子宮頸鱗狀細胞癌及鱗狀上皮內病變中RGC32的表達及臨床意義

田杰 周東華 平靜 秦艷 劉小燕 陳瑩 范菊花

佛山市婦幼保健院病理科（廣東佛山 528000）

宮頸癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，發病率僅次于乳腺癌，近些年來呈現年輕化趨勢，嚴重威脅著女性的身體健康［1-2］。RGC?32是一種新發現的補體激活基因，參與了細胞的周期調控、細胞增殖、組織細胞分化等多種生理作用［3］。研究發現RGC?32在腫瘤中的作用明顯，是腫瘤發生相關基因［4-5］。而RGC32在宮頸鱗狀細胞癌中的表達情況及作用尚未見報道。本研究采用免疫組化的方法檢測RGC?32在正常宮頸、宮頸鱗狀上皮內病變及SCC中的表達，并且分析RGC32表達與宮頸鱗狀細胞癌臨床特征的關系，并初步探討RGC?32在宮頸癌發生、發展中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料分別收集佛山市婦幼保健院病理科2015年1月至2016年12月手術切除或活檢的蠟塊標本，正常宮頸、LSIL、HSIL各30例，SCC 40例，正常宮頸年齡25～78歲，中位年齡47歲，宮頸LSIL年齡20～60歲，中位年齡32歲，宮頸HSIL年齡21～69歲，中位年齡38歲，宮頸SCC年齡22～80歲，中位年齡50歲；宮頸癌根據國際婦產科聯盟（international federation of gynecology obstetrical，FIGO）臨床分期：Ⅰ期10例、Ⅱ期21例、Ⅲ期6例、Ⅳ期3例，分化等級，高分化16例，中分化13例，低分化11例。所有標本均由2位資深病理專家共同閱片確診，所有標本均未行化療、放療及生物治療。

1.2 方法標本經過4%中性甲醛固定，石蠟包埋4μm切片，然后采用免疫組化S?P法檢測RGC32的表達，兔抗人RGC32多抗購自Santa Cruz公司，設立RGC32強陽性者為陽性對照，PBS緩沖液為陰性對照。

1.3 結果判讀RGC32陽性表現為細胞漿棕黃色染色物，染色評分標準：（1）按切片中細胞顯色有無及深淺評分：無顯色為0分；淺黃色為1分；黃色為2分；棕黃色為3分。（2）根據顯色癌細胞的比例記分：＜25%為1分；25%～50%為2分；＞50%為3分。每例腫瘤的陽性強度=（1）×（2），＞ 2分則視為陽性，否則判定為陰性。

1.4 統計學方法計數資料采用率或百分比表示，率的比較采用Pearsonχ2檢驗，P＜0.05為差異具有統計學意義。所有數據應用SPSS20.0軟件進行統計學分析。

2 結果

2.1 RGC32蛋白在不同宮頸組織中的表達RGC32蛋白主要表達于細胞漿，呈棕黃色顆粒，RGC32蛋白在正常宮頸組織、LSIL、HSIL和SCC中的表達陽性率分別為16.7%、26.7%、66.7%、75.0%（圖1），通過Pearson χ2檢驗，RGC32在正常宮頸、宮頸上皮內病變及SCC組織中的陽性率逐漸升高，且差異具有統計學意義（P＜0.01），宮頸SCC及HSIL中RGC32的陽性率顯著高于LSIL及正常宮頸（P＜0.05），RGC32在SCC及HSIL中的表達差異無顯著性（P=0.492），LSIL及正常宮頸中的表達差異無顯著性（P=0.440）（表1）。

圖1 RGC32在不同宮頸組織中的表達情況（×40）Fig.1 Expression of RGC32 in different cervical tissues（× 40）

