40%氟啶胺·氟吡菌胺懸浮劑的高效液相色譜分析

黃東進，羅成燕

(1.江蘇優嘉植物保護有限公司，江蘇南通 226400；2.江蘇揚農化工股份有限公司，江蘇揚州 225009)

氟啶胺(fluazinam)化學名稱為 3-氯-N-(3-氯-5-三氟甲基-2-吡啶基)-α,α,α-三氟-2,6-二硝基對甲苯胺，是由日本石原產業公司開發的二硝基苯胺類殺菌劑，是一種保護性殺菌劑。該劑為線粒體氧化磷酸化解偶聯劑，通過抑制孢子萌發、菌絲突破、生長和孢子形成而抑制病原菌的侵染。氟吡菌胺(fluopicolide)化學名稱為2,6-二氯-N-[(3-氯-5-三氟甲基-2-吡啶基)甲基]苯甲酰胺，是德國拜耳作物科學公司開發的苯甲酰胺類殺菌劑，具有保護和治療作用。它主要作用于細胞膜和細胞間的特異性蛋白而表現殺菌活性，對病原菌的各主要形態均有很好的抑制活性[1]。將兩者混合制成40%氟啶胺·氟吡菌胺懸浮劑，很好的發揮了各自的優點，同時對作物的病害防治有極好的增效作用，擴大了殺菌譜，提高了殺菌活性，可有效防治各類蔬菜和葡萄作物上的霜霉病、灰霉病、晚疫病、疫病、根腫病等病害，應用前景廣泛。氟啶胺、氟吡菌胺單劑或與其他藥劑復配制劑的分析方法已有報道[2-6]，但有關氟啶胺和氟吡菌胺兩者復配制劑同條件分析方法尚未見公開報道。本文采用反相高效液相色譜法，使用Diamonsil C18柱和紫外可變波長檢測器，以乙腈+水(0.05%磷酸水溶液)為流動相，在同一色譜條件下用外標法對有效成分進行分析和定量。該方法具有操作簡便，分離效果好，準確度和精密度高的特點。

1 試驗部分

1.1 儀器與試劑

高效液相色譜儀：Shimadzu LC-20A，具可變波長紫外檢測器和自動進樣器；色譜數據處理工作站；色譜柱：250 mm×4.6 mm (i.d.)不銹鋼柱，內裝Diamonsil C18填充物，粒徑5 μm；超聲波清洗器；微孔過濾膜：0.45 μm有機膜。

乙腈：色譜純；水：新蒸二次蒸餾水；氟啶胺標樣(質量分數99.0%)、氟吡菌胺標樣(質量分數99.0%)：江蘇揚農化工股份有限公司；40%氟啶胺·氟吡菌胺懸浮劑試樣：江蘇揚農化工股份有限公司研制。

1.2 色譜條件

流動相：乙腈+水(0.05%磷酸水溶液，體積比80∶20)；流速：1.0 mL/min；柱溫30 ℃；檢測波長：210 nm；進樣體積：2 μL；保留時間：氟吡菌胺約4.6 min，氟啶胺約7.5 min。典型的液相色譜圖見圖1、2。

圖1 氟啶胺、氟吡菌胺標樣液相色譜圖

圖2 40%氟啶胺·氟吡菌胺懸浮劑液相色譜圖

1.3 分析步驟

1.3.1 標樣溶液的配制

稱取氟啶胺標樣約0.06 g和氟吡菌胺標樣約0.02 g (精確至0.000 2 g)，置于50 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，超聲振蕩使試樣溶解，冷卻至室溫，搖勻。

1.3.2 試樣溶液的配制

稱取試樣約0.2 g (精確至0.000 2 g)，置于50 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，超聲振蕩使試樣溶解，冷卻至室溫，搖勻，用0.45 μm有機濾膜過濾后備用。

1.3.3 測定

在上述操作條件下，待儀器穩定后，連續注入數針標樣溶液，直至相鄰2針氟啶胺(氟吡菌胺)的峰面積相對變化小于1.2%后，按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進行測定。

1.3.4 計算

將測得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標樣溶液中氟啶胺(氟吡菌胺)峰面積分別進行平均。試樣中氟啶胺(氟吡菌胺)的質量分數X(%)按下式計算：

