藏藥小檗皮的醇提工藝優化研究

郝露 周珍 馮慧 趙婭 周邦華 范剛 賴先榮

中圖分類號 R284.2 文獻標志碼 A 文章編號 1001-0408（2018）07-0958-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.07.23

摘 要 目的：優化小檗皮的醇提工藝。方法：以小檗皮中木蘭花堿、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿含量和浸膏量為評價指標，采用均勻設計-綜合評分法考察乙醇用量、乙醇體積分數、提取時間對提取工藝的影響；采用3次均勻設計試驗分別對第1次、第2次、第3次的提取工藝進行考察，分別確定3次提取試驗各自的優化工藝并進行驗證試驗，計算轉移率。結果：最優工藝為取小檗皮粗粉加入15倍量75%乙醇，回流提取2次，每次提取120 min 。驗證試驗中，小檗皮按優化工藝提取2次后木蘭花堿、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿的含量分別為58.96、4.82、3.07、23.29 mg/g，轉移率分別為93.85%、95.02%、96.28%、94.88%（RSD分別為3.87%、2.64%、4.00%、3.91%，n=3）。結論：優化的小檗皮乙醇回流提取工藝合理、可行，穩定性好。

關鍵詞 藏藥；小檗皮；乙醇提取物；均勻設計法；提取工藝

ABSTRACT OBJECTIVE： To optimize extraction technology of cortex of Berberis dictyophylla by ethanol. METHODS： Using the contents of magnoflorine， jatrorrhizine hydrochloride， palmatine hydrochloride and berberine hydrochloride， the amount of extract as evaluation indexes， the effects of ethanol amount， volume fraction of ethanol and extraction time on extraction technology were investigated by uniform design method-comprehensive scoring method. The extraction methods of first time， second time and third time were investigated by 3 times of uniform design test. The optimal schemes of 3 times of extraction test were determined and validation test was conducted， and the transfer rates were calculated. RESULTS： The optimal technology was as follows as coarse powder of cortex of B. dictyophylla， 15-fold 75% ethanol， extracting for 2 times， 120 min each time. In validation test， the contents of magnoflorine， jatrorrhizine hydrochloride， palmatine hydrochloride and berberine hydrochloride were 58.96， 4.82， 3.07， 23.29 mg/g after B. dictyophylla was extracted by optimization technology for 2 times. The transfer rates were 93.85%， 95.02%， 96.28%， 94.88%， respectively （RSD=3.87%， 2.64%， 4.00%， 3.91%， n=3）. CONCLUSIONS： The optimal ethanol reflux extraction technology of cortex of B. dictyophylla is reasonable and feasible with good stability.

KEYWORDS Tibetan medicine； Cortex of Berberis dictyophylla； Ethanol extract； Uniform design method； Extraction technology

小檗皮為小檗科植物刺紅珠（Berberis dictyophylla Franch.）及同屬多種植物莖或根的干燥內皮，為常用藏藥材（藏藥名：吉爾巴[1-2]）。《晶珠本草》記載：“小檗皮，功效解毒，治瘟疫，眼病”，即可用于治療黃水病、眼病、腎炎等疾病[3]。小檗皮主要化學成分有小檗堿、藥根堿、巴馬汀、木蘭花堿等生物堿類成分。藥理研究表明，生物堿類成分具有明顯的降血糖作用，對糖尿病及其并發癥（如糖尿病視網膜病變）等有良好的防治效果[4-5]。

針對小檗皮提取工藝，吳秦西等[6]前期開展了基于藏醫傳統用藥方法（小檗膏）的提取工藝（水煎煮法）研究，但其以柱色譜-紫外分光光度法測定鹽酸小檗堿含量并將其代表總生物堿的含量，難以反映各主要生物堿成分的提取率；另有研究[7]發現，水煎煮法制備的小檗膏中鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿的提取率均低于40%，且未測定其中含量最高且具有活性作用的木蘭花堿的含量。筆者前期研究的結果表明，不同體積分數的乙醇可以明顯提高小檗堿等生物堿的提取率。為全面提取出小檗皮中的活性成分，筆者參考北美黃連提取物標準及制法（70%乙醇提取物）[8]及小檗皮質量標準中的含量測定方法[9]，以小檗皮中4個主要生物堿類有效成分含量和浸膏量為指標，采用均勻設計-綜合評分法優化小檗皮的醇提工藝參數，為小檗皮現代制劑的研發提供參考。

