蘋果樹腐爛病防治藥劑的篩選

祝帥，朱鳳蒙，雍道敬

（青島中達農業科技有限公司，山東青島266109）

蘋果樹腐爛病俗稱臭皮病、爛皮病、串皮病，是一種為害極其嚴重的毀滅性病害，在我國各蘋果產區都有不同程度的發生，主要危害主枝主干，導致死枝死樹，嚴重時導致毀園，造成巨大的經濟損失，制約了我國蘋果產業的持續性發展[1-3]。2011年，王彩霞等[4]調查表明山東煙臺蘋果產區腐爛病不但發生嚴重且發病持續時間長，5月份調查時，枝條上仍有大量新發生而未經刮治的病斑。而目前尚未發現有效抗腐爛病的栽培品種[5，6]，國內有關蘋果樹腐爛病的防治主要集中于藥劑方法[7]。為了篩選出防治蘋果樹腐爛病的高效殺菌劑，在室內進行了幾種殺菌劑對蘋果樹腐爛病菌的藥效測定，并進行田間藥效試驗，以期為腐爛病的防治提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

供試菌株：蘋果樹腐爛病菌強致病力菌株LXS080301，采集自山東棲霞富士蘋果園。單菌絲分離后進行致病力測定，保存于5℃冰箱，病原菌在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基（PDA）上活化后用于室內抑菌作用測定。田間持效期試驗使用分生孢子懸浮液，將活化的菌絲接種到大麥粒培養基中，黑光燈下誘導產孢[8]。挑取分生孢子角，加入適量無菌水，混勻，用血球計數板將孢子懸浮液濃度調至1×104個/mL，加入終濃度為0.1%的吐溫-20，備用。孢子懸浮液現配現用，放置時間不超過1h。

供試果樹：蘋果樹腐爛病田間藥效試驗在膠州果園進行，試驗用樹為4年生富士蘋果樹，果樹在進行藥效試驗前5個月內沒有使用過任何殺菌劑。

表1 供試原藥信息Table 1 Information of the test original medicine

供試藥劑：市售成品殺菌劑均通過加工形成相應劑型，其中含多種助劑，為消除助劑對試驗的干擾，本試驗采用農藥原藥配制母液的方法，以期能夠真實的反應殺菌劑的性能[9,10]。根據已有的報道和經驗，選擇對蘋果樹腐爛病菌可能有效的殺菌劑10種，供試原藥為各農藥廠家生產的商品，名稱、有效成分含量、生產廠家詳見表1。

1.2 試驗方法

藥液配制及含藥平板制備：將稱量好的各藥劑分別用無菌水配置成所需最高濃度的100倍母液，再依次稀釋成各濃度。無菌條件下，將2mL各濃度藥液加入到98mL滅菌融化的PDA培養基中，搖勻后制備含藥平板。

測定方法：采用菌絲生長速率法。將腐爛病菌菌株LXS080301接種于PDA平板中央，25℃黑暗培養3d后，在菌落邊緣打取直徑6mm的菌餅。將菌餅接種于含有相應濃度藥劑的PDA平板上，每個處理重復3次，以不含藥的培養基為空白對照。25℃黑暗培養，待空白對照菌絲長至培養皿的2/3時，用十字交叉法測量菌落直徑，計算各處理對腐爛病菌的抑菌率。

式中，半徑的單位為mm。

1.3 田間藥效試驗

選擇生長良好、健康無病的蘋果樹，用噴霧器將藥液均勻地噴灑到樹上，直到所有枝條都有藥液流下為止，每種藥劑處理1棵果樹，以噴灑清水的果樹為對照。

表2 病情指數分級標準Table 2 Grading standard of disease index

在噴藥后的第 0d、7d、14d、21d，分別從每種藥劑（表3中各藥劑對應的最優濃度）處理果樹上剪取3個一年生枝條，在距離葉柄基部1cm處剪掉所有葉片，避免枝條上造成傷口。從枝條基部開始，截取2段長15cm的枝條，每種藥劑處理共計6段枝條。將孢子懸浮液均勻地噴灑到枝條上，直到有水滴流下為止，將接種后的枝條插于組培瓶中水培，轉移到25℃培養箱中保濕培養。10d后調查各處理枝條的病斑，按照表2（見上頁）中的標準進行病情分級。

