細胞塊與免疫組化技術聯合在解決胸腔積液診斷中的應用價值探究

李 雯 韓 莉

（新疆巴音郭楞蒙古自治州人民醫院病理科，新疆 庫爾勒 841000）

胸腔積液，屬于臨床常見癥狀，臨床多采取查找脫落癌細胞方式，明確腫瘤性病變的性質、腫瘤性質[1]。常規離心涂片處理，缺少組織形態的結構，所以容易和轉移性腺癌弄混，進而對診斷結果構成直接影響。為此，本次研究，探究細胞塊聯合免疫組化技術診斷、單純免疫組化技術診斷的效果。

1 資料與方法

1.1 一般資料：按照診斷方法，將三級甲等醫院病理科2012年3月至2017年10月收治的236例胸腔積液患者，分成觀察組、對照組，分別為126例、110例，兩組患者均經影像學檢查[2]。觀察組中包括男性78例，女性48例；最小年齡、最大年齡分別為32歲、86歲，平均年齡為（59.4±5.5）歲。對照組包括男性75例，女性35例；最小年齡、最大年齡分別為34歲、82歲，平均年齡為（58.9±5.3）歲。兩組臨床一般資料比較，差異不具有統計學意義，P＞0.05。

1.2 方法：兩組均接受常規離心涂片法處理，取患者胸腔積液標本10 mL，放置在錐形試管中，置于離心設備每分鐘2000 r，離心時間為6 min。然后，倒上清液，將沉淀物涂片取出。

1.2.1 對照組診斷方法：采用免疫組化技術，通過免疫組化染色SP法，選擇CK7、TTF-1、CEA等抗體，操作時嚴格按照要求進行。

1.2.2 觀察組診斷方法：采用免疫組化技術聯合制備細胞塊。細胞塊制備方法為脫落細胞石蠟包埋法，具體步驟如下：選取胸腔積液標本50 mL，置于錐形試管中，2000 r/min，6 min離心，取沉淀物質，離心兩次，沉淀物為凝集塊情況，采取濾紙將10%的重型福爾馬林包裹并固定處理。也可添加1%的融化瓊脂，混合、離心，取沉淀。然后，將固定物實行包裹及固定處理。固定時間為5 h，和活檢標本脫水、包埋，形成細胞塊后切片處理。

1.3 觀察指標

1.3.1 觀察兩組HE染色形態學、診斷效果、免疫表型情況。

1.3.2 經離心涂片、細胞塊HE切片和免疫組化切片，經兩名醫師評判，以確保診斷結果的準確性。免疫組化標記CK7、Ecadherin、CEA細胞膜顯示為著棕黃色粒狀、TTF-1細胞核著棕黃色顆粒、Calretinin細胞核陰性，即可判定為陽性。

1.4 統計學處理：研究數據通過SPSS13.0軟件處理，計數資料以例數（n）代表，組間率（%）比較經χ2檢驗，數據對比為P＜0.05差異時，表示組間對比具有統計學意義。

2 結 果

2.1 HE染色形態學分析：細胞塊鏡下，能觀察到腺癌細胞異型比較明顯，核質比增大、核膜清晰。同時，可清晰的觀察到核分裂情況，通過腺管樣排列、乳頭狀排列、小梁狀排列。反應性增生間皮細胞核為圓形，多處于中心位置，常見多核、雙核。

2.2 兩組診斷效果的對比：觀察組和對照組的診斷情況實行對比，存在顯著差異，P＜0.05，見表1。

表1 兩組患者診斷結果的對比[n（%）]

2.3 免疫表型分析：236例患者中，腺癌細胞陽性率為70.34%（166/236），166例診斷腺癌細胞陽性患者中，肺腺癌細胞CK7陽性率、TTF-1陽性率、E-cadherin陽性率、CEA陽性率、Calretinin陽性率各占100%（166/166）、80.72%（134/166）、95.78%（159/166）、94.58%（157/166）、0。反應性增生間皮細胞陽性率29.66%（70/236），70例診斷為反應性增生皮細胞陽性者中，間皮細胞CK7陽性率、TTF-1陽性率、E-cadherin陽性率、CEA陽性率、Calretinin陽性率各占5.71%（4/70）、0、0、10%（7/70）、87.14%（61/70）。肺腺癌細胞中CK7、TTF-1、E-cadherin、CEA均為高表達狀態。反應性增生間皮細胞中，Calretinin顯示為高表達狀態。見圖1、圖2。

圖1 放大倍數：20×10 E-cadherin

圖2 放大倍數：20×10 TTF-1

3 討 論

胸腔積液中惡性腫瘤最為多見，主要包括轉移性癌、淋巴瘤和惡性間皮瘤等[3]。轉移性癌，主要以乳腺癌、肺癌、腸癌等常見。查找胸腔積液中的癌細胞，對腫瘤防治、預后有著重要的臨床價值。臨床方面多采取體液細胞學中離心涂片方法處理，這種處理方式容易產生收集細胞少和假陰性情況。蛋白質多聚集在細胞的四周，進而會直接對免疫組化試劑進到細胞的效果構成不良影響，無法滿足臨床實際需求[4-5]。細胞塊技術的主要原理為離心操作，可將細胞濃縮后形成沉淀物。然后，實行固定、脫水、包埋和切片、染色等處理。細胞塊能連續切片，保存時間較長，所以比較利于觀察，可提高漿膜腔積液診斷率。免疫組化技術，主要利用免疫學抗原抗體特異度結合原理，經化學反應對抗體顯色劑顯色，從而能明確組織內抗原的情況。免疫組化技術，對于漿膜腔積液轉移性癌、增生間皮細胞進行診斷，可達到較好的診斷效果[6]。細胞塊診斷的過程中，通過免疫組化標記，以確保細胞檢查結果的準確度。其中CK7為相對分子質量細胞角蛋白，一般多在上皮、尿路上皮細胞標記中應用。TTF-1，屬于核轉錄蛋白NKx2，可對肺部、甲狀腺上皮細胞、胚胎大腦區域表達。相關研究人員認為，TTF-1于肺腺癌敏感度、特異度均比較高，將其作為肺腺癌特異度的標志，便于判定轉移性腺癌細胞、間皮源性細胞。E-cadherin，為相對分子鈣黏附蛋白，介導細胞間黏附效果較佳，通過在機體上皮組織表達，降低腫瘤細胞間黏附性，一般多在腫瘤浸潤診斷中應用。CEA為胚胎性癌抗原，多出現在胎兒消化道上皮組織、胰腺、肝臟位置，為上皮性腫瘤的標志。Calretinin常處于神經組織，可對間皮瘤、反應性間皮細胞進行診斷。總而言之，細胞塊聯合免疫組化技術，能夠有效鑒別并解決胸腔積液，具有重要的臨床價值。