1 材料

1.1 儀器

Agilent1260型高效液相色譜（HPLC）儀（美國Agilent公司，包括在線脫氣機、G1322A型四元泵、G1329A型自動進樣器、HT-340K型柱溫箱、G1315D型二級管陣列檢測器）；KQ-50B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；CPA225D型電子天平（德國賽多利斯公司）；ULUP-I-10T型超純水機（成都超純科技有限公司）；W201型恒溫水浴鍋（上海申順生物科技有限公司）。

1.2 藥材、對照品與試劑

小檗皮藥材，產地西藏（批號：20141201），由西藏甘露藏藥廠提供，為藏醫臨床使用的“白小檗”，經成都中醫藥大學民族醫藥學院賴先榮副研究員、范剛副研究員鑒定為小檗科植物刺紅珠的干燥莖內皮，符合六省區藏藥標準小檗皮藥材項下的有關規定[2]，薄層色譜檢出與鹽酸小檗堿、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀、木蘭花堿對照品對應的色譜斑點。

木蘭花堿對照品（四川賽因斯特生物科技有限公司，批號：MUST-14122416，純度：99.77%）；鹽酸藥根堿對照品（批號：110733-201108，供含量測定用）、鹽酸巴馬汀對照品（批號：110732-201309，供含量測定用）、鹽酸小檗堿對照品（批號：110713-201212，供含量測定用）均來源于中國食品藥品檢定研究院；磷酸、乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 生物堿的含量測定

參考文獻方法[9]進行測定。

2.1.1 色譜條件 色譜柱：Capcell Pak C18-MG Ⅱ S5（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈（A）-0.1%磷酸（B），梯度洗脫（0～10 min，14%～18%A；10～15 min，18%～23%A；15～20 min，23%～26%A；20～35 min，26%～26%A）；流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；檢測波長：270 nm；進樣量：10 μL。

2.1.2 混合對照品溶液的制備 分別精密稱取木蘭花堿、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿對照品13.42、10.20、11.06、10.00 mg，分別置于25、50、100、25 mL量瓶中，加入甲醇使其溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成質量濃度分別為0.537、0.204、0.110 6、0.400 mg/mL的4種對照品貯備液。分別精密量取上述各貯備液2、0.5、0.5、1 mL，置于同一10 mL量瓶中，加入甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成木蘭花堿、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿質量濃度分別為107.40、10.20、5.53、40.00 μg/mL的混合對照品溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備 精密量取“2.3”項下小檗皮提取液適量（分別取第1次、第2次和第3次提取液1、4、10 mL），置于50 mL量瓶中，加入溶劑[鹽酸-70%甲醇溶液（3 ∶ 100，V/V）]稀釋并定容，搖勻，經0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

2.1.4 系統適用性和專屬性試驗 分別吸取供試品溶液、混合對照品溶液和溶劑各10 μL，進樣，記錄色譜圖。結果表明，供試品溶液中4種成分的色譜峰與相鄰成分的色譜峰均可實現基線分離，其他成分對測定無干擾。理論板數以鹽酸小檗堿峰計不少于5 000，目標成分與相鄰峰間的分離度均大于1.5。色譜圖見圖1。

2.1.5 標準曲線的繪制 分別吸取“2.1.2”項下混合對照品溶液2、4、6、8、10、12 μL，進樣，記錄色譜圖，分別以4種成分的進樣量為橫坐標（x）、峰面積為縱坐標（y）進行線性回歸，得4種成分木蘭花堿、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿的線性方程分別為y=2 016.9x+14.357（r=0.999 6）、y=4 207.6x-0.386 7（r=0.999 3）、y=4 448.9x-1.971 4（r=0.999 9）、y=3 909.9x-7.071 4（r=0.999 5）。結果表明，4種成分進樣量線性范圍分別為0.214 8～1.288 8、0.020 4～0.122 4、0.011 1～0.066 3、0.080 0～0.480 0 μg。