根據調查結果計算腐爛病的病情指數，同時計算各藥劑的防治效果。

2 結果與分析

2.1 不同殺菌劑對蘋果樹腐爛病菌的抑制作用

由表3可知，不同種藥劑對蘋果樹腐爛病菌的抑菌率存在差異，同一藥劑稀釋倍數不同，抑菌效果也有差異。結果表明，供試的10種藥劑中，多菌靈、咪鮮胺、丙環唑對蘋果樹腐爛病菌的抑菌效果較好，在相對較低的濃度下，抑菌率仍高達98%以上，能顯著抑制腐爛病菌菌絲的生長。

表3 10種殺菌劑對蘋果樹腐爛病菌菌絲生長的抑制作用Table 3 Inhibition of 10 kinds of fungicides on mycelial growth ofValsa mali

表4 10種殺菌劑噴藥后不同時間的防治效果Table 4 Protective effect of 10 kinds of fungicides at different times after spraying

2.2 不同藥劑對蘋果樹腐爛病的田間藥效試驗

表4顯示了不同藥劑對蘋果樹腐爛病的田間藥劑試驗，由表可以看出，供試10種殺菌劑中，噴藥后第0d接種腐爛病菌的處理對枝條的防治效果均能達到98%以上；噴藥后第7d接種腐爛病菌的處理，甲基硫菌靈、戊唑醇、肟菌酯、己唑醇及苯醚甲環唑的防治效果較差，為61.45%～68.98%，其他殺菌劑的保護效果均能達到83%以上；噴藥后第14d接種腐爛病菌的處理，多菌靈、咪鮮胺和丙環唑的保護效果較好，為80.40%～83.73%；藥后21d的處理，戊唑醇、肟菌酯、己唑醇以及苯醚甲環唑的保護效果都降至10%以下，與對照相當，說明上述藥劑已失去保護作用。而多菌靈、咪鮮胺及丙環唑的保護效果維持在60%以上，仍有一定的保護效果。

3 討論

多菌靈是一種高效低毒的廣譜內吸性殺菌劑，具有內吸治療和保護作用。自20世紀70年代中期，其迅速代替有機汞、有機磷殺菌劑，其作用機理為干擾病原菌有絲分裂中紡錘體的形成，影響細胞分裂而起到殺菌作用，對由半知菌和子囊菌等真菌引起的病害有特效[11，12]。咪鮮胺是一種廣譜高效的咪唑類殺菌劑，其作用機理為通過抑制麥角甾醇的生物合成，從而使菌體細胞膜功能受到破壞而起作用[13，14]，可防治由半知菌及子囊菌引起的多種病害，咪鮮胺具有預防、保護、治療等多重作用，但無內吸性[15]。丙環唑是屬于甾醇抑制劑中的三唑類殺菌劑，其作用機理是影響甾醇的生物合成，使病原菌的細胞膜功能受到破壞，最終導致細胞死亡，從而起到殺菌、防病和治病的功效，具有殺菌譜廣泛、活性高、殺菌速度快、持效期長、內吸傳導性強等特點，可防治子囊菌、擔子菌和半知菌引起的病害[16]。室內藥劑篩選結果表明，不同稀釋倍數的殺菌劑對蘋果樹腐爛病菌菌絲生長均有一定的抑制作用，隨著稀釋倍數的增大，抑制效果減弱，其中多菌靈、咪鮮胺及丙環唑對腐爛病菌菌絲的抑制作用較好。田間藥效試驗也發現，所測試的10種藥劑在噴藥后第0d和第7d能有效地保護枝條免受蘋果樹腐爛病菌的侵染，噴藥后的14d，保護效果明顯下降，噴藥后的第21d只有多菌靈、咪鮮胺及丙環唑的保護效果維持在60%以上，這在室內試驗中也得到了驗證。

蘋果樹腐爛病具有潛伏侵染的性質，因此，加強果園的栽培管理，增強樹勢，提高果樹的抗病力，是綜合防治的關鍵。在實際病害防治中建議以多菌靈（有效成分）為主，并與以有效成分為丙環唑或咪鮮胺的藥劑交替使用。