胰腺導(dǎo)管腺癌中真核翻譯起始因子5A2和基質(zhì)金屬蛋白酶-10、-11的表達(dá)

呂榮華 關(guān) 巍 李 肅 侯 明

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院急救中心，青海 西寧 810001)

胰腺導(dǎo)管腺癌在中老年人中常見，也是胰腺中最常見的惡性腫瘤，來源于胰導(dǎo)管上皮，部分病例可以產(chǎn)生黏液。病變形成時與機(jī)體中相關(guān)蛋白表達(dá)失調(diào)有關(guān)，尤其是胰腺癌進(jìn)展時轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白表達(dá)明顯異常。真核翻譯起始因子(EIF)5A2是在細(xì)胞惡性表型轉(zhuǎn)化過程中起重要促進(jìn)作用的因子，其常作為上游基因參與腫瘤轉(zhuǎn)移和增殖〔1,2〕。基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-10和MMP-11是MMPs家族中的重要成員，其可以有效降解細(xì)胞外基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)成分，為腫瘤細(xì)胞的播散提供直捷通路，使細(xì)胞易于遷移〔3,4〕。本實驗對胰腺導(dǎo)管腺癌中EIF5A2、MMP-10和MMP-11的表達(dá)進(jìn)行檢測，分析其相關(guān)性及臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 青海大學(xué)附屬醫(yī)院2014年1月至2017年12月行手術(shù)治療，并經(jīng)病理醫(yī)師確診的胰腺導(dǎo)管腺癌53例為觀察組，年齡55～87歲，平均(67.6±11.5)歲，其中男28例，女25例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合WHO中胰腺導(dǎo)管腺癌的病理診斷標(biāo)準(zhǔn)；②未進(jìn)行放、化療；③無其他器官惡性腫瘤。選擇15例距腫物邊緣大于2 cm的非腫瘤性胰腺(正常胰腺)組織為對照組，年齡58～82歲，平均(68.9±10.8)歲。

1.2EIF5A2、MMP-10和MMP-11檢測方法 EIF5A2、MMP-10和MMP-11均為濃縮液，按不同比例進(jìn)行稀釋后，先進(jìn)行預(yù)實驗觀察，選擇最理想的濃度用于正式實驗，即EIF5A2(1∶100)、MMP-10(1∶150)和MMP-11(1∶150)。EIF5A2、MMP-10和MMP-11的檢測均基于石蠟包埋的切片，應(yīng)用免疫組化二步法，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色。嚴(yán)格按步驟進(jìn)行，均由同一人員操作，設(shè)陽性對照，做好質(zhì)控工作。

1.3EIF5A2、MMP-10和MMP-11結(jié)果判讀 EIF5A2、MMP-10和MMP-11的陽性部位是細(xì)胞質(zhì)，以細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，著色強(qiáng)度：無著色為0分；弱著色為1分，中等程度著色為2分，強(qiáng)著色為3分。選擇上皮細(xì)胞分布區(qū)且染色較為明顯的區(qū)域進(jìn)行計數(shù)，共選擇4個視野，取平均值，以<5%為0分，≥5%且<10%為1分，≥10%且<30%為2分，≥30%且<50%為3分，≥50%為4分。按著色強(qiáng)度和陽性率的評分之和進(jìn)行評定。以≤3分為陰性，以>3分為陽性。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SAS6.12統(tǒng)計軟件進(jìn)行χ2檢驗或線性相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1兩組中EIF5A2、MMP-10和MMP-11的比較 兩組中EIF5A2、MMP-10和MMP-11差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組EIF5A2、MMP-10和MMP-11陽性表達(dá)的比較〔n(%)〕

2.2EIF5A2、MMP-10和MMP-11在觀察組不同臨床特征中的表達(dá) 觀察組中EIF5A2、MMP-10和MMP-11的表達(dá)與Ki67指數(shù)和脈管累犯相關(guān)，EIF5A2的表達(dá)與神經(jīng)侵犯密切相關(guān)，MMP-10和MMP-11的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。三者均與性別、年齡、分化程度及炎細(xì)胞浸潤程度無關(guān)。見表2。

表2 EIF5A2、MMP-10和MMP-11在觀察組不同臨床特征中的表達(dá)〔n(%)〕

2.3觀察組中EIF5A2、MMP-10和MMP-11的相關(guān)性 EIF5A2和MMP-10(r=0.41，P=0.046 9)、EIF5A2和MMP-11呈正相關(guān)(r=0.43，P=0.035 6)。

