枳實(shí)藥材乙醇提取物的化學(xué)成分研究

鄧可眾 萇美燕 宗琪 熊英

中圖分類(lèi)號(hào) R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2018）04-0458-03

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.04.07

摘 要 目的：研究枳實(shí)藥材乙醇提取物的化學(xué)成分。方法：采用硅膠柱、開(kāi)放ODS柱、制備液相色譜、HW-40F凝膠柱、大孔樹(shù)脂柱對(duì)枳實(shí)藥材乙醇提取物進(jìn)行分離純化，根據(jù)理化性質(zhì)和波譜（質(zhì)譜、氫譜、碳譜）數(shù)據(jù)分析鑒定化合物結(jié)構(gòu)。結(jié)果：從枳實(shí)藥材乙醇提取物中分離得到8個(gè)化合物，分別鑒定為Rimboxo （1）、胸苷（2）、尿嘧啶（3）、環(huán)-（亮氨酸1-異亮氨酸2-丙氨酸3-蘇氨酸4-甘氨酸5-蘇氨酸6-苯丙氨酸7）（4）、環(huán)-（亮氨酸1-亮氨酸2-脯氨酸3-酪氨酸4-甘氨酸5-絲氨酸6-脯氨酸7） （5）、水合橙皮內(nèi)酯-β-D-葡萄糖苷（6）、傘形花內(nèi)酯（7）、里那醇苷（8）。結(jié)論：化合物1、2、3、8為首次從柑橘屬植物中分離得到，化合物4、5、6為首次從枳實(shí)藥材中分離得到，該研究為枳實(shí)藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)奠定了一定基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞 枳實(shí)；化學(xué)成分；結(jié)構(gòu)鑒定；乙醇提取物；柑橘屬

ABSTRACT OBJECTIVE： To study the chemical constituents of ethanol extract from Cirtus aurantium. METHODS： The ethanol extract of C. aurantium was isolated and purified by silica gel column， open ODS column， preparation liquid chromatography， HW-40F gel column and macroporous resin column. The structure of compounds was analyzed and identified according to physicochemical properties and spectral data （mass spectrum， hydrogen spectrum， carbon spectrum）. RESULTS： Eight compounds were isolated from ethanol extract of C. aurantium， i.e. Rimboxo （1），Thymidine （2），Uracil （3），Cyclo-（Leu1-Ile2-Ala3-Thr4-Gly5-Thr6-Phe7） （4），Cyclo-（Leu1-Leu2-Pro3-Tyr4-Gly5-Ser6-Pro7） （5），Meranzin hydrate-β-D-glucoside （6），Umbelliferone （7），Linaloyl glucoside （8）. CONCLUSIONS： Compound 1， 2， 3， 8 are isolated from Citrus L. for the first time， compound 4， 5， 6 were isolated from C. aurantium for the first time. The study lays the foundation for quality evaluation of C. aurantium.

KEYWORDS Cirtus aurantium； Chemical constituent； Structural identification； Ethanol extract； Citrus L.

常用理氣中藥枳實(shí)主產(chǎn)于江西新干、樟樹(shù)等地，經(jīng)產(chǎn)地及市場(chǎng)資源調(diào)查發(fā)現(xiàn)，絕大多數(shù)枳實(shí)藥材來(lái)源于蕓香科柑橘屬植物酸橙（Citrus aurantium L.）的干燥幼果。相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，酸橙含有多種活性成分，果實(shí)中的香豆素類(lèi)、黃酮類(lèi)成分均對(duì)胃腸道功能具有調(diào)節(jié)作用[1-2]；此外，多甲氧基黃酮、檸檬苦素類(lèi)成分還具有抗腫瘤活性[3]。本研究對(duì)枳實(shí)藥材進(jìn)行化學(xué)成分研究，以期為酸橙幼果的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供參考。

1 材料

1.1 儀器

Avance HD型600 MHz 核磁共振儀（德國(guó)Bruker公司，四甲基硅烷為內(nèi)標(biāo)）； 2489 Alliance Separations Module 型高效液相色譜儀（美國(guó) Waters公司）；X-4型數(shù)字顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀（北京泰克儀器有限責(zé)任公司）；VG-Autospec-300型質(zhì)譜儀、1100 LC/MSD Trap SL型質(zhì)譜儀（美國(guó)Agilent公司）；ODS-AQ型色譜柱（日本YMC公司）；R-210型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士Buchi公司）；ZF-1型三用紫外分析儀（上海寶山顧村電光儀器廠）；Exceed-E-UP型實(shí)驗(yàn)室超純水機(jī)（成都艾柯有限公司）；BSZ-40型自動(dòng)部分收集器（上海滬西分析儀器廠有限公司）。

