陰道分泌物干化學(xué)法檢測(cè)在常見(jiàn)陰道疾病診斷中的應(yīng)用

焦瑞寶，陳 然，周佳麗，劉 娜，章 文，唐吉斌

（銅陵市人民醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心，安徽 銅陵 244009）

陰道分泌物檢測(cè)對(duì)陰道炎癥的診斷具有重要的作用，通常采用生理鹽水涂片鏡檢法，也有學(xué)者推薦采用革蘭染色鏡檢法觀察陰道清潔度、滴蟲(chóng)、真菌以及線索細(xì)胞[1]。近年來(lái)，我國(guó)有不少?gòu)S家開(kāi)發(fā)出相關(guān)試劑盒，借助陰道分泌物干化學(xué)法檢測(cè)來(lái)判斷陰道微生態(tài)及病原體感染的狀況[2-3]。本研究采用干化學(xué)法，對(duì)初診陰道炎患者陰道分泌物5種酶學(xué)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。5種酶學(xué)指標(biāo)包括細(xì)菌性陰道病（bacterial vaginosis，BV）相關(guān)酶學(xué)指標(biāo)[脯氨酸氨基肽酶（proline iminopeptidase，PIP）和唾液酸苷酶（saliva neuraminidase，SNA）]以及外陰陰道假絲酵母菌病和滴蟲(chóng)性陰道炎相關(guān)酶學(xué)指標(biāo)[凝固酶（coagulase，COA）、乙酰氨基葡萄糖苷酶（N-acetylglucosaminidase，NAG）和葡萄糖苷酶（glucosidase，GUS）]。另外，根據(jù)陰道分泌物的pH值，對(duì)滴蟲(chóng)和真菌進(jìn)行區(qū)分。同時(shí)采用革蘭染色鏡檢法，探討陰道分泌物干化學(xué)法檢測(cè)在BV、外陰陰道假絲酵母菌病和滴蟲(chóng)性陰道炎診斷中的價(jià)值。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象

選取2017年11—12月于銅陵市人民醫(yī)院婦科就診的初診陰道炎患者1 800例，年齡（42.3±8.4）歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：24 h內(nèi)有性生活、盆浴、陰道灌洗行為患者的樣本，肉眼可見(jiàn)的血性樣本，經(jīng)期及絕經(jīng)期患者樣本，局部用藥、正在服藥或停藥不超過(guò)1周的患者樣本。所有患者均知情同意。

1.2 儀器與試劑

陰道炎五聯(lián)檢試劑盒Ⅱ（干化學(xué)酶法）由鄭州安圖生物工程股份有限公司生產(chǎn)，產(chǎn)品批號(hào)為20170622-2；革蘭氏染色液（快速法）由珠海貝索生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)；全自動(dòng)生殖道分泌物工作站由嘉興凱實(shí)生物科技有限公司生產(chǎn)；日本Olympus CX21生物顯微鏡。

1.3 方法

由銅陵市人民醫(yī)院婦科醫(yī)師常規(guī)采集患者陰道分泌物拭子2份，并送檢，一支陰道分泌物拭子用于革蘭染色鏡檢涂片，另一支陰道分泌物拭子用陰道炎五聯(lián)檢試劑盒Ⅱ?qū)Ｓ孟♂屢合疵摚Ｒ?guī)開(kāi)啟全自動(dòng)生殖道分泌物工作站，將洗脫后溶液放置在工作站上相應(yīng)的位置，啟動(dòng)儀器進(jìn)行自動(dòng)加樣、溫育和檢測(cè)，通過(guò)工作站軟件對(duì)反應(yīng)板結(jié)果進(jìn)行分析，并給出檢測(cè)結(jié)果。將全自動(dòng)生殖道分泌物工作站5種酶學(xué)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果及BV、外陰陰道假絲酵母菌病和滴蟲(chóng)性陰道炎3種疾病檢測(cè)結(jié)果，與革蘭染色鏡檢法檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。率的比較采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 干化學(xué)法與革蘭染色鏡檢法在BV診斷中的比較

1 800例患者陰道分泌物干化學(xué)法檢測(cè)BV的陽(yáng)性率低于革蘭染色鏡檢法（χ2=515.24，P＜0.001）。干化學(xué)法在BV診斷中的敏感性為45.39%，特異性為97.14%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為88.18%，陰性預(yù)測(cè)值為79.12%，符合率為80.61%，不符合率為19.39%。見(jiàn)表1。