2.1.6 定量限考察 取“2.1.2”項下混合對照品溶液適量，倍比稀釋，連續進樣測定6次，記錄色譜圖。當信噪比為10 ∶ 1時計算得定量限。結果，木蘭花堿、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿的定量限分別為2.685、2.040、2.760、4.000 ng。

2.1.7 精密度考察 分別吸取“2.1.2”項下混合對照品溶液，于同日內分別連續進樣6次，記錄色譜圖。結果，木蘭花堿、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿峰面積的RSD分別為0.20%、0.68%、0.34%、0.33%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.1.8 穩定性考察 精密吸取同一提取液（第1次提取的5號提取液），制備成供試品溶液后分別于室溫下放置0、5、10、15、20、24 h進樣，記錄色譜圖。結果，木蘭花堿、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿含量的RSD分別為0.37%、1.97%、1.86%、0.33%（n=6），表明供試品溶液在24 h內穩定性良好。

2.1.9 重復性考察 取同一小檗皮提取液（第1次提取的5號提取液）6份，平行制備成供試品溶液，進樣測定，記錄色譜圖及峰面積，計算含量。結果，木蘭花堿、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿含量的RSD分別為0.27%、1.37%、1.88%、0.45%（n=6），表明該方法重復性良好。

2.1.10 準確度考察 精密量取同一份已知含量的小檗皮濃縮液（3次提取合并后木蘭花堿、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿質量濃度分別為7.184 0、0.599 4、0.380 9、2.884 5 mg/mL）9份，每份1 mL，分別按已知含量的 50%、100%、150% 3個水平加入木蘭花堿、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿對照品，制備供試品溶液，進樣測定，計算回收率。結果，木蘭花堿、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿的平均回收率分別為97.07%、97.37%、100.7%、98.51%，RSD分別為1.00%、0.97%、1.42%、0.86%（n=9），表明方法準確度較好。

2.1.11 含量測定 取小檗皮粉末3份，每份約0.5 g，精密稱定，制備成供試品溶液，測定并計算含量。結果，小檗皮藥材中木蘭花堿、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿的平均含量分別為62.818 6、5.071 6、3.190 4、24.544 2 mg/g（n=3）。

2.2 浸膏得率測定

照醇溶性浸出物測定法[10]。精密量取小檗皮提取液25 mL，置于已干燥至恒質量的扁平稱量瓶中，水浴蒸干，于105 ℃干燥3 h，置于干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定質量，計算浸膏得率（浸膏質量/藥材質量×100%）。

2.3 均勻設計試驗

因提取次數對乙醇用量、提取時間產生交互影響，在預試驗基礎上，將提取次數作為獨立因素進行單因素考察，按經驗設定提取次數為3次，每次提取均選擇乙醇用量（X1）、乙醇體積分數（X2）和提取時間（X3）為考察因素，以4種成分含量和浸膏得率為評價指標。本試驗根據各因素對提取工藝影響的貢獻大小分配權重系數，即木蘭花堿含量（Y1）、鹽酸藥根堿含量（Y2）、鹽酸巴馬汀含量（Y3）、鹽酸小檗堿含量（Y4）與浸膏得率（Y5）權重系數均為0.2，采用綜合評分法[11]評分。綜合評分（Y）=Y1/Y1max×0.2+Y2/Y2max×0.2+Y3/Y3max×0.2+Y4/Y4max×0.2+Y5/Y5max×0.2。因素與水平見表1，按U6（64）均勻設計表安排設計進行回流提取試驗[12]。

2.3.1 第1次提取均勻設計試驗安排與結果 稱取小檗皮藥材粉末30 g，置于1 000 mL圓底燒瓶中，回流提取1次。提取液趁熱濾過（100目濾布），制成250 mL的小檗皮提取液，每組試驗重復3 次。試驗安排與結果見表2。

