宮頸癌組織中FR-α蛋白及Ki-67表達的關系及其臨床意義

趙紅果 郭寶芝 劉愛珍 宋芷霜 蔡海瑜 丁俊珊 劉路玖

宮頸癌是惡性腫瘤中的一大典型代表，屬于婦科范圍，在各種婦科惡性腫瘤中，它的發病率僅僅是低于乳腺癌的[1]。腺鱗癌、鱗癌、腺癌是其比較普遍的幾種病理類型，以下是與其發病原因有緊密聯系的幾點因素：①發揮協同作用的滴蟲等病原體的感染、沙眼衣原體、單純皰疹病毒Ⅱ型；②營食不健康，生活環境差；③感染啦高危型的HPV；葉酸有利于DNA修復和合成、癌細胞快速增殖分裂以及細胞代謝，癌細胞中的DNA合成能夠被高效分裂主要是依賴于葉酸，因此，近年來醫學界的研究熱點聚焦到了轉運葉酸的葉酸受體α上。黏液腺癌中的FR-α能夠高表達，同時它也在子宮腺癌、宮睪丸絨和某些腦腫瘤中起作用。在增殖細胞核中Ki-67的是1種密切相關于細胞增殖的核蛋白，它在醫療界常被作為標記物去評價細胞增殖，Ki-67的這些特性，在研究腫瘤問題過程中得到廣泛應用[2-3]。我們在此次研究宮頸癌組織中Ki-67及FR-α蛋白的表達中用到了免疫組織化學法(immunohistochemistry)，探討二者的關系及其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 基本資料

選取2010年1月至2015年12月在本院因子宮肌瘤行子宮全切術、因癌前病變行手術治療以及因宮頸癌行手術治療的患者50例。其中15例宮頸癌組從在本院接受過宮頸癌手術的患者中選取(4例宮頸癌Ⅱ期、3例宮頸癌Ⅲ期、8例宮頸癌Ⅰ期)，17例正常宮頸組織組從在本院進行過子宮肌瘤行子宮全切術的患者中選取。18例宮頸上皮內瘤變組從在本院治療過癌前病變的患者中選取，且這些患者都被證實為是其宮頸上皮內的組織發生瘤變。以上選取的50例患者平均年齡不超過40歲，且無其他癌癥史以及與婦科相關的嚴重病癥。

1.2 納入及排放標準

納入標準：患者年齡18～80歲，宮頸癌組的患者接受過宮頸癌手術，正常宮頸組則需保證在術前檢查宮頸液基時結果正常。所有參與實驗的患者知情并且同意此次研究。排除標準：除宮頸癌外還患有其他危重病。

1.3 方法

1.3.1 葉酸受體α的表達 采用免疫組化PV法檢測樣本石蠟包埋、浸蠟、透明、脫水，將蠟塊切片到約4 μm時。染色采用免疫組織化學PV6001法,操作均按照pv法說明書執行[4]。

1.3.2 Ki-67表達 采用免疫組化PV法檢測福爾馬林液可以有效的固定保存實驗中的樣本，將蠟塊切片到約4 μm時。采用免疫組織化學PV6001法[5]。

1.4 判定標準

1.4.1 判斷FR-α蛋白在組織中陽性表達 當棕黃色顆粒出現在細胞胞質內時，FR-α蛋白在組織中呈陽性表達，切片強度判定均用雙盲法。細胞染色強度的評分標準如下：淡黃色為1分，棕褐色為3分，棕黃色為2分，未見染色為0分；陽性細胞所占百分比標準如下： 5個高倍鏡下的視野，選定每個視野100個細胞進行計數，80%～100%為4，10%～50%為2，0～1%為0，1%～10%為1，50%～80%為3。總評分=細胞染色強度得分×陽性細胞所占百分比得分，其判定結果如下：IHS 0分為(-)，IHS 1～4分為(+)，IHS 5～8分為(++)，IHS 9～12分為(+++)[6]。

1.4.2 判斷Ki-67在組織中陽性表達 Ki-67陽性表達定位于細胞核中，切片強度判定均用雙盲法。評分細胞染色強度的標準如下：淡黃色為1分，棕褐色為3分，棕黃色為2分，未見染色為0分。評分陽性細胞所占百分比的標準如下：任意觀察5個高倍鏡下的視野，選定每個視野中較清楚的100個細胞進行計數，陽性細胞數為80%～100%為4分，50%～80%為3，10%～50%為2分，1%～10%為1分，0～1%為0分。總評分=細胞染色強度得分×陽性細胞所占百分比得分，其判定結果如下：IHS 0分為(-)，IHS 1～4分為(+)，IHS 5～8分為(++)，IHS 9～12分為(+++)。

1.5 統計學處理方法

應用SPSS 13.0統計軟件處理所有數據，用Fish確切概率法計數資料，用Spearman等級相關分析法分析者者這兩組結果變量的關系。P<0.05差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組中FR-α蛋白表達

