免疫組織化學檢測在乳腺病理疾病中的臨床診斷作用和準確度探討

楊麗英　朱杰

【摘要】 目的：探討免疫組織化學檢測在乳腺病理疾病中的臨床診斷作用和準確度。方法：選取2010年7月-2017年12月在本院就診的乳腺癌患者50例為惡性組和乳腺良性增生患者50例為良性組，其中乳腺癌或良性增生患者標本組織中所帶的正常乳腺組織者50例為對照組。三組均接受乳腺穿刺活檢或外科手術切除，采集乳腺組織標本。采用免疫組織化學染色技術對組織標本進行染色處理，分析乳腺癌的巨檢、鏡檢、免疫組織化學檢測結果，分析各免疫組化檢測指標對乳腺癌的診斷準確率，比較三組CK5/6、CK34βE12、EGFR、HER-2、P16、P63、Ki67、PTEN檢測結果，分析不同免疫組化檢測指標與乳腺癌的相關性。結果：乳腺癌巨檢可見腫瘤切面為灰黃色或灰白色，存在邊界不清晰的實性區，部分切面可見黃色壞死物；鏡檢可見乳腺癌細胞呈不規則分布，細胞形態多樣，細胞質較少，細胞核級別低，極少核分裂現象，細胞周圍可見膠原化或成纖維母細胞增生；免疫組化檢測結果顯示，50例乳腺癌患者中，CK5/6（+）、CK34βE12（+）、EGFR（+）、HER-2（+）、P16（+）、P63（+）、Ki67（+）、PTEN（-）分別為48、41、45、44、39、40、42、17例，其診斷準確率分別為96%、82%、90%、88%、78%、80%、84%、34%；惡性組CK5/6、CK34βE12、EGFR、HER-2、P16、P63、Ki67陽性率均高于良性組、對照組，PTEN陰性率均低于良性組、對照組，比較差異均有統計學意義（P<0.05）；而良性組與對照組免疫組化檢測指結果比較，差異均無統計學意義（P>0.05）；經相關性分析，CK5/6、CK34βE12、EGFR、HER-2、P16、P63、Ki67的陽性表達與乳腺癌呈正相關（P<0.001），而PTEN陽性表達與乳腺癌呈負相關（P<0.001）。結論：免疫組織化學檢測可對不同乳腺病變予以準確鑒別區分，可將免疫組化指標CK5/6、CK34βE12、EGFR、HER-2、P16、P63、Ki67、PTEN等作為乳腺癌生物學行為的輔助判斷指標。

【關鍵詞】 乳腺癌； 診斷； 免疫組織化學

Clinical Diagnostic Value and Accuracy of Immunohistochemical Detection in Breast Pathological Diseases/YANG Liying，ZHU Jie.//Medical Innovation of China，2018，15（13）：010-013

【Abstract】 Objective：To investigate the clinical diagnostic value and accuracy of immunohistochemistry in breast pathological diseases.Method：A total of 50 patients with breast cancer admitted to our hospital from July 2010 to December 2017 were selected as malignant group and 50 patients with benign breast hyperplasia as benign group，among them，50 cases of normal mammary gland organizer in breast cancer or benign hyperplasia as control group.They underwent breast biopsy or surgical resection，and breast tissue samples were collected.Immunohistochemical staining was used to stain the tissue specimens，the results of giant，microscopic and immunohistochemical detection of breast cancer were analyzed，the diagnostic accuracy of each immunohistochemical detection index for breast cancer was analyzed，the detection results of CK5/6，CK34βE12，EGFR，HER-2，P16，P63，Ki67，PTEN were compared between three groups，the correlation between immunohistochemical markers and breast cancer.Result：There was a lack of clear boundary of breast tissue sections in mammary cancer giant examination，and there was no capsule in tumor tissue，the section was gray yellow or gray white，and there were solid areas.Microscopic examination showed that breast cancer cells were irregular in distribution，various in morphology，few in cytoplasm，low in nuclear grade，few in mitosis，collagenization or proliferation of fibroblasts around the cells.The results of immunohistochemical detection showed that in 50 cases of breast cancer，CK5/6（+），CK34βE12（+），EGFR（+），HER-2（+），P16（+），P63（+），Ki67（+），PTEN（-） were 48，41，45，44，39，40，42 and 17 cases respectively，the diagnostic accuracy was 96%，90%，88%，88%，78%，96% respectively.The positive rates of CK5/6，CK34βE12，EGFR，HER-2，P16，P63 and Ki67 in malignant group were all higher than those of benign group and control group，the negative rate of PTEN was lower than that of benign group and control group，the differences were statistically significant（P<0.05）.The each result of immunohistochemical examination in benign and control groups were compared，the differences were not statistically significant（P>0.05）.By correlation analysis，the positive expression of CK5/6，CK34βE12，EGFR，HER-2，P16，P63 and Ki67 were positively correlated with breast cancer（P<0.001），but the positive expression of PTEN was negatively correlated with breast cancer（P<0.001）.Conclusion：Immunohistochemical examination can be used to distinguish the different breast lesions accurately，and the immunohistochemical index CK5/6，CK34βE12，EGFR，HER-2，P16，P63，Ki67，PTEN and so on may be used as an auxiliary index to judge the biological behavior of breast cancer.