1.2 試劑

硅膠 [100～200目（拌樣）、200～300目（裝柱），青島海洋化工有限公司]；開(kāi)放ODS柱填料（50 μm，加拿大Silicycle公司）；HW-40凝膠（30～60 μm，日本Tosoh公司）；制備液相色譜柱填料（5 μm，日本YMC公司）；大孔樹(shù)脂（0.3～1.2 mm，日本Mitsubishi Chemical公司）；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純；水為純化水。

1.3 藥材

試驗(yàn)藥材均由筆者于2013年購(gòu)自江西省樟樹(shù)藥材市場(chǎng)，經(jīng)筆者鑒定為真品。

2 提取與分離

取藥材50 kg，粉碎，依次以95%、70%乙醇溶液滲漉提取，提取液減壓回收，得乙醇提取物浸膏；將上述浸膏以水分散，依次以石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得各部位萃取液。其中，乙酸乙酯萃取液減壓回收，得乙醇乙酯部位浸膏；正丁醇萃取液減壓回收，得正丁醇部位浸膏。

取乙醇乙酯部位浸膏適量，經(jīng)硅膠柱，以二氯甲烷-甲醇（1 ∶ 0、49 ∶ 1、19 ∶ 1、9 ∶ 1、8 ∶ 2、7 ∶ 3、5 ∶ 5、0 ∶ 1，V/V）梯度洗脫，經(jīng)薄層色譜層析檢查后合并，得146個(gè)流分。其中，第133個(gè)流分經(jīng)開(kāi)放ODS柱，以水-甲醇（1 ∶ 0、49 ∶ 1、19 ∶ 1、9 ∶ 1、8 ∶ 2、6 ∶ 4、5 ∶ 5、4 ∶ 6、3 ∶ 7、0 ∶ 1，V/V）梯度洗脫，經(jīng)薄層色譜層析檢查后合并，得22個(gè)流分（Fr.1A～ Fr.22A）。其中，流分Fr.1A經(jīng)制備液相色譜，以甲醇-水（1 ∶ 9，V/V）等度洗脫，得化合物2（3.6 mg）；流分Fr.5A和Fr.6A合并后經(jīng)HW-40凝膠柱，以甲醇等度洗脫，得化合物3（5.8 mg）；流分Fr.11A、Fr.13A和Fr.17A分別經(jīng)制備液相色譜、HW-40凝膠柱純化，得化合物4（45 mg）、5（9 mg）、7（13 mg）和8（64.2 mg）。

正丁醇部位浸膏經(jīng)大孔樹(shù)脂柱，以30%乙醇溶液等度洗脫，所得洗脫部分經(jīng)開(kāi)放ODS柱，以水-甲醇（1 ∶ 0、49 ∶ 1、19 ∶ 1、9 ∶ 1、8 ∶ 2、6 ∶ 4、5 ∶ 5、4 ∶ 6、3 ∶ 7、0 ∶ 1，V/V）梯度洗脫，得22個(gè)流分（Fr.1B～Fr.22B）。其中，流分Fr.22B和Fr.3B分別經(jīng)制備液相色譜，分別以甲醇-水（4.5 ∶ 5.5，V/V）和甲醇-水（3.5 ∶ 6.5，V/V）等度洗脫，得化合物1（3.9 mg）和6（4.0 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：黃色油狀物，分子式為C8H12O4。電噴霧質(zhì)譜（ESI-MS）：m/z 173[M+H]+。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：3.66（4H，m，H-2，H-2′ ，H-3，H-3′ ），3.60（4H，dd，J=4.8，11.4 Hz，H-1a，H-1a′ ，H-4a，H-4a′ ），3.53（4H，dd，J=6.0，11.4 Hz，H-1b，H-1b′ ，H-4b，H-4b′ ）。13C- NMR（CD3OD，150 MHz）δ：73.8（C-2，C-2′ ，C-3，C-3′ ），64.4（C-1，C-1′ ，C-4，C-4′ ）。與文獻(xiàn)[4]對(duì)照，其波譜數(shù)據(jù)基本一致，可確定該化合物為Rimboxo。

