唐山地區漢族人群特應性皮炎患者外周血IL-10基因多態性分析

王生，劉洋，康康

(1唐山市工人醫院，河北唐山063000；2開灤總醫院)

特應性皮炎(AD)是一種慢性復發性皮膚炎癥，具有較強的遺傳性[1]。研究發現，AD在同卵雙胞胎和異卵雙胞胎中的一致患病率分別為77%和15%，其發病可能與皮膚免疫失調相關，T輔助細胞Th-1和Th-2細胞因子之間的失衡在AD的發病機制中具有重要作用[2]。近年來候選基因策略逐漸用于鑒定基因多態性與疾病發生風險的相關性，前期研究已證實細胞因子基因內單核苷酸多態性(SNP)與AD發病密切相關[3]。IL-10具有抑制Th1和Th2細胞因子的作用，IL-10基因多態性與體外細胞因子產生的差異有關，其多個多態性位點已被證實與癌癥、部分傳染病和炎癥(包括AD)具有一定的相關性[4]。但上述IL-10基因多態性的相關研究是在不同民族人群中進行的，其結果并不一致。本研究觀察了唐山地區漢族人群IL-10基因rs1554286、rs1518111、rs3021094、rs3024490、rs1800871位點的多態性，現分析IL-10基因多態性與AD發病風險的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2016年6月～2017年6月唐山市工人醫院收治的唐山地區漢族AD患者300例作為觀察組，男150例、女150例，年齡(21.33±11.55)歲，病程(92.4±31.6)個月，嚴重程度(7.4±2.1)分。患者均為漢族，符合Hanifin[5]研究中的AD診斷標準，排除既往有皮膚病史、合并慢性疾病、嚴重代謝性疾病及內分泌疾病患者。選擇同期體檢健康志愿者300例作為對照組，男150例、女150例，年齡(22.64±10.98)歲。受試者之間無直接親屬關系，本研究通過醫院醫學倫理委員會批準，患者或家屬均簽署知情同意書。

1.2 IL-10基因5個SNP位點基因型檢測 采用Sequenom MassARRAY SNP 基因分型技術檢測外周血IL-10基因5個SNP位點(rs1554286、rs1518111、rs3021094、rs3024490、rs1800871)基因型。觀察組入院第2天、對照組體檢當天采集外周靜脈血5 mL，置于EDTA-K2抗凝管中，-70 ℃冰箱保存。采用全血DNA純化試劑盒(美國Thermo Fisher公司)進行DNA提取，操作步驟嚴格按照說明書進行。單堿基延伸引物委托上海生工生物工程股份有限公司進行設計和合成，反應在MassArray質譜儀(美國Sequenom公司)中進行，基因分型使用Sequenom MassARRAY RS1000軟件。記錄IL-10基因5個相關SNP位點的染色體位置、基因型及等位基因頻率。

1.3 3個遺傳模型下IL-10基因5個SNP位點與AD發病風險的相關性分析 通過無條件邏輯回歸模型，采用SNPstats在線統計軟件(https://www.snpstats.net/start.htm)計算在3個遺傳模型(顯性、隱性和加性)下IL-10基因5個SNP位點與AD發病風險的相關性。

1.4 IL-10基因5個SNP位點單體型與AD風險的相關性分析 構建IL-10基因5個SNP位點單體型，采用Haploview 4.2軟件評估位點間的連鎖不平衡情況，并進行單體型與AD風險的相關性分析。

1.5 統計學方法 采用SPSS19.0統計軟件。驗證IL-10基因5個SNP位點是否符合哈德-溫伯格平衡，采用直接計數法統計各位點的等位基因及基因型頻數，組間比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

IL-10基因5個SNP位點均符合哈德-溫伯格平衡(P-HWE> 0.05)。IL-10基因rs1554286、rs1518111、rs3021094、rs3024490、rs1800871位點染色體位置分別為206944233、206944645、206944952、206945311、206946634，等位基因分別為G/A、C/T、G/T、C/A、G/A。

2.1 兩組IL-10基因5個SNP位點基因型占比比較 觀察組IL-10基因rs1554286位點AG、GG基因型(OR分別為1.98、3.27，95%CI分別為1.36～2.86、2.03～5.26)，rs1518111位點CT、TT基因型(OR分別為2.04、2.64，95%CI分別為1.42～2.94、1.63～4.27)，rs3024490位點AC、CC基因型(OR分別為2.05、2.44，95%CI分別為1.43～2.96、1.50～3.97)，rs1800871位點AG、GG基因型(OR分別為1.83、2.37，95%CI分別為1.27～2.62、1.47～3.83)占比均高于對照組(P均<0.01)；rs3021094位點GT、GG基因型(OR分別為0.49、0.13，95%CI分別為0.34～0.69、0.07～0.25)占比均低于對照組(P均<0.01)。兩組IL-10基因5個SNP位點基因型占比見表1。

表1 兩組IL-10基因5個SNP位點基因型分布比較(例)