3 討 論

胰腺導(dǎo)管腺癌在胰腺癌中占據(jù)很大比例，腫瘤體積變化較大，病變?yōu)檫吔绮磺宓馁|(zhì)硬腫塊，切面黃白色或白色，出血和壞死較為少見〔5〕。組織病理學(xué)上大多數(shù)呈現(xiàn)高分化，表現(xiàn)為較良好的腺體，與正常胰管不同程度地相似，間質(zhì)纖維化明顯。中分化腫瘤的異型性差異較大，部分患者伴有混合性分化，低分化的腫瘤主要由排列密集的小腺體取代腺泡組織，細(xì)胞核大，染色深，間質(zhì)可見壞死和出血〔6〕。腫瘤細(xì)胞多形性明顯，病變進(jìn)展與蛋白異常表達(dá)有關(guān)。EIF5A2是生物體的一種保守蛋白，唯一包含賴氨酸殘基的蛋白。研究表明EIF5A2與腫瘤的生物學(xué)行為相關(guān)〔7,8〕。但是EIF5A2的表達(dá)常不穩(wěn)定，且在不同腫瘤的表達(dá)可能不同，即有腫瘤細(xì)胞的特異性特征〔9〕。研究認(rèn)為EIF5A2受翻譯后其修飾的分子質(zhì)量大小可能有一定變化。其對胰腺癌的調(diào)控更多的是通過偽足富集的非典型激酶(PEAK)1實現(xiàn)的，并使黏附、細(xì)胞運(yùn)動、細(xì)胞增殖及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化發(fā)生明顯改變〔10〕。EIF5A2在上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化中也有作用，主要與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化時RhoA和Rac1的活化有關(guān)，并影響細(xì)胞骨架重構(gòu)，加速腫瘤細(xì)胞遷移〔11〕。EIF5A2可能通過激活MMPs起作用。有研究認(rèn)為消除內(nèi)源性EIF5A2并通過減少M(fèi)MP-2的表達(dá)來抑制腫瘤血管生成，因此EIF5A2與MMPs家族相關(guān)成員間可能具有一定的協(xié)同作用。EIF5A2的作用可能具有多樣性，其在不同病變中可以表現(xiàn)出對血管生成的促進(jìn)或抑制作用〔12〕。MMP-10和MMP-11是MMPs家族中的重要成員，是重要的基質(zhì)水解酶，二者對降解Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型膠原蛋白、纖維連接蛋白和層黏連蛋白作用最強(qiáng)，其還可以促進(jìn)生長因子的分泌，調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞黏附作用，并多途徑參與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移〔13,14〕。

本實驗結(jié)果提示EIF5A2、MMP-10和MMP-11三者可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生成，即在癌變中起一定的作用。本文結(jié)果提示EIF5A2、MMP-10和MMP-11均參與腫瘤的增生繁殖和脈管浸潤的過程，使腫瘤細(xì)胞的繁殖能力增高，細(xì)胞生長活躍，腫瘤實質(zhì)明顯增多，失控性增生明顯增強(qiáng)，同時對間質(zhì)中新生成的脈管具有明顯的侵襲作用〔15,16〕。本文結(jié)果提示EIF5A2可能與腫瘤細(xì)胞神經(jīng)細(xì)胞黏附作用相關(guān)，即EIF5A2在調(diào)節(jié)黏附性過程中，對神經(jīng)細(xì)胞黏附起主要作用，而胰腺導(dǎo)管腺癌為嗜神經(jīng)細(xì)胞生長的腫瘤，腫瘤細(xì)胞的增生中，EIF5A2對表皮生長因子(EGF)和轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)等生長因子進(jìn)行正向調(diào)節(jié)，神經(jīng)侵襲能力也明顯增強(qiáng)。本文結(jié)果提示MMP-10和MMP-11二者與腫瘤細(xì)胞的淋巴道播散密切相關(guān)。雖然胰腺導(dǎo)管腺癌中可以觀察到明顯的炎細(xì)胞浸潤，尤其是低分化的腫瘤中，但是本研究未發(fā)現(xiàn)三者與腫瘤間質(zhì)炎細(xì)胞浸潤的相關(guān)性，因此認(rèn)為三者與炎性反應(yīng)無明顯關(guān)聯(lián)性。本文提示EIF5A2和MMP-10、EIF5A2和MMP-11具有協(xié)同作用，也提示EIF5A2在腫瘤中分泌增多，可以調(diào)節(jié)MMP-10和MMP-11的表達(dá)，使腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)升高進(jìn)而調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的遷移。EIF5A2對微管蛋白組裝過程可能具有一定的作用，調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的穩(wěn)定。此種作用的機(jī)制與EIF5A2具有核苷二磷酸激酶的特征有關(guān)，微管蛋白上的GDP轉(zhuǎn)化為GTP后使微管發(fā)生變化，微管的聚合程度不足，細(xì)胞也不能形成正常的形態(tài)，對誘發(fā)轉(zhuǎn)移有一定作用。EIF5A2在高表達(dá)時可以直接或間接引起細(xì)胞外基質(zhì)蛋白酶的升高，對細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜屏障形成明顯破壞，腫瘤細(xì)胞易于離開原發(fā)部位，突破基底膜并形成轉(zhuǎn)移〔17〕。但是EIF5A2與MMP-10、MMP-11協(xié)同作用的關(guān)系尚不清楚，有待更多實驗證實。