化合物2：白色粉末，分子式為C10H14N2O5；熔點(diǎn)（mp）：183～185 ℃。ESI-MS ： m/z 241[M-H]-。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：7.81（1H，s，H-3），6.28（1H，t，J=6.6 Hz，H-1′ ），4.40（1H，m，H-3′ ），3.91（1H，m，H-4′ ），3.79（1H，dd，J=3.0，12.0 Hz，H-5′ a），3.74（1H，dd，J=3.6，12.0 Hz，H-5′ b），2.25（2H，m，H-2′ ），1.88（3H，s，H-5）。13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：166.5（C-1），152.4（C-2），138.2（C-3），111.5（C-4），88.8（C-4′ ），86.2（C-1′ ），72.2（C-3′ ），62.8（C-5′ ），41.3（C-2′ ），12.5（εC-2）。與文獻(xiàn)[5]對(duì)照，其波譜數(shù)據(jù)基本一致，可確定該化合物為胸苷（Thymidine）。

化合物3：淡紅色粉末，分子式為C4H4N2O2；mp：320～322 ℃。ESI-MS：m/z 113.4[M+H]+。1H-NMR（DMSO-d6，600 MHz）δ：7.38（1H，d，J=7.6 Hz，H-6），5.44（1H，d，J=7.6 Hz，H-5）；13C-NMR（DMSO-d6，150 MHz）δ：164.4（C-4），151.5（C-2），142.2（C-6），100.2（C-5）。與文獻(xiàn)[6]對(duì)照，其波譜數(shù)據(jù)基本一致，可確定該化合物為尿嘧啶（Uracil）。

化合物4：白色粉末，化學(xué)式為C34H53N7O9；mp：261～ 264 ℃?？煸愚Z擊電離質(zhì)譜（FAB-MS）：m/z 704[M+H]+，591[M+H-Leu]+，120[Ph-CH2-CH=NH2]+。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：7.25（5H，m，Phe7-Ar），4.80（1H，d，J=6.0 Hz，Phe7-αHb），4.53（1H，br. s，Leu1-αH），4.48（1H，m，Thr4-αH），4.45（1H，m，Thr6-βH），4.36（1H，d，J=3.0 Hz，Thr6-αH），4.13（1H，d，J=16.2 Hz，Gly5-αH），4.03（1H，s，Ala3-αH），4.01（1H，d，J=7.2 Hz，Thr4-βH），3.90（1H，d，J=7.8 Hz，Ile2-αH），3.48（1H，d，J=16.2 Hz，Gly5-αHa），3.24（1H，dd，J=13.8，6.0 Hz，Phe7-βHa），3.02（1H，dd，J=13.8，6.6 Hz，Phe7-βHb），1.86（1H，m，Ile2- βH），1.65（2H，m，Leu1-βH），1.57（1H，m，Ile2-γHb），1.56（1H，m，Leu1-γH），1.53（2H，d，J=7.2 Hz，Ala3-βCH3），1.26（1H，m，Ile2-γHa），1.16（3H，d，J=6.6 Hz，Thr6-γCH3），1.08（3H，d，J=6.6 Hz，Thr4-γCH3），0.99（6H，d，J=6.6 Hz，Leu1-CH3），0.94（6H，m，Ile2-CH3）。13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：175.8（Ala3-CO），174.5（Leu1-CO），173.7（Phe7-CO），173.3（Thr6-CO），173.3（Thr4-CO），172.7（Ile2-CO），171.7（Gly5-CO），138.3（Phe7-γC），130.8（Phe7-εCH），129.6（Phe7-δCH），127.8（Phe7-ζCH），70.0（Thr6-βCH），67.7（Thr4-βCH），60.7（Thr6-αCH），60.5（Thr4-αCH），60.4（Ile2-αCH），55.9（Phe7-αCH），52.8（Leu1-αCH），52.2（Ala3-αCH），44.1（Gly5-αCH2），41.5（Leu1-βCH2），37.7（Phe7-βCH2），37.1（Ile2-βCH），27.0（Ile2-γCH），26.1（Leu1-γCH），23.6（Leu1-δCH3），21.4（Leu1-εCH3），20.3（Thr6-γCH3），20.1（Thr4-γCH3），16.6（Ala3-βCH3），15.7（Ile2-γCH3），11.3（Ile2-δCH3）。與文獻(xiàn)[7]對(duì)照，其波譜數(shù)據(jù)基本一致，可確定該化合物為環(huán)-（亮氨酸1-異亮氨酸2-丙氨酸3-蘇氨酸4-甘氨酸5-蘇氨酸6-苯丙氨酸7）[Cyclo-（Leu1-Ile2- Ala3-Thr4-Gly5-Thr6-Phe7）]。

