高危型HPV與P16、Ki—67檢測在宮頸癌早期篩查中的價值

李克紅 賴俊玲 張苑平 張英杰 溫達雄

[摘要]目的 探討高危型乳頭瘤病毒（HPV）與P16、Ki-67檢測在宮頸癌早期篩查中的價值。方法 選擇河源市人民醫院2015年1月～2017年12月應用免疫組織化學方法檢測30例宮頸正常組織、75例宮頸上皮內瘤變（CIN）中P16和Ki-67的表達，采用PCR法檢測高危型HPV感染情況。結果 宮頸上皮內低度瘤變（CINⅠ）中，P16陽性率為77.80%，Ki-67陽性率為65.80%，高于宮頸正常組織0.00%，差異有統計學意義（P<0.05）；宮頸上皮內高度瘤變（CINⅡ～Ⅲ）中，P16和Ki-67陽性率為100.00%、94.70%，高于CINⅠ，差異有統計學意義（P<0.05）。高危型HPV在宮頸正常組織、CINⅠ和CINⅡ～Ⅲ病變組感染者分別為6.70%、66.70%、84.60%和90.30%，宮頸癌前病變組織明顯高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。結論 高危型HPV感染及P16、Ki-67與宮頸癌前病變發生發展相關，聯合應用可作為CIN分級診斷的輔助方法，有較好的應用價值。

[關鍵詞]宮頸癌前病變；P16；Ki-67；高危型HPV；免疫組織化學

[中圖分類號] R737.33 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2018）5（b）-0060-03

The value of high-risk HPV，P16 and Ki-67 detection in early screening of cervical cancer

LI Ke-hong1 LAI Jun-ling1 ZHANG Yuan-ping1 ZHANG Ying-jie1 WEN Da-xiong2

1.Department of Gynecology and Obstetrics，People′s Hospital of Heyuan City，Guangdong Province，Heyuan 517000，China；2.Department of Pathology，People′s Hospital of Heyuan City，Guangdong Province，Heyuan 517000，China

[Abstract]Objective To explore the value of high-risk HPV，P16 and Ki-67 detection in early screening of cervical cancer.Methods From January 2015 to December 2017，30 cases of normal cervical tissue and the expression of P16 and Ki-67 in 75 cases of cervical intraepithelial neoplasia （CIN） were detected by immunohistochemistry in our hospital.The high-risk HPV infection was detected by polymerase chain reaction （PCR）.Results The positivity rates of P16 （77.80%） and Ki-67（65.80%） and In the CIN Ⅰ，higher than those in normal cervical tissue accounting for 0.00%.The differences were statistically significant （P<0.05）.The positivity rates of P16 （100.0%） and Ki-67 （94.70%） in CINⅡ-Ⅲ was higher than those of CINⅠ （P<0.05）.High-risk HPV infection rates in normal cervical tissues，CINⅠ，and CIN Ⅱ-Ⅲ was 6.70%，66.70%，84.60% and 90.30% respectively，and the infection in the precancerous lesions the uterine cervix was significantly higher than that in the control group，the differences were statistically significant（P<0.05）.Conclusion High-risk HPV infection，P16，and Ki-67 are associated with the occurrence and development of precancerous lesions of the uterine cervix.Use in combination can be considered as an auxiliary method for the diagnosis of CIN grading and has a good application value.

[Key words]Cervical precancerous lesion；P16；Ki-67；High-risk HPV；Immunohistochemistry

流行病學資料顯示，全球的宮頸癌的發病率和死亡率處于較高水平，給患者家庭和社會帶來沉重的經濟壓力和精神負擔[1-2]。研究證實，高危型人乳頭瘤病毒（HPV）持續感染與宮頸癌有一定的相關性[3]，其病毒載量和陽性率越高，宮頸癌發生的機會越大[4]。宮頸癌早期診斷的關鍵是尋找早期篩查與預測宮頸癌前病變的有效方法。宮頸早期浸潤癌大多無癥狀、通常在體檢中發現。P16是分子生物事件中一種重要的抑癌基因，其在宮頸中過度表達與宮頸癌前病變關系密切；而Ki-67可作為評估腫瘤治療及預后的分子靶標。本研究通過免疫組化技術檢測P16與Ki-67在宮頸癌前病變的表達，探討其在宮頸癌前病變的作用，并檢測高危HPV感染，期望為宮頸癌前病變與宮頸癌的早期診斷和治療提供新的思路。

1資料與方法

1.1一般資料

所有病例均來自河源市人民醫院2015年1月～2017年12月手術標本，共75例。按病理結果分類，低度上皮內瘤變（CINⅠ）18例，高度上皮內瘤變（CINⅡ和CINⅢ）57例。選30例宮頸正常組織作對照組。

1.2方法

用免疫組化方法檢測30例宮頸正常組織，18例宮頸低度上皮內瘤變（CINⅠ），57例高度上皮內瘤變（CINⅡ和CINⅢ），并用聚合酶鏈反應（PCR）法檢測高危型HPV-DNA的類型，可檢測出13種HPV高危亞型。應用第二代雜交捕獲技術（美國Digene公司）進行HPV-DNA檢測，標本的熒光度值（RLU）與陽性定標的閾值（CO）的比值（RLU/CO）表示，RLU/CO值≥1.0 pg/ml則為高危HPV-DNA陽性。