2.2 PIP和SNA在BV診斷中的比較

261例BV患者陰道分泌物PIP的陽(yáng)性率高于SNA（χ2=11.52，P＜0.001）。見(jiàn)表2。

表1 干化學(xué)法與革蘭染色鏡檢法在BV診斷中的比較

表2 PIP和SNA在BV診斷中的比較

2.3 干化學(xué)法與革蘭染色鏡檢法在外陰陰道假絲酵母菌病診斷中的比較

1 800例患者陰道分泌物干化學(xué)法檢測(cè)外陰陰道假絲酵母菌病的陽(yáng)性率高于革蘭染色鏡檢法（χ2=142.36，P＜0.001）。干化學(xué)法在外陰陰道假絲酵母菌病診斷中的敏感性為44.68%，特異性為85.70%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為36.73%，陰性預(yù)測(cè)值為89.29%，符合率為79.28%，不符合率為20.72%。見(jiàn)表3。

2.4 COA、NAG和GUS在外陰陰道假絲酵母菌病診斷中的比較

126例外陰陰道假絲酵母菌病患者陰道分泌物COA均陽(yáng)性，NAG和GUS檢測(cè)結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.36，P=0.547）。見(jiàn)表4。

表3 干化學(xué)法與革蘭染色鏡檢法在外陰陰道假絲酵母菌病診斷中的比較

表4 NAG和GUS在外陰陰道假絲酵母菌病診斷中的比較

2.5 干化學(xué)法與革蘭染色鏡檢法在滴蟲(chóng)性陰道炎診斷中的比較

1 800例患者陰道分泌物干化學(xué)法檢測(cè)滴蟲(chóng)性陰道炎的陽(yáng)性率高于革蘭染色鏡檢法（χ2=537.70，P＜0.001）。干化學(xué)法在滴蟲(chóng)性陰道炎診斷中的敏感性為92.31%，特異性為96.20%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為34.95%，陰性預(yù)測(cè)值為99.82%，符合率為96.11%，不符合率為3.89%。見(jiàn)表5。

表5 干化學(xué)法與革蘭染色鏡檢法在滴蟲(chóng)性陰道炎診斷中的比較

2.6 COA、NAG和GUS在滴蟲(chóng)性陰道炎診斷中的比較

36例滴蟲(chóng)性陰道炎患者陰道分泌物COA均陽(yáng)性，NAG的陽(yáng)性率略高于GUS（χ2=5.36，P＜0.050）。見(jiàn)表6。

表6 NAG和GUS在滴蟲(chóng)性陰道炎診斷中的比較

3 討論

生殖道感染是婦科門診常見(jiàn)多發(fā)病，陰道分泌物檢測(cè)對(duì)其診斷具有重要的作用，常用檢測(cè)方法有生理鹽水涂片鏡檢法、革蘭染色鏡檢法。然而，陰道分泌物干化學(xué)法檢測(cè)能否完全替代顯微鏡鏡檢法，目前結(jié)論尚不一致。

BV主要由陰道加德納菌、擬桿菌和動(dòng)彎桿菌等多種微生物引起，是一種無(wú)陰道粘膜炎癥表現(xiàn)的臨床綜合征[4]。唐吉斌等[5]認(rèn)為在BV微生態(tài)中，普雷沃菌和擬桿菌是SNA活性增加的主要病原菌，加德納菌和動(dòng)彎桿菌則具有PIP活性。PIP和SNA可作為診斷BV的指標(biāo)。外陰陰道假絲酵母菌病和滴蟲(chóng)性陰道炎是由真菌或滴蟲(chóng)感染引起的陰道炎癥。陰道炎五聯(lián)檢試劑盒Ⅱ與第1代試劑盒比較，除了包括原來(lái)就有的NAG檢測(cè)之外，還增加了COA和GUS檢測(cè)，共計(jì)3種酶學(xué)指標(biāo)，另外可根據(jù)滴蟲(chóng)感染pH值升高的特點(diǎn)來(lái)對(duì)真菌和滴蟲(chóng)感染進(jìn)行區(qū)分[6]。

本研究結(jié)果顯示，干化學(xué)法在BV、外陰陰道假絲酵母菌病和滴蟲(chóng)性陰道炎診斷中的敏感性分別為45.39%、44.68%和92.31%，特異性分別為97.14%、85.70%和96.20%；陽(yáng)性預(yù)測(cè)值分別為88.18%、36.73%和34.95%，陰性預(yù)測(cè)值分別為79.12%、89.29%和99.82%；符合率分別為80.61%、79.28%和96.11%，不符合率分別為19.39%、20.72%和3.89%。