【Key words】 Breast cancer； Diagnosis； Immunohistochemistry

First-authors address：The First Peoples Hospital of Honghe Prefecture，Mengzi 661199，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.13.003

乳腺癌屬于常見惡性腫瘤，在女性人群中發病率較高，其發病機制尚未明確，但其對廣大女性的身體健康造成損害，故臨床上需對其進行早期診斷和治療[1-2]。免疫組織化學檢查是一項病理診斷手段，被廣泛用于惡性腫瘤診斷中，本研究旨在探討免疫組織化學檢測在乳腺病理疾病中的臨床診斷作用和準確度，為此選取50例乳腺癌患者、50例乳腺良性增生患者進行研究?，F報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2010年7月-2017年12月在本院就診的乳腺癌患者50例為惡性組和乳腺良性增生患者50例為良性組，其中乳腺癌或良性增生患者標本組織中所帶的正常乳腺組織者50例為對照組。納入標準：惡性組、良性組分別對應乳腺癌病灶組織、乳腺良性增生病灶組織，對照組則為乳腺癌或乳腺良性增生患者的正常乳腺組織；對研究知情同意，簽署知情同意書。排除標準：合并其他惡性腫瘤、嚴重器質性病變者。本研究獲醫院倫理學委員會批準。

1.2 方法 三組均接受乳腺穿刺活檢，受檢者平臥于手術臺，將上身衣物脫下，充分暴露乳房，采用美國GE公司生產的Logiq C2型彩色多普勒超聲診斷儀對受檢者乳腺進行多切面掃描，根據超聲實時監控圖像，對受檢者乳腺病變進行定位，采用14G穿刺針刺入乳腺，啟動穿刺槍，采集乳腺組織標本；或者患者接受外科手術切除標本，乳腺組織標本采集后，采用濃度為10%的甲醛溶液固定標本，行常規脫水、石蠟包埋處理，將組織標本切成4 μm厚的切片，采用免疫組織化學染色技術對組織標本進行染色處理，選用免疫組化S-P法檢測試劑盒和DAB顯色試劑盒，按照試劑盒說明書進行操作，測定其CK5/6、CK34βE12、表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）、人表皮生長因子受體-2（Human epidermal growth factor receptor-2，HER-2）、P16、P63、Ki67、PTEN的陽性率。其中陽性判定標準采用雙評分法對各免疫組化檢測指標的陽性表達進行判定[3]，即陽性細胞占比（A）：5個高倍鏡視野內的陽性細胞占比<25%得1分，占比25%～50%得2分，占比>50%得3分；（2）染色強度（B）：未著色得0分，淺黃色得1分，棕黃色得2分，棕褐色得3分。A+B>2分則為陽性，反之則為陰性。

1.3 觀察指標 分析乳腺癌的巨檢、鏡檢、免疫組織化學檢測結果，分析CK5/6、CK34βE12、EGFR、HER-2、P16、P63、Ki67、PTEN等免疫組化檢測指標對乳腺癌的診斷準確率；比較三組CK5/6、CK34βE12、EGFR、HER-2、P16、P63、Ki67、PTEN檢測結果；采用皮爾遜（Pearson）相關系數分析法，分析不同免疫組化檢測指標與乳腺癌的相關性。