式中：A1為標樣溶液中氟啶胺(氟吡菌胺)峰面積的平均值；A2為試樣溶液中氟啶胺(氟吡菌胺)峰面積的平均值；m1為氟啶胺(氟吡菌胺)標樣的質量(g)；m2為試樣的質量(g)；w為標樣中氟啶胺(氟吡菌胺)的質量分數(%)。

2 結果與討論

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 檢測波長的選擇

對氟啶胺和氟吡菌胺標樣溶液分別在190～400 nm進行紫外光譜掃描，得到其相應的吸收波長與響應值的紫外吸收光譜圖。當選用210 nm作為檢測波長時，氟啶胺和氟吡菌胺均有較強吸收峰，同時雜質響應值小，流動相無吸收。綜合考慮各組分質量比、雜質分離、儀器基線及儀器響應值等諸多因素，最終選定210 nm作為檢測波長。

2.1.2 流動相的選擇

在Diamonsil C18色譜柱上，分別試用不同比例的甲醇和水，乙腈和水作為流動相對試樣進行分離檢測。經測定發現，選擇乙腈+水(0.05%磷酸水溶液)作為流動相較理想。當流速控制在1.0 mL/min時，有效成分與雜質能很好地分離，峰形對稱，色譜峰尖銳，且基線平穩，保留時間適當。綜合以上因素，最終選定乙腈+水(0.05%磷酸水溶液)作為流動相，體積比為80∶20。

2.2 線性相關性測定

配制一系列不同濃度的氟啶胺(氟吡菌胺)標樣溶液，按上述色譜操作條件，測定相應的響應值，并以質量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線，得到氟啶胺和氟吡菌胺的線性回歸方程和相關系數。氟啶胺線性方程為y=5.816 1x-10.298 2，相關系數R2=0.999 9；氟吡菌胺線性方程為y=8.805 9x-0.189 8，相關系數R2=0.999 7。結果表明，該方法的線性關系良好。

2.3 方法精密度測定

在上述色譜操作條件下，對同一個40%氟啶胺·氟吡菌胺懸浮劑樣品進行5次平行測定，計算標準偏差和變異系數。結果得到該方法測定氟啶胺和氟吡菌胺的標準偏差分別為0.14和0.074，變異系數分別為0.46%和0.72%(表1)。由此可知該方法精密度較高。

2.4 方法準確度測定

采用標準品添加法，在已知含量的40%氟啶胺·氟吡菌胺懸浮劑中加入一定量的氟啶胺、氟吡菌胺的標準品，按上述色譜操作條件進行測定，計算回收率。測得氟啶胺的回收率為98.61%～100.89%，平均回收率為99.56%；氟吡菌胺的回收率為98.36%～100.65%，平均回收率為99.36%(表2)。由此可知該方法準確度較高，可準確定量。

表1 40%氟啶胺·氟吡菌胺懸浮劑精密度測定

表2 40%氟啶胺·氟吡菌胺懸浮劑回收率測定

3 結 論

試驗結果表明，用本方法同時測定40%氟啶胺·氟吡菌胺懸浮劑中2種有效成分的含量，2種有效成分與雜質能很好的分離，具有較高準確度和精密度，線性關系良好，并且操作簡便、快速，該方法是此復配制劑較理想的分析方法。

參 考 文 獻

[1] 朱衛剛, 胡偉群, 張蕊蕊, 等. 新型殺菌劑氟吡菌胺室內殺菌活性[J].農藥, 2012, 51(12): 922-923.

[2] 姜宜飛. 氟啶胺高效液相色譜分析方法研究[J]. 農藥科學與管理,2005, 26(8): 8-10.

[3] 王芳, 成妙金, 李歐燕. 40%氰霜·氟啶胺懸浮劑的高效液相色譜分析[J]. 現代農藥, 2015, 14(1): 26-28.

[4] 龔會琴, 王睿, 陳迎麗. 10%精甲霜靈·氟啶胺顆粒劑高效液相色譜分析[J]. 農藥, 2017, 56(3): 190-192.

[5] 張小軍, 張宗儉, 劉尚鐘, 等. 氟吡菌胺原藥的高效液相色譜分析[J].農藥, 2011, 50(9): 661-662.

[6] 成妙金. 45%氟菌·百菌清懸浮劑液相色譜定量分析[J]. 世界農藥,2016, 38(2): 48-51.