本研究革蘭染色鏡檢法檢測(cè)BV的陽(yáng)性率為31.94%（575/1 800）、檢測(cè)外陰陰道假絲酵母菌病的陽(yáng)性率為15.67%（282/1 800）、檢測(cè)滴蟲(chóng)性陰道炎的陽(yáng)性率為2.17%（39/1 800），均低于余曉燕[7]報(bào)道的35.65%、18.13%和12.18%。這可能與二者研究例數(shù)、地區(qū)衛(wèi)生條件以及患者衛(wèi)生習(xí)慣不同有關(guān)。

本研究中干化學(xué)法有BV假陰性314例，其中219例革蘭染色鏡檢法結(jié)果弱陽(yáng)性，這可能是由于陰道分泌物中存在少量厭氧菌，革蘭染色鏡檢法可直接觀察到陰道分泌物細(xì)菌種類的變化，而酶含量較低未達(dá)到檢測(cè)閾值造成的。PIP和SNA同時(shí)陽(yáng)性者占BV患者的63.98%（167/261），單純1種酶陽(yáng)性者占36.02%（94/261），PIP陽(yáng)性率高于SNA。這可能與加德納菌和動(dòng)彎桿菌比普雷沃菌和擬桿菌更容易引起B(yǎng)V有關(guān)。

干化學(xué)法有外陰陰道假絲酵母菌病假陽(yáng)性217例，這可能是由于外陰陰道假絲酵母菌病患者治療后真菌消失，但真菌死亡后所釋放的生化標(biāo)志物仍部分存在于陰道分泌物中所致，也可能是因?yàn)榇嬖诰哂蠫US活性的微生物無(wú)乳鏈球菌、大腸埃希菌等，或存在具有COA活性的微生物金黃色葡萄球菌、糞腸球菌、大腸埃希菌等，進(jìn)而導(dǎo)致儀器誤判為真菌感染[8]。282例外陰陰道假絲酵母菌病患者中有156例干化學(xué)法結(jié)果為陰性，這可能與陰道感染真菌中只有白色念珠菌和熱帶念珠菌產(chǎn)生NAG，而克柔念珠菌、光滑念珠菌等非白色念珠菌均不產(chǎn)生NAG有關(guān)[9]；或者是因?yàn)殛幍婪置谖镏姓婢^少，涂片可以偶見(jiàn)孢子，但生化標(biāo)志物含量極低，從而導(dǎo)致干化學(xué)法結(jié)果為假陰性。

1 761例革蘭染色鏡檢法滴蟲(chóng)性陰道炎陰性患者中有67例干化學(xué)法結(jié)果為陽(yáng)性，其中15例是由于陰道分泌物pH值＞4.8，儀器誤將真菌判為滴蟲(chóng)所致；其他可能是由具有GUS和COA活性的無(wú)乳鏈球菌、金黃色葡萄球菌、糞腸球菌、大腸埃希菌等雜菌造成[10]。

126例外陰陰道假絲酵母菌病患者和36例滴蟲(chóng)性陰道炎患者陰道分泌物COA的陽(yáng)性率均為100.00%，分別有52.38%（66/126）和66.67%（24/36）的患者NAG和GUS同時(shí)陽(yáng)性，這說(shuō)明無(wú)論是假絲酵母菌感染還是滴蟲(chóng)感染，都會(huì)產(chǎn)生COA，導(dǎo)致干化學(xué)法檢測(cè)COA結(jié)果陽(yáng)性，滴蟲(chóng)感染比假絲酵母菌感染更容易產(chǎn)生上述2種酶。

綜上所述，革蘭染色鏡檢法可直接觀察菌群密集度、多樣性和優(yōu)勢(shì)菌[11]，干化學(xué)法可實(shí)現(xiàn)儀器自動(dòng)化以及加樣、孵育等檢測(cè)過(guò)程的統(tǒng)一化、標(biāo)準(zhǔn)化。儀器通過(guò)檢測(cè)陰道分泌物中化學(xué)組分水平，進(jìn)而推算病原體的存在，容易受病原體水平的影響，也可受陰道分泌物中混雜微生物的干擾，從而影響干化學(xué)法檢測(cè)結(jié)果；也可受已死亡病原體內(nèi)化學(xué)成分的干擾，從而影響檢測(cè)結(jié)果。因此，陰道疾病的實(shí)驗(yàn)室診斷目前尚不能用干化學(xué)法完全替代革蘭染色鏡檢法，需充分利用2種方法的各自優(yōu)勢(shì)，互相補(bǔ)充，以提高臨床檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。