行觀察記錄,連續25~30 d后剖殺,觀察肺部病變。
毒試驗豬每天觀察2次,每次15 min,監測范圍包括總體健康狀況、活動情況、食欲和咳嗽等方面。觀察記錄標記為0(沒有咳嗽),1(追趕時輕度咳嗽)、2(休息時輕度咳嗽)、3(追趕時溫和咳嗽)、4(休息時溫和咳嗽)、5(追趕時嚴重咳嗽)、6(休息時嚴重咳嗽),計算每天的累積咳嗽情況和平均咳嗽情況,試驗豬分別在免疫前、攻毒前、剖殺前稱重。剖殺后用Goodwin氏55分法記分法對肺部病變進行評分,計算肺炎病變減少率。
肺炎病變減少率=(對照豬肺炎幾何平均分-免疫豬肺炎幾何平均分)/對照豬肺炎幾何平均分×100%。
評分和評價標準:評分標準為Goodwin氏55分法記分,依據攻毒后對肺部各肺葉的病變程度,全程由一人進行打分,避免了系統誤差。
評分標準:采用濟南系強毒對攻毒后各組進行評判時,要求免疫組試驗豬的肺炎病變減少率應不低于60%,方能判定為合格。病變減少率越高,表明抵抗強毒的能力越強。
2.1 咳嗽 在96頭免疫組和攻毒對照組的試驗豬中,只有49頭發生了咳嗽,免疫組中,B組有1/9頭追趕時有輕度咳嗽,H組有2/9頭追趕時有輕度咳嗽,其余免疫組的咳嗽頭數和咳嗽指數均較這兩組高,而攻毒對照組所有試驗豬6/6頭均出現咳嗽、氣喘、食欲下降等癥狀,在觀察期內出現咳嗽的試驗豬中,最早的在攻毒后7 d便可觀察到,但也有試驗豬在攻毒后25 d才觀察到咳嗽等臨床癥狀。各試驗組咳嗽癥狀的平均計分見中插彩版圖1。
2.2 體重 從統計數據可以得出,各試驗組豬的基礎體重均在4 kg左右,但經過免疫和攻毒后,各組差異較顯著,見圖2。在攻毒前,A組、B組、C組、D組、F組、E組、G組、H組、J組、空白組平均體重均能達到10 kg,但B組、H組、E組比其他組增重效果更明顯。
在攻擊強毒后,由于受到強毒對健康狀況的不同影響,各組體重表現出明顯差異,僅B組、H組、J組和空白對照組的體重平均值超過15 kg,其余組均受到較為嚴重的影響,其中B組和H組兩組的體重情況基本一致,超過空白對照組。
圖2 各試驗組3個時間點的平均體重
2.3 肺炎病變 攻毒后26 d,將所有試驗豬進行剖殺,觀察肺部病變,病變主要集中在肺的尖葉、心葉、膈葉的前三分之一以及中間葉,其中右尖葉、右心葉和左心葉病變率又較其他4個部位更高,表現為實質樣病變,如“肉樣變”、“胰樣變”。將肺炎病變按Goodwin氏55分法記分法評分,計算出了每個免疫組的肺炎病變減少率,從圖3柱狀統計圖可以看出,B組的肺炎病變減少率最高,達72.3%,H組次之,為69.9%,說明兩組在肺炎病變減少率上相差不大。其余8組肺炎病變減少率均在60%以下,J組比其他組稍好,E組肺炎病變減少率最低,只有29.1%。

圖3 各免疫組肺炎病變減少率與攻毒后平均增重情況
2.4 肺炎病變與臨床參數比較 在近1個月的攻毒觀察期內,從圖2可以看出,每個試驗組的體重差異明顯,從圖3可以看出,10個免疫組的平均肺炎病變減少率與平均增重之間存在相關性,B組肺炎病變減少率和平均增重量最高,H組均次之,兩者的肺炎病變減少率在70%左右,平均增重在8 kg以上;肺炎病變減少率在60%以下的試驗組,其平均增重也在7 kg以下,J組的兩項較其他組高,而A組、C組、D組、I組的肺炎病變較少率介于40%~50%之間時,其平均增重在4 kg左右。E組、F組、G組肺炎病變較少率在40%或以下,平均增重在3 kg或以下。
將所有免疫組和攻毒對照組的肺炎病變情況和體重增加情況進行比較分析,見圖4。在25 d的攻毒觀察期內,體重增加4 kg以下的,其肺炎病變大多在30分以上;而體重增加6.5 kg以上的,其肺炎病變評分大多在20分以下,從圖4的整體趨勢來看,體重增加量越大,豬肺炎病變評分就越小,說明豬支原體肺炎能影響到體重的增加。
在本次試驗中,陰性攻毒對照組的肺炎病變幾何平均分為43.75,按Goodwin氏55分評分標準,算出的肺炎病變較少率應在60%及以上算疫苗的合格,即本次肺炎病變評分應小于等于17.5分為合格,以此推算出本次試驗只有20頭豬合格,但對96頭豬的日常觀察來看,約1/3(27/76)發生肺炎的豬沒有觀察到咳嗽,說明豬感染豬支原體肺炎后,肺產生了病變,也影響到體重的增加,但是不一定能觀察到咳嗽或者喘氣。

圖4 各試驗豬的肺炎病變評分及攻毒后增重情況

表1 咳嗽與肺炎病變的相關性
本次試驗為更好地觀察肺炎病變與體重增加之間的相關性,接種的各廠家的疫苗均為正常劑量的1/2,即使這樣,仍有廠家生產的疫苗接種14日齡仔豬后,體重增加較空白組更高,說明接種豬支原體肺炎疫苗能促進免疫豬體重的增加,而且這種促進隨著免疫豬生長日齡的增加會更明顯,在最終屠殺時,豬支原體肺炎的免疫豬與非免豬體重差異顯著,免疫豬平均的日增重比非免豬可多20g以上,這個結論已經被其他研究者證實[4-8]。
在攻毒試驗后,以上數據表明,豬肺炎病變與體重增加存在相關性,在此之前,也有研究者已經證實這個結論[9-11],肺炎病變面積越大,體重增加越小,甚至在短期內幾乎會停滯不生長,導致后期“僵豬”的出現,有研究顯示[4,12],日齡小的豬比日齡大的豬出現喘氣癥狀對體重增加的影響更大,日齡小的豬感染豬支原體肺炎后,對豬體重的影響是終生的,而肺損傷過程有時并不能觀察到臨床癥狀,正如本試驗數據所顯示,約1/3的支原體肺炎病變豬觀察不到咳嗽或喘氣等臨床相關癥狀,導致有些養殖場不能找出飼料利用率降低和體重增加小的根本原因。當然疫苗的接種能明顯降低肺炎病變和促進體重增加,眾多的研究者已經證實該結論[13],本次試驗中,即使減半接種,B組和H組疫苗仍有70%左右的肺炎病變減少率,體重增加也明顯高于空白對照組,H組疫苗為華派的豬支原體肺炎滅活疫苗“支肺通”。本試驗的另一方面也說明了不同廠家的疫苗存在差異,養殖戶在選擇疫苗時要綜合多方面來考察。