應用DPS 7.05軟件對試驗數據進行多元二次逐步回歸分析，結果見表3。

以Y的回歸方程為主要方程，X1X2的回歸方程系數為正值且有極顯著性影響，其取值應為極大值（即乙醇用量為 18倍量，乙醇體積分數為90%?？紤]提取效果、成本及X1X2的交互作用，按15倍乙醇用量、75%乙醇進行驗證試驗）； X3未納入回歸方程，其取值可以為極小值至極大值之間的任意值（參考提取時均勻設計試驗安排表及提取效果，按提取時間為120 min進行驗證試驗）。綜合考慮試驗時間、成本及提取效果，本研究按15倍乙醇用量、75%乙醇、120 min提取時間進行第一次提取試驗的驗證試驗。

該工藝條件下，Y1、Y2、Y3、Y4的預測值分別為41.05、3.57、2.29、16.59 mg/g，轉移率（提取液中各成分的量/藥材中各成分的量×100%）為65.35%、70.39%、71.78%、67.59%，Y5預測值為22.79%，假設隨機誤差滿足正態分布，按照醫學統計學對醫學參考值的計算[13]及均勻設計法對預測值可信區間的估計[11]，則實測值的數據落在預測值的99%的可信區間為[預測值±2.58×S]，可得預測值的99%可信區間估計范圍為33.38～48.72、2.90～4.24、1.93～2.64、13.64～19.54 mg/g（以下試驗的分析過程相同）。

3批樣品第1次提取的驗證試驗結果見表4。

驗證試驗結果表明，各指標的含量高于均勻設計試驗中各試驗號的結果。第1次提取時，4種成分含量均值分別為46.52、3.89、2.51、18.54 mg/g，轉移率為72.96%、76.66%、78.56%、75.39%，4種成分實測值處于含量預測范圍間，提示小檗皮回流提取優化工藝穩定、可行。故確定小檗皮第1次提取的優化工藝為取小檗皮粉末適量，加15倍量75%乙醇，回流提取120 min。

2.3.2 第2次提取均勻設計試驗安排與結果 稱取小檗皮藥材粗粉30 g，照上述已優化提取工藝進行第1次回流提取，除去濾液，取藥渣按均勻設計試驗安排進行試驗，提取及綜合評分方式同第1次提取，每組試驗重復3次，結果見表5。

采用DPS 7.05軟件對試驗數據進行多元二次逐步回歸分析，結果見表6。

分析結果同“2.3.1”項下。綜合考慮試驗時間、成本及提取效率，本研究按15倍乙醇用量、75%乙醇、120 min提取時間進行第2次提取試驗的驗證試驗。

該工藝條件下第2次提取時Y1、Y2、Y3、Y4的預測值分別為13.07、1.12、0.69、5.58 mg/g，轉移率為20.18%、22.08%、21.63%、22.73%，Y5預測值為7.22%，預測值的99%可信區間估計范圍為8.87～17.27、0.83～1.41、0.52～0.86、4.17～6.99 mg/g。

3批樣品第2次提取的驗證試驗結果見表7。

驗證試驗結果表明，各指標的含量與均勻設計試驗各試驗號中最大結果相差不大。第2次提取時，4種成分的含量均值分別為11.88、0.93、0.57、4.64 mg/g，轉移率分別為18.91%、18.39%、17.75%、18.89%，4種成分實測值處于含量預測范圍區間內，提示小檗皮回流提取優化工藝穩定、可行。故小檗皮第2次提取優化工藝為取小檗皮藥渣適量，加15倍量75%乙醇，回流提取120 min。

2.3.3 第3次提取均勻設計試驗安排與結果 稱取小檗皮藥材粉末30 g，照已優化提取工藝進行第1、2次回流提取，除去濾液，取藥渣按第3次提取均勻設計試驗安排進行試驗，提取及綜合評分方式同第1次試驗，每組試驗重復3次，結果見表8。

