湖北十堰行PCI冠心病患者CYP2C19基因多態(tài)性分布研究*

王紅梅，李 斌，武 倫，余 飛，陳琴華△

(湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬東風(fēng)醫(yī)院:1實(shí)驗(yàn)中心；2.婦產(chǎn)科，湖北十堰 442000)

支架內(nèi)血栓是行冠狀動(dòng)脈支架術(shù)(PCI)患者術(shù)后嚴(yán)重的并發(fā)癥之一[1]，為了降低支架內(nèi)血栓形成，目前臨床上使用最廣泛的藥物是氯吡格雷。氯吡格雷本身無(wú)活性，在細(xì)胞色素P450酶(CYP450)的作用下轉(zhuǎn)化為有活性的物質(zhì)，發(fā)揮抗血小板作用，降低PCI術(shù)后患者不良心血管事件的發(fā)生率[2]。但研究表明，遺傳因素造成氯吡格雷抗血小板作用存在明顯個(gè)體差異性[3]。細(xì)胞色素P4502C19酶(CYP2C19)是CYP450酶系的一種同工酶，是氯吡格雷代謝為活性產(chǎn)物的關(guān)鍵酶，而CYP2C19存在基因多態(tài)性，影響氯吡格雷活性轉(zhuǎn)化能力從而對(duì)其療效產(chǎn)生影響[4]。2010年3月美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局在氯吡格雷說(shuō)明書(shū)中給予黑框警告，建議使用氯吡格雷之前，應(yīng)當(dāng)對(duì)患者進(jìn)行氯吡格雷代謝酶CYP2C19基因型檢測(cè)。對(duì)于CYP2C19功能缺失等位基因(慢代謝型)患者應(yīng)考慮改用其他抗血小板治療策略。本研究采用熒光定量PCR方法對(duì)十堰地區(qū)226例氯吡格雷治療的行PCI冠心病患者進(jìn)行CYP2C19基因位點(diǎn)分型，以期為臨床提供個(gè)體化用藥依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年9月至2017年8月在本院心內(nèi)科住院確診為冠心病，已行PCI，并且使用氯吡格雷進(jìn)行抗血小板治療的患者226例進(jìn)行CYP2C19基因多態(tài)性檢測(cè)。所納入的對(duì)象均簽署知情同意書(shū)自愿參加本調(diào)查研究。

1.2儀器與試劑 全血基因組DNA提取試劑盒(武漢海吉力生物科技有限公司)包括Proteinase K，裂解液BL，洗滌液BW1，洗滌液BW2，洗脫液BE。CYP2C19基因檢測(cè)試劑盒(武漢海吉力生物科技有限公司)，由6聯(lián)PCR反應(yīng)條(ZC)和陽(yáng)性對(duì)照(ZC)組成，其中6聯(lián)PCR條的組成見(jiàn)表1。熒光定量PCR儀(宏石SLAN-48P)，干式恒溫器，離心機(jī)，渦旋振蕩器。

表1 6聯(lián)PCR條的組成

1.3方法

1.3.1DNA提取與PCR擴(kuò)增 患者均抽取EDTA抗凝的靜脈血2 mL，按照全血基因組DNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)操作提取基因組DNA。取包含40 ng DNA的提取液，加入PCR擴(kuò)增體系，擴(kuò)增條件為：95 ℃ 5 min；95 ℃ 5 s，58 ℃ 30 s，10個(gè)循環(huán)；95 ℃ 5 s，58 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s (收集熒光)，35個(gè)循環(huán)。

1.3.2結(jié)果判定 分別選擇1、2號(hào)管，3、4號(hào)管，5、6號(hào)管，根據(jù)FAM信號(hào)ΔCt值分別判斷檢測(cè)樣本CYP2C19*2，CYP2C19*3，CYP2C19*17的基因多態(tài)性，其中VIC作為內(nèi)控信號(hào)，見(jiàn)圖1、表2、表3。

圖1 CYP2C1各檢測(cè)位點(diǎn)的擴(kuò)增曲線(xiàn)圖

表2 CYP2C1基因多態(tài)性檢測(cè)結(jié)果判定

續(xù)表2 CYP2C1基因多態(tài)性檢測(cè)結(jié)果判定

表3 CYP2C19基因型的判定

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1CYP2C19基因型分布 226例患者中CYP2C19基因型分布由多到少分別為*1/*17、*17/*17、*1/*1、*1/*2、*1/*3、*2/*17、*3/*17、*2/*2、*2/*3、*3/*3，構(gòu)成比例為48.5%、33.8%、7.6%、4.6%、2.3%、0.8%、0.8%、0.8%、0.8%、0。各基因型中男女所占比例差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.793)，見(jiàn)表4。

2.2氯吡格雷代謝型分布 226例患者中，超快代謝型(UM)4例(1.8%)，快代謝型(EM)112例(49.6%)，中代謝型(IM)85例(37.6%)，慢代謝型(PM)25例(11.1%)。4種代謝型中男女所占比例差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.553)，見(jiàn)表5。