1.4 統計學處理 使用SPSS 19.0軟件對所得數據進行統計分析，計量資料用（x±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗；相關性分析采用Pearson相關系數分析法，r為正數即正相關，反之則為負相關。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組基線資料比較 惡性組均為女性；年齡25～67歲，平均（46.19±18.73）歲。良性組均為女性；年齡23～66歲，平均（45.52±17.14）歲。對照組均為女性，年齡20～70歲，平均（45.23±19.64）歲。三組一般資料比較差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 乳腺癌巨檢情況 乳腺癌巨檢可見腫瘤切面為灰黃色或灰白色，存在邊界不清晰的實性區，部分切面可見黃色壞死物。

2.3 乳腺癌鏡檢情況 鏡檢可見乳腺癌細胞呈不規則分布，細胞形態多樣，細胞質較少，細胞核級別低，極少核分裂現象，細胞周圍可見膠原化或成纖維母細胞增生，見圖1、2。

2.4 乳腺癌免疫組化檢查情況 免疫組化檢測結果顯示，50例乳腺癌患者中，CK5/6（+）、CK34βE12（+）、EGFR（+）、HER-2（+）、P16（+）、P63（+）、Ki67（+）、PTEN（-）分別為48、41、45、44、39、40、42、17例，其診斷準確率分別為96%、82%、90%、88%、78%、80%、84%、34%。

2.5 三組免疫組化檢測結果比較 惡性組CK5/6、CK34βE12、EGFR、HER-2、P16、P63、Ki67陽性率均高于良性組、對照組，PTEN陰性率均低于良性組、對照組，比較差異均有統計學意義（P<0.05）；而良性組與對照組免疫組化檢測結果比較，差異均無統計學意義（P>0.05）。見表1。

2.6 不同免疫組化檢測指標與乳腺癌的相關性分析 經相關性分析，CK5/6、CK34βE12、EGFR、HER-2、P16、P63、Ki67的陽性表達與乳腺癌呈正相關（P<0.001），而PTEN陽性表達與乳腺癌呈負相關（P<0.001），見表2。

3 討論

乳腺病變在女性人群中的發生率較高，且近年來其發病率出現增高趨勢[4]。乳腺病變可分為良性乳腺增生、乳腺癌，其中，良性乳腺增生存在一定的惡變風險，在未及時治療的情況下可能會發展為乳腺癌，而乳腺癌是當前女性惡性腫瘤中發病率最高的一種惡性腫瘤，在全球范圍內的發病率均較高，對廣大女性的生命健康構成嚴重威脅，已經成為全球范圍內婦女健康方面的重點問題[5-7]。臨床上針對乳腺病變多采取手術治療，但不同性質病變的手術方案存在差異，術前需對乳腺病變性質進行明確，故臨床上需針對乳腺病變的診斷方法進行積極探討[8-9]。

乳腺癌、乳腺良性增生具有相同的癥狀和體征，其鑒別區分難度較大，臨床上多通過免疫組化技術對其進行確診，且免疫組化往往被臨床作為診斷惡性腫瘤的金標準，主要是針對腫瘤相關細胞因子表達情況進行檢測，對其是否為惡性腫瘤進行判斷[10-12]。本研究中選擇的免疫組化檢測指標中，CK5/6、CK34βE12屬于細胞角蛋白，可對細胞成分和生物學活性予以反映，通常在癌變組織中會出現強陽性表達[13]；EGFR、HER-2屬于酪氨酸激酶受體，參與到多種腫瘤的發生、發展過程中，當人體內出現癌變時，EGFR、HER-2往往呈現出高表達狀態，其表達水平增高，對腫瘤細胞的增殖、血管再生、淋巴結的轉移均有促進作用，同時還可對腫瘤細胞的凋亡進行有效抑制[14]；P16、P63參與到細胞周期的調控過程中，對腫瘤細胞增殖和分裂起到負向調節作用，可對腫瘤細胞的復制進行抑制，可參與多種腫瘤發生、發展過程中；Ki67屬于新型細胞增殖核抗原，其往往會在增殖的細胞中呈高表達水平，參與到腫瘤細胞的增殖過程中，促進腫瘤細胞的有絲分裂；PTEN基因是一種具有磷酸酶活性的抑癌基因，其在人類腫瘤中發生缺失和突變的概率極高，一旦人體中的PTEN基因表達缺失或發生突變，表示人體中出現新的信號轉導途徑，意味著人體組織可能發生癌變[15]。