化合物5：白色粉末，分子式為：C36H53N7O9；mp：185～188 ℃。FAB-MS： m/z 728[M+H]+，615[M+H-Leu]+，502[M+H-Leu-Leu]+，70[CH2-CH2-NH=CH- CH2]+。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：7.06（2H，d，J=8.3 Hz，Tyr4-δH），6.72（2H，d，J=8.3 Hz，Tyr4-εH），4.66（1H，m，Tyr4-αH），4.58（1H，m，Gly5-αHa），4.39（1H，m，Ser6-αH），4.22（1H，m，Pro3-αH），4.18（1H，m，Pro7-αH），4.03（1H，m，Ser6- βHa），3.99（1H，m，Leu1-αH），3.94（1H，m，Leu2-αH），3.65（1H，m，Gly5-αHb），3.62（1H，m，Ser6-βHb），3.55（2H，m，Pro3-δH），2.96（2H，m，Pro7-δH），2.42（1H，m，Tyr4-βHa），2.29（1H，m，Pro7-γHb），2.20（1H，m，Tyr4-βHb），2.09（1H，m，Pro3-βHa），2.02（1H，m，Pro7-βHa），1.97（1H，m，Pro3- γHa），1.85（1H，m，Pro3-βHb），1.81（1H，m，Pro7-βHb），1.68（1H，m，Leu1-γH），1.65（1H，m，Leu2-γH），1.58（2H，m，Leu1-βH），1.35（1H，m，Pro3-γHb），1.01（2H，m，Leu2- βH），1.00（1H，m，Pro7-γHa），0.95（3H，d，J=6.6 Hz，Leu1-δCH3），0.93（3H，d，J=6.6 Hz，Leu2-δCH3），0.92（3H，d，J =6.6 Hz，Leu1-δCH3），0.86（3H，d，J=6.6 Hz，Leu2-δCH3）。13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：173.0（Pro3-CO），172.9（Pro7-CO），172.6（Leu1-CO），172.2（Leu2-CO），170.8（Ser6-CO），170.7（Tyr4-CO），169.4（Gly5-CO），156.3（Tyr4-ζC），129.8（Tyr4-δCH），126.4（Tyr4-γC），115.0（Tyr4-εCH），61.1（Ser6-βCH2），61.1（Pro3-αCH），59.7（Pro7-αCH），58.0（Leu1-αCH），57.8（Leu2-αCH），52.9（Ser6-αCH），49.3（Tyr4-αCH），48.2（Pro3-δCH2），46.6（Pro7-δCH2），41.6（Leu1-βCH2），40.4（Leu2-βCH2），39.2（Gly5-αCH2），35.7（Tyr4-βCH2），31.1（Pro3-βCH2），28.1（Pro7-βCH2），24.8（Pro3-γCH2），24.3（Leu2-γCH），24.2（Leu1-γCH），22.5（Leu1-δCH3），22.2（Leu2-δCH3），21.9（Leu1-εCH3），21.5（Pro7-γCH2），19.9（Leu2-εCH3）。與文獻(xiàn)[7]對(duì)照，其波譜數(shù)據(jù)基本一致，可確定該化合物為環(huán)-（亮氨酸1-亮氨酸2-脯氨酸3-酪氨酸4-甘氨酸5-絲氨酸6-脯氨酸7）[Cyclo-（Leu1-Leu2-Pro3-Tyr4- Gly5-Ser6-Pro7）]。