FR-α 表達陽性率在18例宮頸上皮內瘤變組織為75.0%、15例宮頸癌組織為80.0%、17例正常宮頸組織6.7%，三組數據比較，差異有統計學意義(P<0.05)。正常組織與宮頸上皮內瘤變組織中FR-α陽性表達率比較，差異有統計學意義(P<0.05)，宮頸癌組織和宮頸上皮內瘤變組織中FR-α 蛋白陽性表達率，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 FR-α蛋白在不同組織中的表達/例

2.2 三組組織中Ki-67蛋白表達

Ki-67蛋白表達陽性率18例宮頸上皮內瘤變組織為72.2%，15例宮頸癌組織為86.7%、17例正常宮頸組織為0.0%，三組數據比較得知，差異有統計學意義(P<0.05)。正常組織和宮頸上皮內瘤變組織中Ki-67蛋白陽性表達率比較，差異有統計學意義(P<0.05)，宮頸癌組織和宮頸上皮內瘤變組織中 Ki-67蛋白陽性表達率比較，差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 Ki-67蛋白在不同組織中的表達情況/例

2.3 FR-α在不同臨床分期宮頸癌組織中的表達

FR-α蛋白表達陽性率8例宮頸癌Ⅰ期為65%，宮頸癌Ⅱ期為80%，宮頸癌Ⅲ期為67%，三組數據進行比較，差異無統計學意義(P>0.05)，見表3。

表3 不同分期宮頸癌組織中FR-α蛋白的表達情況/例

2.4 Ki-67在不同臨床分期宮頸癌組織中的表達

Ki-67蛋白陽性表達率宮頸癌Ⅰ期為75%，宮頸癌Ⅱ期為50%，宮頸癌Ⅲ期為100%，比較3組數據得知，但差異無統計學意義(P>0.05)，見表4。

表4 Ki-67蛋白在不同時期宮頸上皮內瘤變組中的表達/例

3 討論

宮頸癌是惡性腫瘤中的一大典型代表，屬于婦科范圍。每年死于宮頸癌的女性大約有二十萬。相關實驗數據表明人類乳頭瘤樣病毒(HPV)一旦侵入人體并且未得到有效清除，會導致宮頸癌發病以及其后期的惡掠發展[7]。宮頸上皮內瘤變Ⅱ級(CINⅡ)、宮頸上皮內瘤變Ⅲ級(CINⅢ)、宮頸上皮內瘤變Ⅰ級(CINⅠ)為上皮內病變的3種形式，病變加重時，浸潤性宮頸癌形成，宮頸癌Ⅱ期、宮頸癌Ⅲ期及宮頸癌Ⅳ期、宮頸癌Ⅰ期就是憑照瘤細胞浸潤的范圍來分類的[8-11]。如能盡早診斷出宮頸癌并立即進行有效的治療，患者的生存率和生存質量會大大提高。在臨床上主要是使用HPV分型、宮頸液基細胞學檢(TCT)等，在多樣的方法中若能找出1種簡單、無創傷性、快捷、靈敏性及特異性高的方法，宮頸癌就能被更早發現，患者也就早日能進行有效的治療，從而降低宮頸癌患者的死亡率。

宮頸癌的發生到發展再到惡化是1個復雜的過程，相關實驗表明宮頸癌的發生、發展過程與葉酸受體有著重要的關系。葉酸受體主要分為FR-β、FR-γ，FR-α，Toffoli、Kall等的早年研究表明FR-α對卵巢腫瘤的早期診斷具有相當高特異性的準確的靈敏度。然而卻幾乎沒有報道是關于研究FR-α和診斷宮頸癌關系的。此次實驗旨在通過研究宮頸癌中FR-α的表達，得到1種有利于預判宮頸癌是否發生的標記物[12-15]。為了研究癌細胞增殖與FR-α的關系，需同時了解到宮頸癌中Ki-67的表達，位于增殖細胞的細胞核核內的Ki-67，被諸多醫學者的相關實驗證實能夠作為1種有效可靠的細胞增殖標記物。Ki-67能夠較準確的預判腫瘤的發展進程以及良惡。 患者的治愈率和宮頸癌的后期發展也都與Ki-67在細胞核中的表達水平有密切關系。用免疫組化方法探究Ki-67和FR-α表達的相關性。宮頸上皮內瘤變組織、正常宮頸組織、宮頸癌組織中的FR-α蛋白表達于細胞質，并以棕黃色顆粒的形狀呈現。宮頸上皮內瘤變組織、正常宮頸組織、宮頸癌組織中的Ki-67蛋白表達于細胞核，并以棕黃色顆粒的形狀呈現。若想得到更準確的結果，可以增加樣本量以減少誤差。而通過其在正常樣本數內的組之間的比較得知，Ki-67與FR-α有密切的關系，而Ki-67又是1種有效可靠的細胞增殖標記物，因此得出FR-α轉運葉酸與癌細胞分裂增殖有關系。

綜上所述，FR-α 蛋白表達升高與宮頸癌發病有關，FR-α 蛋白在宮頸上皮內瘤變織和宮頸癌中的表達與 Ki-67 有相關性。由此可得知FR-α 蛋白會在細胞增殖中起作用從而影響宮頸癌。