注：與對照組相比，*P<0.01。

2.2 IL-10基因5個SNP位點等位基因頻率比較 觀察組IL-10基因rs1554286位點等位基因G、rs1518111位點等位基因C、rs3024490位點等位基因C、rs1800871位點等位基因G頻率均高于對照組(rs1554286的OR=1.852，95 %CI：1.470～2.335；rs1518111的OR=1.689，95 %CI：1.339～2.131；rs3024490的OR=1.633，95 %CI：1.294～2.060；rs1800871的OR=1.593，95 %CI：1.263～2.009；P均<0.01)。IL-10基因rs3021094位點G等位基因頻率低于對照組(OR=0.397，95 %CI：0.309～0.510，P<0.01)。見表2。

2.3 3個遺傳模型下IL-10基因5個SNP位點與AD風險的相關性 3個遺傳模型下IL-10基因rs1554286、rs1518111、rs3024490、rs1800871位點均與AD發病風險增加有關(P均<0.05)；rs3021094位點均與AD發病風險降低有關(P均<0.05)。

表2 兩組IL-10基因5個SNP位點最小等位基因頻率比較(例)

注：與對照組相比，*P<0.01。

表3 三個遺傳模型下IL-10基因5個SNP位點與AD風險的相關性

2.4 IL-10基因5個SNP位點單體型與AD風險的相關性 IL-10基因rs1554286、rs1518111、rs3021094、rs3024490、rs1800871這5個位點具有強連鎖關系。ATGAA單體型與AD發病風險增加有關(OR=2.43，95%CI：1.83～3.23，P<0.01)，GTTAA單體型與AD發病風險降低有關(OR=0.13，95%CI：0.04～0.44，P<0.01)。見表4。

3 討論

表4 IL-10基因候選SNP位點單體型與AD發病風險的相關性

IL-10是一種抗炎細胞因子，由多種細胞分泌，包括調節性T細胞、巨噬細胞和樹突狀細胞[6]。IL-10可下調抗微生物肽表達，導致AD患者細菌性皮膚感染發生率升高，其在IL-4和CD40的聯合刺激下可增強B細胞增殖和IgE合成[7]。研究發現，AD患者外周血單個核細胞及損傷皮膚組織中IL-10表達升高，血清IL-10水平與AD病情呈負相關[8]。IL-10亦可通過與IL-4、IL-3結合而刺激肥大細胞生長[9]。研究顯示，IL-10基因幾個SNP位點與其血清水平和核結合活性差異有關，某些單體型與IL-10、IgE產生和嗜酸性粒細胞計數增加有關[10]。而關于IL-10啟動子區域內的幾個SNP與AD之間的關聯性文獻報道結論并不一致。Arkwright等[11]和Reich等[12]研究顯示，IL-10啟動子區SNP與AD發病沒有相關性。Sohn等[13]報道，AD的發生與IL-10啟動子-1082A、-819C、-592C之間存在相關性。Shin等[14]表明，IL-10遠端啟動子的單體型多態性(-1082A、-819C、-592C、+ 117T)與低IgE水平相關。Stavric等[15]和Kayserovaet等[16]研究顯示，AD發生與IL-10基因多態之間有關。

本研究從NCBI和HapMap數據庫中查詢IL-10基因的SNP位點，選擇在中國北京漢族人群具有較高頻率(最小等位基因頻率≥5%)的位點，最終確定了rs1554286、rs1518111、rs3021094、rs3024490、rs1800871這5個位點。上述IL-10基因5個SNP位點已在多種疾病的關聯分析研究中被報道。Yoo等[17]研究顯示，IL-10基因rs1554286位點與韓國人群良性前列腺增生有關。Halstrom等[18]報道，IL-10基因rs1518111多態性對非結核性分枝桿菌疾病的易感性有顯著影響。有關IL-10基因rs3021094位點多態性的報道較多，其多態性與突眼性甲狀腺腫、結直腸癌和慢性肝炎等疾病的發生風險均具有相關性[19]。值得注意的是，Zidi等[20]報道突尼斯人群中IL-10基因rs3024490位點多態性與血清IL-10水平顯著相關； IL-10基因rs3024490位點GG基因型攜帶者患強制性脊柱炎的風險是攜帶參考等位基因型TT者的3.03倍[21]；IL-10基因rs1800871與乳腺癌、IgA腎病和非霍奇金淋巴瘤均具有相關性[22]。本研究結果顯示，IL-10基因rs1554286、rs1518111、rs3024490和rs1800871位點均與AD發病風險升高有關，而rs3021094位點與AD發病風險降低有關；由5個位點組成的ATGAA單體型與AD發病風險升高有關，而GTTAA單體型與AD發病風險降低有關。

綜上所述，唐山地區漢族人群AD發病風險可能與其外周血IL-10基因rs1554286、rs1518111、rs3021094、rs3024490、rs1800871這5個位點多態性有關。后續研究將收集更多其他地區和民族樣本，以驗證IL-10基因上述位點與AD風險的相關性是否具有地區及民族特異性。