化合物6：淡黃色粉末，分子式為C21H28O10，mp：210～213 ℃。ESI-MS： m/z 458[M+NH4]+。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：7.91（1H，d，J=9.0 Hz，H-4），7.52（1H，d，J=8.4 Hz，H-5），7.07（1H，d，J=8.4 Hz，H-6），6.26（1H，d，J=9.0 Hz，H-3），4.59（1H，d，J=7.2 Hz，H-1′′ ），3.97（3H，s，7-OCH3），1.43（3H，s，14-CH3），1.41（3H，s，15-CH3）。13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：163.8（C-2），162.5（C-7），154.7（C-10），146.39（C-4），128.4（C-5），117.2（C-9），114.4（C-8），113.1（C-3），109.0（C-6），98.7（C-1′ ），81.9（C-13），78.1（C-3′ ），78.1（C-5′ ），77.7（C-12），75.2（C-2′ ），71.7（C-4′ ），62.7（C-6′ ），56.7（7-OCH3），26.2（C-11），23.7（C-14），22.7（C-15）。與文獻(xiàn)[8]對(duì)照，其波譜數(shù)據(jù)基本一致，可確定該化合物為水合橙皮內(nèi)酯-β-D-葡萄糖苷（Meranzin hydrate-β-D- glucoside）。

化合物7：無(wú)色針狀結(jié)晶，分子式為C9H6O3；365 nm波長(zhǎng)處顯亮藍(lán)色熒光；mp： 231～233 ℃。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：7.84（1H，d，J=9.6 Hz，H-4），7.43（1H，d，J=8.4 Hz，H-5），6.77（1H，dd，J=8.4，2.4 Hz，H-6），6.69（1H，d，J=2.4 Hz，H-8），6.15（1H，d，J=9.6 Hz，H-3）。13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：162.3（C-7），161.8（C-2），155.8（C-9），144.6（C-4），129.2（C-5），113.1（C-6），111.7（C-3），110.9（C-10），102.0（C-8）。與文獻(xiàn)[9]對(duì)照，其波譜數(shù)據(jù)基本一致，可確定該化合物為傘形花內(nèi)酯（Umbelliferone）。

化合物8：無(wú)色膠狀物，分子式為C16H28O6。ESI- MS： m/z 317[M+H]+。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：5.93（1H，dd，J=17.4，10.6 Hz，H-2），5.23（1H，dd，J=17.4，1.2 Hz，H-1a），5.19（1H，d，J=10.6，1.2 Hz，H-1b），5.10（1H，m，H-6），4.35（1H，d，J=7.8 Hz，H-1′ ），3.80（1H，dd，J=12.0，2.4 Hz，H-6′ a），3.63（1H，dd，J=12.0，6.0 Hz，H-6′ b），3.33～3.14（4H，m，H-2′ ，H-3′ ，H-4′ ，H-5′ ），2.07（2H，m，H-5），1.66（3H，s，H-9），1.59（3H，s，H-8），1.61～1.57（2H，m，H-4），1.38（3H，s，H-10）。13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：144.5（C-2），132.1（C-7），125.7（C-6），115.8（C-1），99.5（C-1′ ），81.4（C-3），78.3（C-3′ ），77.6（C-5′ ），75.2（C-2′ ），71.7（C-4′ ），62.8（C-6′ ），42.6（C-4），25.8（C-9），23.6（C-5），23.2（C-8），17.7（C-10）。與文獻(xiàn)[10]對(duì)照，其波譜數(shù)據(jù)基本一致，可確定該化合物為里那醇苷（Linaloyl glucoside）

4 討論

本試驗(yàn)從枳實(shí)藥材中分離鑒定了5個(gè)雜環(huán)類(lèi)化合物，即Rimboxo、胸苷、尿嘧啶、環(huán)-（亮氨酸1-異亮氨酸2-丙氨酸3-蘇氨酸4-甘氨酸5-蘇氨酸6-苯丙氨酸7）、環(huán)-（亮氨酸1-亮氨酸2-脯氨酸3-酪氨酸4-甘氨酸5-絲氨酸6-脯氨酸7）；2個(gè)香豆素類(lèi)化合物，即水合橙皮內(nèi)酯-β-D-葡萄糖苷、傘形花內(nèi)酯；1個(gè)單萜苷類(lèi)化合物，即里那醇苷。其中，化合物1、2、3、8為首次從柑橘屬植物中分離得到，化合物4、5、6為首次從枳實(shí)藥材中分離得到；Rimboxo為二噁烷類(lèi)化合物，二噁烷和單萜苷為首次從柑橘屬植物中分離得到。本研究為枳實(shí)藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)奠定了一定的基礎(chǔ)。

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（收稿日期：2017-04-30 修回日期：2017-06-26）

（編輯：張 靜）