應用DPS 7.05軟件對試驗數據進行多元二次逐步回歸分析，結果見表9。

以Y的回歸方程為主要方程，其相關系數R=0.537 8，影響因素顯著水平P（X1X2）=0.258 1>0.05，提示回歸方程無統計學意義，其各因素取值可以是均勻設計水平范圍內的任意值?？紤]試驗時間、成本及提取效果，可以選擇8倍量溶劑提取30 min，提取溶劑與前兩次提取一致，本研究按8倍量75%乙醇提取30 min進行第3次提取試驗的驗證試驗。該工藝條件下第3次提取時Y1、Y2、Y3、Y4預測值分別為4.27、0.28、0.18、1.59 mg/g，轉移率為6.79%、5.52%、5.64%、6.48%，Y5預測值為2.18%，預測值的99%可信區間估計范圍為3.84～4.69、0.16～0.39、0.11～0.25、0.84～2.34 mg/g。

3批樣品第3次提取的驗證試驗結果見表10。

驗證試驗結果表明，按優化工藝進行第3次提取時，4種成分含量均值分別為2.16、0.17、0.10、0.90 mg/g，轉移率為3.42%、3.44%、3.17%、3.65%，4種成分實測值多數與含量預測值相近（實測值與預測值之間差異的原因，可能來源于系統誤差與增大的偶然誤差），故小檗皮第3次乙醇回流提取優化工藝為取小檗皮藥渣適量，加8倍量75%乙醇，回流提取30 min。

第3次轉移率僅為3.5%左右，前兩次提取4種成分木蘭花堿、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿的總轉移率分別為92.97%、95.04%、96.54%、94.44%，均達90%以上，從節約成本的角度考慮，故小檗皮乙醇回流提取工藝的優化工藝為取小檗皮粗粉適量，加入15倍量75%乙醇回流提取2次，每次120 min。

2.4 驗證試驗

為了考察均勻設計試驗的結果是否具有重現性，稱取小檗皮藥材粉末100 g，共3份，每份按已優化工藝提取2次進行驗證試驗，結果見表11。

結果表明，小檗皮按優化工藝提取2次后4種成分木蘭花堿、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿的含量均值分別為58.96、4.82、3.07、23.29 mg/g，轉移率分別為93.85%、95.02%、96.28%、94.88%，RSD分別為3.87%、2.64%、4.00%、3.91%（n=3），提示優化的小檗皮乙醇提取工藝穩定、可行。

3 討論

3.1 色譜條件確定

本文在文獻[9]的基礎上，對小檗皮醇提物中4種成分測定方法進行了改進，并進行了方法學考察。在對測定波長的考察中，以文獻報道[7，14]的270、345 nm分別作為檢測波長，發現在345 nm波長處鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿檢測靈敏度高，但木蘭花堿的吸收很弱；而在270 nm波長處雜質對測定成分的干擾較小，4種成分的檢測靈敏度及線性關系均良好，故選用270 nm為檢測波長。在流動相的選擇中，筆者分別嘗試了甲醇-水溶液、甲醇-磷酸溶液、乙腈-0.1%磷酸溶液、乙腈- 0.02 mol/mL碳酸氫鉀溶液和乙腈-三乙胺溶液等5種不同的流動相體系，最終確定采用乙腈-0.1%磷酸溶液為流動相，梯度洗脫，此流動相體系可使4種成分得到有效分離，并且峰形對稱。在供試品溶劑考察中，分別考察了甲醇溶液與不同比例的鹽酸-甲醇溶液，發現溶劑為鹽酸-70%甲醇（3 ∶ 100）溶液時，供試品各色譜峰均分離良好，且峰形對稱。

3.2 含量測定方法改進

目前針對小檗皮的提取工藝，僅本課題組前期做了基于藏醫傳統用藥方法（小檗膏）的提取工藝（水煎煮法）研究[6]，但采用紫外分光光度法測定總生物堿含量，在一定程度上很難闡析提取工藝對某個活性成分提取率的影響，且該工藝提取率較低。此次研究采用HPLC法，測得小檗皮藥材中木蘭花堿、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿的平均含量分別為6.28%、0.51%、0.32%、2.45%，其中以木蘭花堿的含量最高，鹽酸小檗堿含量次之，且以小檗皮中此4種主要活性成分含量和浸膏得率為指標，優化了小檗皮乙醇回流法的提取工藝參數。含量測定結果表明，與傳統工藝相比，乙醇回流提取法提高了小檗堿等有效成分的含量（見表11），驗證試驗結果也表明了本文建立的藏藥小檗皮回流提取工藝合理穩定、可行，各成分的轉移率明顯提高（從文獻的低于40%[7]提高到90%以上），可以有效地提高藥材的利用率，為藏醫對小檗皮的現代制劑研發提供了參考。