本研究結果顯示，惡性組CK5/6、CK34βE12、EGFR、HER-2、P16、P63、Ki67陽性率均高于良性組、對照組，PTEN陰性率均低于良性組、對照組，比較差異均有統計學意義（P<0.05）；經相關性分析，CK5/6、CK34βE12、EGFR、HER-2、P16、P63、Ki67的陽性表達與乳腺癌呈正相關（P<0.001），而PTEN陽性表達與乳腺癌呈負相關（P<0.001）。充分說明免疫組織化學檢測各項細胞因子指標可對乳腺惡性病變、良性病變予以準確區分。

綜上所述，免疫組織化學檢測可對不同乳腺病變予以準確鑒別區分，可將免疫組化指標CK5/6、CK34βE12、EGFR、HER-2、P16、P63、Ki67、PTEN等作為乳腺癌生物學行為的輔助判斷指標。

參考文獻

[1]樊智穎，王學梅，康姝，等.乳腺浸潤癌剪切波彈性成像與臨床病理、免疫組化特征相關性分析[J].中國醫科大學學報，2014，43（4）：344-350.

[2]畢曉峰，郝佳潔，徐昕，等.乳腺癌組織CK5/6的表達及與預后關系的研究[J].中華腫瘤防治雜志，2014，21（12）：925-929.

[3]郭悅，關云萍，項宇識.乳腺浸潤性小葉癌彈性成像與臨床病理、免疫組化特征相關性分析[J].中國臨床醫學影像雜志，2014，25（10）：700-702.

[4]曾玉梅，曹曉珊，杜娟，等.乳腺浸潤性篩狀癌與篩狀結構導管原位癌的臨床病理及免疫組化對比分析[J].分子診斷與治療雜志，2017，9（4）：261-266.

[5]周曉燕，胡玉蓮，王剛平，等.免疫組化表達在乳腺癌前驅病變與微浸潤性癌鑒別診斷中的應用[J].中國臨床實用醫學，2014，5（3）：19-21.

[6]蘇曉慧，林青，崔春曉，等.乳腺浸潤性微乳頭狀癌的影像學表現與免疫組化的相關性研究[J].醫學影像學雜志，2016，26（2）：258-262.

[7] Ressel L，Puleio R，Loria G R，et al.HER-2 expression in canine morphologically normal，hyperplastic and neoplastic mammary tissues and its correlation with the clinical outcome[J].Res Vet Sci，2013，94（2）：299-305.

[8]黃韜，伊丹丹，桑劍鋒.乳腺浸潤性微乳頭狀癌的免疫組化及預后分析[J].東南大學學報（醫學版），2016，35（5）：805-808.

[9]郭媛，孔慶聰，朱葉青，等.乳腺單純型黏液癌的磁共振征象與細胞密度及免疫組化的相關分析[J].中華醫學雜志，2017，97（17）：1307-1311.

[10]梁月勉，王維娜.乳腺浸潤性微乳頭狀癌與浸潤性導管癌免疫組化及臨床病理特征的比較[J].臨床與實驗病理學雜志，2014，30（8）：920-922.

[11]汪勤，唐曼，劉婷珽.免疫組織化學檢測在乳腺病理診斷中的作用[J].安徽醫藥，2014，18（5）：957-960.

[12]郭志潔，周蘇晉，趙巖.乳腺浸潤性導管癌超聲表現與免疫組織化學指標的相關性[J].影像診斷與介入放射學，2015，24（3）：216-219.

[13]劉國新，馬沛，易建華.34βE12、CK5/6、p63、SMA在乳腺增生、不典型增生與原位癌鑒別診斷中的價值[J].實用癌癥雜志，2013，28（1）：28-30.

[14] Pe?a L，Gama A，Goldschmidt M H，et al.Canine mammary tumors：a review and consensus of standard guidelines on epithelial and myoepithelial phenotype markers，HER2，and hormone receptor assessment using immunohistochemistry[J].Vet Pathol，2014，51（1）：127-145.

[15]張剛，李中，林曉萌，等.PTEN、S100A4和P53蛋白在乳腺浸潤性導管癌中的表達及意義[J].廣東醫學，2014，35（22）：3510-3512.

（收稿日期：2018-02-09） （本文編輯：董悅）