表4 CYP2C19基因型在不同性別中的分布[n(%)]

表5 氯吡格雷代謝型在不同性別中的分布[n(%)]

2.3不同年齡段患者氯吡格雷代謝型分布頻率比較 將226例患者分為4個(gè)年齡段，各年齡段各代謝型所占比例差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.677)，見(jiàn)表6。

表6 不同年齡段患者氯吡格雷代謝型分布[n(%)]

3 討 論

氯吡格雷是一種噻吩并吡啶類(lèi)衍生物，是一種血小板P2Y12受體抑制劑，經(jīng)過(guò)肝臟中 CYP2C19酶的氧化、水解后轉(zhuǎn)化為有活性的代謝產(chǎn)物，不可逆地抑制ADP與血小板表面ADP受體P2Y12選擇性結(jié)合及繼發(fā)的ADP介導(dǎo)的糖蛋白(GP)Ⅱb/Ⅲa復(fù)合物的活化而抑制血小板的聚集，發(fā)揮抗血小板作用[5]。CYP2C19基因編碼的酶參與氧化與水解所占比重為45%和20%[6]，影響氯吡格雷的抗血小板功能。

CYP2C19基因存在多態(tài)性，其主要基因型為10種，分別為CYP2C19*1/*17、*17/*17、*1/*1、*1/*2、*1/*3、*2/*17、*3/*17、*2/*2、*2/*3、*3/*3。其中CYP2C19*2和CYP2C19*3是功能缺失的等位基因，CYP2C19*17是功能增強(qiáng)的等位基因。根據(jù)對(duì)藥物代謝速率的不同，可將個(gè)體分為UM(*1/*17、*17/*17)，EM(*1/*1)，IM(*1/*2、*1/*3、*2/*17、*3/*17)，PM(*2/*2、*2/*3、*3/*3)。本研究226例患者中檢測(cè)到10種基因型分布結(jié)果：UM型4例(1.8%)，EM型112例(49.6%)，IM型85例(37.6%)，PM型25例(11.1%)。與華仙麗等[7]報(bào)道相符。CYP2C19*1、*2、*3及*17等位基因的發(fā)生頻率分別為60.9%、31.6%、4.4%和3.1%。與李振等[8]報(bào)道基本一致。為氯吡格雷的臨床應(yīng)用提供了一定的理論依據(jù)。

目前對(duì)CYP2C19基因型與氯吡格雷的抗血小板功能之間關(guān)系的認(rèn)識(shí)還存在爭(zhēng)議。WANG等[9]研究支持對(duì)亞洲人群進(jìn)行CYP2C19基因檢測(cè)。國(guó)內(nèi)外相關(guān)指南建議在氯吡格雷低反應(yīng)的患者中進(jìn)行CYP2C19基因測(cè)定，以決定抗血小板藥物治療的選擇[10]。有研究表明至少攜帶1個(gè)CYP2C19功能喪失基因的患者[11-12]，在氯吡格雷治療過(guò)程中發(fā)生心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)增加；攜帶有1個(gè)CYP2C19功能喪失基因的冠狀動(dòng)脈疾病的患者，氯吡格雷的用量是沒(méi)有此基因變異患者的3倍。MCDONOUGH等[13]研究表明相對(duì)于快代謝和超快代謝(*17)，CYP2C19*2等位基因使卒中的風(fēng)險(xiǎn)明顯增加。SUN等[14]研究表明持發(fā)型缺血性卒中患者服用氯吡格雷3個(gè)月后，攜帶有CYP2C19*2或CYP2C19*3等位基因的患者發(fā)生心血管事件的風(fēng)險(xiǎn)較大。而DOLL等[15]研究結(jié)果顯示用氯吡格雷治療心血管疾病過(guò)程中，其療效與CYP2C19的快、慢代謝型沒(méi)有關(guān)系，不支持對(duì)此類(lèi)患者進(jìn)行常規(guī)的CYP2C19基因檢測(cè)。BAUER等[16]對(duì)15項(xiàng)關(guān)于CYP2C19基因多態(tài)性與不良心血管事件相關(guān)性的研究進(jìn)行Meta分析顯示，CYP2C19基因多態(tài)性與支架內(nèi)血栓不存在相聯(lián)性。同時(shí)AMIN等[17]指出基于CYP2C19基因型的氯吡格雷臨床個(gè)體化治療有一定的局限性。此外相關(guān)研究表明體質(zhì)量指數(shù)，抗高血壓類(lèi)藥物，吸煙及血糖代謝都對(duì)氯吡格雷生物活性產(chǎn)生影響[18-21]。

隨著世界醫(yī)療領(lǐng)域的不斷發(fā)展，精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)的提出和發(fā)展是必然產(chǎn)物，將為患者提供更加個(gè)性化的治療方案，更好地提高患者的健康水平。隨著人類(lèi)基因組計(jì)劃的完成，個(gè)體化用藥的重要性越來(lái)越受到重視。