CXCR-2和MMP-9在非小細胞肺癌癌組織中的表達水平及其與肺癌侵襲轉移的相關性

曾媛媛，劉 哲，雷 舒，李 敏

相關數據顯示，全球新發肺癌病例明顯增加，多數新發病例在城市人口[1]，其中非小細胞型肺癌（NSCLC）約占所有肺癌的80%。目前，對于誘導NSCLC產生機制及NSCLC與炎癥之間關系的研究較少見[2]。最近有學者提出，免疫相關的細胞因子及與其相關的調節因子涉及NSCLC發生、發展、轉移及預后等各個方面[3]。本研究擬通過對NSCLC組織與癌旁正常肺組織的臨床病理特征進行回顧性分析，比較二者間CXCR-2和MMP-9的表達水平差異，探討CXCR-2和MMP-9與肺癌侵襲轉移的相關性，為NSCLC的發病機理研究和臨床診治提供參考。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2012年3月～2014年9月醫院手術切除的73例NSCLC組織、48例癌旁正常肺組織標本，均經病理、組織學檢查確診，所有病例的病理、臨床、隨訪資料均完整；入選病例隨訪時間截止于2017年9月或者患者死亡。NSCLC組中，患者男 46 例，女 27 例；年齡 26～76（59.3±10.1）歲；腫瘤長徑≥3.0 cm 44例，腫瘤長徑＜3.0 cm 29例；有淋巴結轉移27例，無淋巴結轉移者46例；高-中分化47例，低-未分化26例。癌旁正常肺組織均距離腫瘤邊緣＞5 cm，經病理檢查證實無腫瘤細胞浸潤；患者年齡 25～76（59.27±10.08）歲。

1.2 試劑 CXCR-2檢測用兔抗人CXCR4單克隆抗體、MMP-9檢測用免疫人多克隆抗體MMP-9均購自于北京博奧生物公司；即用型 SP試劑盒、DAB顯色試劑盒均購自于北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3 標本制備[4]組織標本經石蠟包埋，4 μm厚連續切片，56℃烘烤 48 h后取出，37℃烤箱過夜，行免疫組化學染色。免疫人多克隆抗體MMP-9工作濃度為 1∶25，兔抗人CXCR-2多克隆抗體工作濃度為 1∶25，封閉時用正常羊血清，工作濃度為 1∶20。染色標本在光學顯微鏡高倍鏡(400倍)下觀察，胞質或胞核內出現棕黃色顆粒為陽性細胞。染色成功后，任意選擇5個高倍鏡視野，每個高倍視野下計數100個細胞。根據陽性細胞所占比例分別記分：無陽性細胞記為0分；陽性細胞所占比例＜30.0%記為1分；陽性細胞所占比例≥30.0%記為2分。另根據陽性細胞表達強弱分別記分：未出現著色記為0分；淺黃色或者黃色記為1分；棕黃色記為2分；棕褐色記為3分。將兩項的記分進行相乘，0～1分為陰性；2～6分為陽性記。

1.4 統計學方法 應用SPSS18.0軟件分析，計量資料以均數±標準差表示，采用t檢驗；計數資料以例和構成比表示，采用χ2檢驗；相關性分析采用Pearson法，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組CXCR-2和MMP-9陽性表達比較CXCR-2和MMP-9主要定位于NSCLC細胞的胞質中，呈淺黃色至棕黃色顆粒（圖1、2）；NSCLC組織CXCR-2和MMP-9陽性表達率明顯高于癌旁正常肺組織（P＜0.05，表 1）。

表1 兩組CXCR-2和MMP-9陽性表達比較［n(%）］

圖1 癌旁正常肺組織

2.2 NSCLC組織CXCR-2和MMP-9表達與臨床病理因素的關系 在隨訪過程中，73例NSCLC患者中，有46例（63.01%）未出現淋巴結轉移，27例出現淋巴結轉移，在出現淋巴結轉移患者中，24例（88.89%）CXCR2表達陽性，25例 （92.59%）MMP-9表達陽性。腫瘤分期高和出現淋巴結轉移患者的NSCLC組織中，CXCR-2和MMP-9的陽性表達率顯著上升（P＜0.05），見表 2。

2.3 CXCR-2和MMP-9表達與NSCLC侵襲轉移的相關性分析 根據相關性結果顯示，CXCR-2和MMP-9的陽性表達率與NSCLC患者淋巴結轉移發生率均呈正相關（r=0.437、0.348，P＜0.01）。

3 討論

近年來，肺癌發病率呈上升趨勢，且發病逐漸趨于年輕化[5]。雖然臨床上予以外科手術及聯合藥物治療取得了一定的療效，但是，患者的預后生存率仍然很低，尤其對于已經發生遠處轉移以及不能切除的肺癌患者的治療仍然十分困難[6]。據報道，NSCLC約占所有肺癌的80%，絕大部分患者確診時已經到了癌癥中晚期，5年生存率很低[7]。文獻報道[8]，CXCR-2是腫瘤細胞常見的趨化因子受體，在腫瘤的相關轉移過程中起著尤為關鍵的生物學作用，在腫瘤中的陽性表達率均較高；基質金屬蛋白(MMPs)可以降解機體組織細胞外基底膜以及基質，從而對腫瘤細胞的侵襲和轉移起促進作用，MMP9屬于MMPs家族，腫瘤中MMP 9表達較高，則腫瘤的浸潤性和轉移性強[8-9]。本研究結果發現，NSCLC組織CXCR-2陽性和MMP-9陽性表達率均明顯高于癌旁正常組織，與上述結論相似，這可能與淋巴結轉移有關，由此推測，CXCR-2和MMP-9表達與NSCLC患者淋巴結轉移等臨床病理特征存在著一定的關系。

表2 NSCLC組織中CXCR -2和MMP-9與臨床病理因素的關系(n=73）

既往有研究表明[10]，炎癥因子的異常表達會提高同源細胞的致癌潛能，也會提高癌細胞的轉移能力。梁乃超等[11]研究發現，CXCR-2和MMP-9水平被抑制后，可以抑制癌細胞的生成和轉移，同時降低癌細胞的侵襲轉移能力。本研究結果也發現，CXCR-2和MMP-9高陽性表達患者的臨床分期更晚，浸潤深度更深，更容易出現淋巴結轉移，且本組數據還顯示：CXCR-2和MMP-9的陽性表達率與NSCLC患者淋巴結轉移發生率均呈正相關（P＜0.05），與楊大運等[12]研究報道一致。分析原因可能是[12]：CXCR-2和MMP-9的高水平表達常合并有異常基因的存在，而相關異常基因的存在可一定程度上加快癌細胞的生長，促使其對脈管等進一步產生侵犯，從而隨著血液出現遠處轉移，增加了腫瘤的侵襲行為。

綜上所述，NSCLC組織中CXCR-2和MMP-9均呈高水平表達，且與腫瘤分期及淋巴結轉移關系密切，二者聯合檢測對評估NSCLC侵襲轉移和預后具有指導意義。但本組研究所選樣本量較小，且未研究CXCR-2和MMP-9是否受其他因素的影響，因此，有待進一步深入研究證實。