一個遺傳性對稱性色素異常癥家系ADAR1基因突變分析

陳源昊琪 焦亞寧 楊彪 董輝 吳昊 喻楠 葛新紅

750004銀川，寧夏醫科大學臨床醫學院（陳源昊琪），總醫院皮膚科（焦亞寧、楊彪、董輝、喻楠、葛新紅）；四川省都江堰市醫療中心（吳昊）

遺傳性對稱性色素異常癥（dyschromatosis symmetrica hereditaria，DSH，MIM127400）是一種少見的單基因遺傳性皮膚病，呈常染色體顯性遺傳，有較高的外顯率和較低的發病率［1］。2003年Miyamura等［2］利用基因連鎖分析和一代測序技術將其致病基因定位于常染色體1q11?1q21上的ADAR1基因。我們應用Sanger測序技術檢測一DSH家系ADAR1基因突變情況。

一、臨床資料

先證者男，8歲。2歲時雙手背、足背開始出現粟粒大小散在色素沉著斑及色素減退斑，不相互融合，對稱分布，無自覺癥狀，皮損隨年齡增加而逐漸增多、擴大；5歲時顏面出現雀斑樣皮損。日光照射后皮疹顏色加深，冬輕夏重（圖1）。皮膚科檢查：雙手背、足背、頸項部、踝部可見米粒至蠶豆大小褐色沉著斑和色素減退斑，似網狀，對稱分布，局部皮損未見融合，無皮膚萎縮，顏面及頸部散在雀斑樣損害；系統檢查未見異常。手背部皮損病理表現：色素沉著處棘層和基底層內黑素細胞增加，真皮上部噬色素細胞增多；白斑處黑素細胞減少甚至消失。

先證者的母親、外祖母及其他患者均自幼出現上述類似皮損，隨年齡增加，雙手背、足背出現色素沉著斑和色素減退斑，頸部、顏面部有雀斑樣損害。所有患者均無外傷史、特殊色素性藥物接觸史，否認日光性皮炎史。患者父母非近親婚配。對該家系4代29例成員中目前有6例患者（男1例，女5例），多于嬰幼兒期發病，無隔代遺傳現象，遺傳方式符合常染色體顯性遺傳（圖2）。

圖1 先證者手部（1A）及頸部（1B）皮損

圖2 遺傳性對稱性色素異常癥家系圖

二、方法

1.DNA提取：簽署知情同意書后取該家系8例成員（5例患者、3例非患者）及100例無血緣關系的健康人對照外周血各4～5Ml，乙二胺四乙酸抗凝，-80℃保存。采用北京康為世紀DNA試劑盒提取DNA，標化質量濃度80mg/L。

2.引物設計：根據文獻［3］設計，ADAR1基因2號外顯子有3對引物，4～5、8～9、10～11、14～15外顯子分別共用1對引物，共13對引物，由北京華大基因技術有限公司合成。

3.ADAR1基因PCR擴增：擴增ADAR1基因的15個外顯子。PCR體系為50μl，PCR 反應混合試劑（Mix）25μl，上下游引物各1 μl，DNA模板2 μl，ddH2O 21μl，反應條件為：94℃預變性5min；94℃ 35 s，52～ 58℃ 30 s，72℃ 40 s，35個循環；充分延伸10min，4℃保存產物，產物純化后用ABI 3730XLDNA測序儀進行直接測序。

三、結果

將ADAR1基因的15個外顯子序列與GeneBank中ADAR標準序列對比，發現家系中5例患者在2號外顯子的第1420位堿基C均突變為T，此突變為無義突變，即c.1420C ＞ T（p.Arg474X）（圖3），且均為雜合突變，而家系正常成員和100例健康對照無此突變。

圖3 遺傳性對稱性色素異常癥家系成員和健康對照ADAR1基因測序圖 家系患者（先證者和其母親）ADAR1基因1 420位堿基C突變為堿基T，而家系非患者成員和健康對照均無此突變

四、討論

研究證實，DSH的致病基因為ADAR1，到目前為止，人類基因突變數據庫（HGMD）已收錄188種突變位點，基因突變方式主要包括錯義突變、無義突變、移碼突變、剪切位點突變，移碼突變及錯義突變多見［4］。本研究檢測到該家系中患者的ADAR1基因2號外顯子末端存在c.1420C＞T（p.Arg474X）無義突變。Miyamura等［2］曾報道該突變，其導致提前產生終止密碼子并編碼出無效截短蛋白，不完整的缺陷蛋白不能形成同源二聚體，不具有與底物識別和結合功能，可能影響后續重要的功能區域，引起蛋白結合功能域的結構和功能異常，從而導致皮膚色素異常。Zhang等［5］回顧2003—2013年發表的關于DSH家系ADAR1基因突變的文章，發現R474X、R1083C、R1096X和R1155W突變多次在不同的家系中被檢測出，推測這4個突變可能是DSH的熱點突變。本研究雖然沒有發現新的突變，但進一步證實該位點可能為突變熱點。本文家系中，在基因型和臨床表型之間沒有發現明顯的相關性，患者都有相同的突變，但皮損部位和程度不盡相同，先證者皮損最重且累及頸部，色素沉著和色素減退差異明顯，而先證者祖母和母親皮損相對較輕，未累及踝部，提示DSH表型可能與其他因素相關，如日照、溫度、病毒感染等。此前也有研究發現，該病臨床表型與基因型之間無明確相關性［6?7］。