精子DNA碎片率對體外受精胚胎移植妊娠結局的影響研究

陶萍

【摘要】 目的：探討精子DNA碎片率（DNA fragmentation index，DFI））對體外受精胚胎移植（IVE-ET）過程中妊娠結局的治療影響。方法：收集140例體外受精（IVF）周期患者作為研究對象進行回顧性分析，采用精子染色質擴散實驗（spermchromatin dispersion，SCD）對進行精子DNA碎片率檢測，總共分為三組，A組低DFI（<10%），B組中DFI（10%～25%），和C組高DIF（>25%）。比較三組的受精率、優胚率、卵裂率及臨床妊娠率，并分析三組的精液參數的差異。結果：A組、B組的受精率、臨床妊娠率高于C組，差異有統計學意義（P<0.05）；A組優胚率高于B組、C組，A組、C組差異有統計學意義（P<0.05）；三組卵裂率差異無統計學意義（P>0.05）。A組、B組、C組其他精液常規指數也有差異，其中，三組中A組前向運動精子（Progressive motility，PR）百分率、精子正常形態率顯著高于C組（P<0.05），A組高于B組，但差異無統計學意義（P>0.05）。結論：（1）前向運動精子數量、精子正常形態率會隨精子DFI升高而降低；（2）精子DFI高于一定閾值（25%）會影響IVF受精率和優胚率。

【關鍵詞】 精子DNA碎片率； IVE-ET； 優胚率； 受精率

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2018.11.084 文獻標識碼 B 文章編號 1674-6805（2018）11-0171-02

相關研究發現，隨著當今社會快速發展，在多種因素的綜合影響下，不孕不育患者的數量在逐年增加。在這一類患者人群中，男性患者的比例占到了50%[1]。目前男性不育的主要診斷指標還是精液常規參數，包括精子濃度、精子活動率及精子形態學檢查等，但其診斷存在很大局限性，不能全面反映精子的受精能力[2]。精子DNA碎片率（DFI）是指發生DNA鏈斷裂的精子占全部精子的百分比。精子自身沒有DNA修復機制，而染色質結構的完整性是正常受精、胚胎發育與妊娠的前提條件[3-4]。精子DNA損傷程度對于生殖結局是否存在不利影響是臨床關注的重點問題[5]。為了對這一問題進行更深入的了解，本文通過對中心140例男性患者的精液進行了臨床探究，對于精子形態及DFI對IVE-ET妊娠結局的影響進行了回顧性的分析，為研究來自精子的因素對IVE-ET的影響提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機選擇筆者所在醫院在2017年1-7月接受體外受精-胚胎移植（IVE-ET）治療的符合納入標準的患者140例進行臨床探究。納入標準：夫婦染色體G顯帶技術檢查均為正常核型，女方為單純雙側輸卵管阻塞性因素不孕，且不合并其他女性不孕因素，年齡<40歲，BMI<24 kg/m2，助孕次數≤2次，月經第2～5天測基礎內分泌值正常，無卵巢手術史、放化療史及遺傳病家族史，男性檢查包括男性第二性征、陰莖、陰囊、精索、輸精管、附睪、睪丸等均無異常，常規IVF，新鮮精液標本。排除標準：重度少弱精子癥患者。女方年齡22～40歲，平均（31.60±6.08）歲。患者的不育年限1.1～10.4年，平均（4.8±1.6）年。

1.2 儀器與試劑

日本Olympus公司光學顯微鏡，西班牙Microptic公司計算機輔助精子分析儀，深圳市博銳德生物科技有限公司精子DNA碎片檢測試劑盒和Diff-Quik 染色液，美國Irvine公司精子分離液，瑞典Vitrolife公司GOMPS PLUS培養液。

1.3 方法

1.3.1 精液采集和處理 男方禁欲2～7 d，在取卵當日以手淫法收集精液。精液取出后立即放置于37 ℃的恒溫培養箱內，待精液完全液化后，留取小部分精液進行精液常規檢測和DFI檢測。精液常規檢測按照WHO實驗室手冊（第5版）標準進行，精子形態學分析采用Diff-Quik染色，采用Kruger嚴格形態學標準閱片。剩余大部分精液采用密度梯度離心法處理，處理后調整精液密度，用于IVF受精。

1.3.2 精子DFI檢測 采用精子染色質擴散法（SCD）：按照變性、去核蛋白、脫水、染色等步驟制精子標本片，200倍光學顯微鏡下觀察制得玻片。根據Fernández標準分級，大暈環和中暈環精子為 DNA完整精子，小暈環、無暈環和退化精子為DNA損傷精子。以DNA損傷精子數與計數總數（500個）之比為精子DFI。共有140例入組周期，根據DFI值將入組患者分為三組：A組低DFI（<10%）共88例，B組中DFI（10%～25%）共38例，和C組高DIF（>25%）共14例。