1.3結果判斷

根據安必平公司產品說明和相關文獻，p53陽性表達為胞核著色，無棕黃色顆粒者為（-），如顯示棕黃色顆粒，則用（+）表示，如為棕黃色粗顆粒，則用（++）表示，如顯示棕褐色粗顆粒，則表示為（+++）。

1.4統計學方法

使用SPSS 21.0軟件對數據進行統計分析，計量資料以均數±標準差（x±s）表示，采用t檢驗；計數資料以率表示，采用χ2檢驗，采用Perason相關性檢測計算相關性，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1 P16和Ki-67蛋白在宮頸活檢組織中的檢測結果

P16和Ki-67蛋白在宮頸活檢組織中的檢測結果如下（表1）：P16蛋白在宮頸CINⅠ級和CINⅡ～Ⅲ級的陽性表達率分別為77.80%、100.00%，宮頸級別越高，其表達越強，不同組別間表達差異有顯著性（P<0.01）。Ki-67蛋白表達也呈遞增趨勢（P<0.01），表達強度也隨著CIN級別增加而增強，蛋白陽性表達率均高于對照組。

2.2高危HPV感染在宮頸組織中的表達

高危HPV感染在宮頸癌前病變組織中的陽性表達率為66.5%，而高危型HPV16/18的陽性表達率則為54.3%，且宮頸病變級別越高，其表達越強。結果顯示，CINⅠ、CINⅡ及CINⅢ患者的高危HPV-DNA陽性率分別為66.70%，84.60%、90.30%，各組差別有統計學意義與宮頸病變程度成正相關（r=0.887，P<0.05）（表2）。

2.3宮頸病變組織中高危HPV感染與P16、Ki-67蛋白的關系

高危型HPV感染隨著P16和Ki-67蛋白表達增高，高危HPV感染也相應增高，且以HPV16為主，差異有統計學意義（P<0.05）（表3）。

3討論

宮頸癌是常見的惡性腫瘤，發達國家研究顯示，宮頸癌的發病率和病死率明顯下降，但我國為發展中國家，宮頸癌還面臨諸多挑戰，且近來患者有年輕化的趨勢，盡早發現宮頸早期病變，并采取及時的治療是提高患者生活質量的重要方法[5]。HPV具有雙股DNA鏈，可引起黏膜的鱗狀上皮異常增殖[6-7]。現在提倡精準醫學，通過更加精確的CIN分級與宮頸癌前病變的早期診斷，希望可降低宮頸癌的發生率。本研究結果顯示，高危HPV感染在宮頸病變組織中的感染率為66.5%，隨著CIN級別的升高，HPV-DNA相對含量也隨之表達增強，提示宮頸癌及癌前病變的發生發展與高危型HPV感染有密切的關系。

本研究結果顯示，宮頸上皮內低度瘤變（CINⅠ）中，P16陽性率為77.8%，Ki-67陽性率為65.8%，高于宮頸正常組織，差異有統計學意義（P<0.05）；宮頸上皮內高度瘤變（CINⅡ～Ⅲ）中，P16和Ki-67陽性率為100.00%、94.70%，高于CINⅠ，差異有統計學意義（P<0.05）。高危型HPV在宮頸正常組織、CINⅠ和C1NⅡ～Ⅲ病變組感染者分別為6.70%、66.70%，84.60%和90.30%，宮頸癌前病變組織明顯高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。因此，高危型HPV感染及P16、Ki-67與宮頸癌前病變發生發展相關，聯合應用可作為CIN分級診斷的輔助方法。

研究表明，P16基因是近來發現的又一重要的抑癌蛋白，與人類腫瘤關系密切，可作為有效的診斷標志物而區分出宮頸正常組織和上皮內瘤變組織。本研究結果顯示，P16蛋白隨著CIN級別升高，其表達強度亦相應增加，且表現出明顯的分層現象，這與COX等[8]的結論類似。Ki-67是一種細胞增殖核抗原，在細胞周期的G1、S、G2和M期表達，在靜止期為陰性[9-11]。對腫瘤的分期、轉移及預后判斷等有一定價值[12-13]。本研究結果顯示，Ki-67基因在對照組中不表達，在高級別宮頸上皮內瘤變組織中的表達顯著高于低級別宮頸上皮內病變組織，有望成為評估預后的一個指標[14-15]。

綜上所述，高危型HPV持續感染是誘發宮頸癌前病變的重要原因，高危HPV感染和P16、Ki-67的共同表達在宮頸癌前病變中有重要的作用。聯合檢測P16和Ki-67的表達避免過度治療，簡便易行，可為臨床治療提供更加明確的分子病理診斷依據，可有效提高宮頸早期病變的檢出率，降低誤診及漏診率。

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（收稿日期：2018-01-24 本文編輯：崔建中）