3.3 提取工藝參數確定

本文結合生產實際，對試驗中的因素-水平選擇及其取值范圍進行了合理預測。研究結果表明，乙醇用量、乙醇體積分數是主要影響因素，而提取時間影響不大。為了減少提取多次引起的交互影響，考察提取次數因素時，將每次提取時對4種成分提取率的影響因素分別進行考察，因此分步進行了3次提取試驗，并對每次提取試驗結果進行單獨的分析和驗證，確定每次提取的最優提取工藝參數，最終得出最優工藝條件。從優化工藝的驗證試驗可以看出，4種成分的總轉移率均在90%以上。故結果表明，在此工藝條件下，僅需提取2次，各成分就能較好地被提取完全。本文選取的4種成分在提取物中所占的比例為29.64%（4種成分總含量×投藥量30 g）/（浸膏量×投藥量30 g），與同屬植物來源的三顆針藥材的化學成分比較[15]，提示小檗皮提取物中可能還含有除這4種生物堿成分外的其他成分，這些成分是否與小檗皮的臨床療效有關，有待進一步深入研究。

參考文獻

[ 1 ] 衛生部藥典委員會.中華人民共和國藥品標準：藏藥：第一冊[S].北京：人民衛生出版社，1995：340.

[ 2 ] 六省區衛生局.藏藥標準：第一、二分冊合編本[S].西寧：青海人民出版社，1979：11.

[ 3 ] 帝瑪爾·丹增彭措.晶珠本草[M].上海：上海科學技術出版社，1986：175.

[ 4 ] 張燕，孟憲麗，岳麗珺，等.藏藥小檗皮對糖尿病模型小鼠血糖水平影響的初步研究[J].現代生物醫學進展，2013，13（19）：3619-3622.

[ 5 ] 岳麗珺，孟憲麗，張燕，等.藏藥小檗皮對糖尿病大鼠視網膜PKC-β、VEGF、HIF-1α表達的影響[J].世界科學技術-中醫藥現代化，2014，16（1）：181-186.

[ 6 ] 吳秦西，王友利，張燕，等.均勻設計法優化藏藥小檗皮的煎煮法提取工藝[J].時珍國醫國藥，2013，24（7）：1637- 1639.

[ 7 ] 葉凡，周邦華，王勝，等. HPLC法測定藏藥小檗膏提取物中3種生物堿的含量[J].時珍國醫國藥，2016，27（2）：286-289.

[ 8 ] 侯團章.中草藥提取物：第1卷[M].北京：中國醫藥科技出版社，2004：297-300.

[ 9 ] 李艷，呂秀梅，林亞麗，等.藏藥小檗皮的質量標準研究[J].中國中藥雜志，2016，41（4）：592-596.

[10] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：四部[S]. 2015年版.北京：中國醫藥科技出版社，2015：202.

[11] 牟嬋，周若鵬，賴瀅瀅.正交試驗法優選復方淫羊藿咀嚼片的提取工藝[J].中國藥房，2015，26（28）：3986-3988.

[12] 方開泰.均勻設計與均勻設計表[M].北京：科學出版社，1994：25、149.

[13] 李康，賀佳.醫學統計學[M]. 6版.北京：人民衛生出版社，2013：24.

[14] 陳芳，鄧雁如，許妍妍，等.雙波長HPLC同時測定黃連及金芪降糖片中6種生物堿的含量[J].中國實驗方劑學雜志，2013，19（17）：60-65.

[15] 王志東，宋寶安，楊松，等.貴州中草藥三顆針化學成分研究[J].貴州大學學報（自然科學版），2009，26（3）：11-13、17.

（收稿日期：2017-06-20 修回日期：2017-09-10）

（編輯：劉 萍）