植物乳桿菌（HCS03-002）通便功效試驗

湯純 閔祥博 范翠翠 張春宇

益生菌是一類對宿主有益的活性微生物，其能夠粘附于腸道中，通過短暫的定植促進腸道內微生態(tài)平衡，促進有益菌增殖、抑制有害菌生長、增強機體免疫力、促進營養(yǎng)物質消化吸收。小兒便秘是一種常見臨床消化道疾病，多因飲食不當，過多食入辛、辣、油膩食物或過多食用少渣精細食物，導致腸道干澀，蠕動減慢從而導致便秘。這種便秘多為功能性便秘，少見病理性便秘，其根本原因為腸道微環(huán)境失調所導致。本研究針對功能性便秘這種特定癥狀作為研究方向，應用鹽酸洛哌丁胺作為造模藥物建立腸蠕動抑制模型，考察漢臣氏（沈陽）兒童制品有限公司自主分離的菌株植物乳桿菌HCS03- 002的通便益生特性，為今后該菌株的后續(xù)開發(fā)、生產提供數(shù)據支持。

材料與方法

實驗動物。昆明（KM）小鼠，18～22g，4～5周齡，50只，雄性。購于遼寧長生生物技術股份有限公司，許可證號：SCXK（遼）2015- 0001。

菌種。漢臣氏（沈陽）兒童制品有限公司分離的植物乳桿菌HCS03- 002，實驗室保存。

試劑及儀器。鹽酸洛哌丁胺、活性炭粉、阿拉伯樹膠、天平、注射器、直尺、眼科鑷、手術剪。

實驗方法。

（1）實驗動物分組樣品給予時間 實驗設三個劑量組，一個空白對照組和一個模型對照組。空白對照組和模型對照組同途徑給蒸餾水。

樣品給予時間21天。分組及給樣方案詳見表1。

（2）實驗步驟 墨汁配制：準確稱取阿拉伯樹膠100g，加水800ml，煮沸至溶液透明，再稱取活性炭粉50g加至上述溶液中煮沸3次，待溶液涼后加水定容到1000ml，于冰箱中4℃保存，用前搖勻。

鹽酸洛哌丁胺溶液（0.8mg/ml）配制：準確稱取鹽酸洛哌丁胺16mg，加入20ml蒸餾水充分溶解，現(xiàn)用現(xiàn)配。

模型建立：小鼠平衡飼養(yǎng)3天后，按體重隨機分組，連續(xù)給樣品21天后，各組小鼠禁食不禁水16h。模型對照組和三個劑量組給予鹽酸洛哌丁胺（8mg/kg），空白對照組給蒸餾水。

指標測定：給鹽酸洛哌丁胺后0.5小時，劑量組分別灌胃給予含受試樣品的墨汁，空白和模型對照組灌胃墨汁；25分鐘后立即脫頸椎處死動物，從幽門至墨汁前沿為“墨汁推進長度”。按下式計算墨汁推進率：

數(shù)據處理及結果判定：應用SPSS軟件的單因素分析方法（One- Way- Anova）對墨汁推進率進行組間統(tǒng)計學比較。

結果

墨汁推進率。根據各組實驗動物墨汁推進率（表2）可知：本次試驗模型對照組墨汁推進率（49%）低于空白對照組（73%），本次試驗造模成功；通過組間統(tǒng)計學分析，植物乳桿菌3g/kg組（63%）與模型對照組（49%）比較，有顯著性差異。

實驗過程中，模型對照組墨汁推進率明顯低于空白對照組，說明本方案造模方法是可行的，能夠實現(xiàn)腸蠕動的抑制。各給樣組均表現(xiàn)出有一定的通便功效，1g/kg、2g/kg、3g/kg劑量組墨汁推進率分別為55%、61%、63%，均高于模型對照組（49%），但未表現(xiàn)出明顯的劑量依賴關系；這種現(xiàn)象說明植物乳桿菌可能在1g/kg劑量下已經達到最大腸道定植效果，提高給樣劑量如2g/kg及3g/kg無法繼續(xù)放大通便效果；這種現(xiàn)象也有可能是因為給樣周期短導致的，在后續(xù)的實驗中，在保留現(xiàn)有方案下，可以通過增加其他劑量組或調整給樣周期來進行改進，以期達到最優(yōu)試驗效果，從表觀水平上，進一步評價植物乳桿菌（HCS03-002）的小鼠體內通便效果。綜上，在3g/ kg劑量下，連續(xù)21天口服灌胃植物乳桿菌（HCS03- 002），對小鼠腸蠕動抑制模型有較好的通便效果；同時說明，本公司植物乳桿菌（HCS03- 002），具有一定的開發(fā)潛力。

作者簡介：

湯純（1987-），男，助理工程師，從事食品及保健品研發(fā)工作。通訊作者：湯純（1987-）。