1.3.3 IVF治療 采用本中心常規的超排卵方案進行，B超及雌二醇（E2）水平監測卵泡發育，卵泡發育成熟后，肌注人絨毛膜促性腺激素（hCG），36 h后陰道B超引導下行穿刺取卵術取卵。取卵當日行常規IVF授精，授精后16～18 h觀察受精情況，40～42 h觀察卵裂情況。72 h后選擇1～2個優質胚胎進行移植，移植后14 d尿和血hCG陽性者4周后行B超檢查，見宮內妊娠囊為臨床妊娠。

1.4 統計學處理

本次試驗探究中所有數據全部采用SPSS 14.0統計軟件進行處理分析，計量資料以（x±s）表示，采用獨立樣本t檢驗，計數資料以率（%）表示，采用字2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 精子DFI與精液常規參數的比較

共140例取卵周期，A組88例，B組38例，C組14例。A組、B組精常規各參數比較差異無統計學意義（P>0.05）。C組精子濃度和精子活力與A組、B組比較差異無統計學意義（P>0.05），前向運動精子數和正常精子形態率顯著低于A組，差異有統計學意義（P<0.05），見表1。

2.2 精子DFI與IVF結局比較

A有88例取卵周期，73例移植周期，B組有38例取卵周期，32例移植周期，C組有14例取卵周期，11例移植周期。A組、B組的受精率、卵裂率、優胚率和臨床妊娠率差異無統計學意義（P>0.05）。C組的受精率和臨床妊娠率顯著低于A組、B組，優胚率顯著低于A組，差異有統計學意義（P<0.05），見表2。

3 討論

精子DNA完整性對于父方基因正常遺傳給子代是至關重要的，是精子發揮正常功能的先決條件[6-8]。精子DNA碎片的產生不僅會嚴重影響到精子的受精能力，影響受精后原核的形成，還可能導致流產，后代先天畸形或者某些遺傳性疾病[9]。對于精子DNA損傷影響胚胎質量的機制目前還不清楚，比較認同的觀點是精子染色質的異常導致胚胎質量下降[10]。精子DFI反映了精子DNA的完整性，作為一項評價精液質量和預測生育能力的新指標，精子DFI已成為近年來生殖醫學界關注的焦點[11-12]。本文重點研究了精子DFI與精液常規參數的相關性，以及精子DFI對IVF結局的影響。

本文研究結果顯示，前向運動精子數和精子正常形態率會隨精子DFI升高而降低，而這兩項精液常規指標通常用于對IVF-ET結局的預測，但精確度和準確性有限。進一步比較不同精子DFI組的IVF相關數據，可以發現，當精子DFI<25%時，其對胚胎質量、臨床妊娠率無顯著影響，但當其>25%時，優胚率和臨床妊娠率則有明顯的下降，說明當精子DFI高于25%閾值時，IVF結局會有顯著影響。將精子DFI與精液常規指標相結合，無疑可以更精確地預測IVF結局。

綜上所述，本文通過對中心140例不孕不育患者進行臨床探究，驗證了精子DFI與精液常規指標的關系，且當其高于一定閾值時會對IVF結局造成影響。不過由于本次臨床試驗樣本數量較小，說明性有限，應該進一步擴大樣本數量進行探究。

參考文獻

[1]羅璐，王瓊，周燦權，等.體重對體外受精-胚胎移植妊娠結局的影響[J].中國實用婦科與產科雜志，2015，26（3）：205-208.

[2]崔建志.精子形態對體外受精-胚胎移植治療結局的影響[J].基層醫學論壇，2015，19（35）：4961-4963.

[3]劉德一.精子功能檢測與男性不育診治的新進展[J].中華男科學雜志，2007，13（2）：99-102.

[4]徐步芳，孫貽娟，陸小溦，等.精子DNA碎片率對常規體外受精-胚胎移植結局的影響[J].中國男科學雜志，2011，25（8）：23-26.

[5]曾玖芝，袁華，龔衍，等.精子DNA損傷與常規體外受精—胚胎移植結局關系研究[J].廣西醫科大學學報，2015，32（4）：564-567.

[6] 曾玖芝，龔衍，梁梅玉，等.精子DNA損傷對常規體外受精-胚胎移植結局的影響[J].中國計劃生育和婦產科，2015，7（5）：30-33.

[7]唐亮，朱元，吳興武，等.精子DNA碎片指數對體外受精-胚胎移植妊娠結局的影響[J].江西醫藥，2016，51（12）：1299-1301.

[8]黃學鋒.精子DNA碎片的臨床意義和實驗研究[D].上海：復旦大學，2013.

[9] Absalan F，Ghannadi A，Kazerooni M，et al.Value of sperm chromatin dispersion test in couples with unexplained recurrent abortion[J].J Assist Reprod Genet，2012，29（1）：11-14.

[10]陳泯燕，黃國寧，王亞平，等.精子DNA碎片與體外受精結局的關系[J].生殖與避孕，2010，30（11）：732-737.

[11]黃智勇，王立雅，謝春雨，等.精子DNA碎片指數對體外受精-胚胎移植妊娠結局預測價值的研究[J].中國當代醫藥，2016，23（4）：97-99.

[12]蔡昭煒.精子DNA碎片率與體外受精結局的相關性研究[J].深圳中西醫結合雜志，2016，26（17）：15-16.

（收稿日期：2017-10-31）