表1 RGC32蛋白在不同宮頸組織中的表達率Tab.1 Rateof expression in differentcervical tissues例（%）

2.2 RGC32表達與宮頸鱗狀細胞癌臨床病理特征的關系為探討RGC32表達與宮頸鱗狀細胞癌的臨床病理特征，筆者將患者按年齡、腫瘤FIGO分期，組織學分級以及是否有淋巴結轉移進行分組，通過分析發現，RGC32在年齡＜50歲及年齡≥50歲兩組表達陽性率分別為72.2%，77.3%，FIGOⅠ+Ⅱ期為77.4%，Ⅲ+Ⅳ期66.7%，組織學分級中高中分化組為82.8%，低分化為54.5%，RGC32蛋白表達陽性率在有淋巴結轉移組高達88.0%，而無淋巴結轉移組RGC32表達陽性率僅為53.3%，兩者差異具有統計學意義（P=0.014）。見表2。

表2 宮頸鱗狀細胞癌組織中RGC32的表達與臨床病理特征的關系Tab.2 The relationship between the expression of RGC32 and clinical characteristics in cervical squamous cell carcinoma

3 討論

RGC?32是由Badea在鼠的少突膠質細胞中發現的一種補體激活基因；人類RGC?32基因定位于13q14.11，全長1 126個bp，編碼137個氨基酸，有5個外顯子和4個內含子［5］。目前發現RGC?32在胎盤、骨骼肌，腎臟、胰腺、肝臟及大動脈內皮細胞等正常組織細胞中表達，而在心臟、腦組織低表達，肺組織細胞未見表達。研究發現在正常情況下RGC?32在細胞周期調控、細胞增殖、組織細胞分化、補體介導的炎癥反應、細胞修復及系統性硬化等過程中起著非常重要的作用［6-8］。

近年來，RGC32在腫瘤中的作用研究較多，筆者曾發現在結直腸癌細胞株中RGC32過表達促進腫瘤細胞遷移和侵襲，可能與RGC32導致細胞骨架改變有關［9］，WANG 等［10］研究發現RGC32在結直腸癌組織中高表達并且與患者預后相關，體內外實驗均證實RGC32高表達促進結直腸癌腫瘤細胞增殖和侵襲，并且發現其機制是通過激活Smad/sip1信號通路促進結直腸癌細胞發生EMT。XU等［11］研究發現RGC32在肺腺癌組織中表達明顯上調，肺癌細胞株A549細胞中RGC32基因表達降低后，細胞增殖活力明顯降低，并且發現RGC32受 TGF?β1 信號通路調控。ESKANDARI?NASAB等［12］研究發現在乳腺癌組織中RGC32高表達，并且發現RGC32的啟動子發生甲基化。

本研究發現RGC32在正常宮頸僅有少量表達，而在宮頸上皮內病變及SCC組織中的陽性率逐漸升高，且差異具有統計學意義（P＜0.01），宮頸鱗狀細胞癌及高度鱗狀上皮內病變中RGC32的陽性率顯著高于低度鱗狀上皮內病變及正常宮頸（P＜0.05）。低度鱗狀上皮內病變并發癌或將來發生癌的風險低，高度鱗狀上皮內病變具有顯著的進展為浸潤性癌的風險，是癌前病變，RGC32在癌前病變及SCC中的表達顯著高于非癌前病變，提示RGC32可能參與了正常宮頸到癌前病變再到鱗狀細胞癌的發生、發展演變過程。其次，筆者發現RGC?32在有淋巴結轉移組表達水平顯著高于無淋巴結轉移組（P=0.014），提示RGC32可能在宮頸癌的淋巴結轉移過程起重要作用。

本研究與既往研究大致相符，發現RGC32在腫瘤發生、發展中起到重要作用，并且發現其可能參與了宮頸鱗狀細胞癌的轉移。本研究具有局限性：僅采用了免疫組化方法檢測RGC32蛋白的表達，而對RGC32的基因水平的未進行檢測，并且未進行作用機制的探討，不能進行因果的說明。下一步擬檢測RGC32的基因表達情況以及探討其在腫瘤中的作用機制。