冠心病患者血漿DKK-1水平與冠狀動脈病變程度的相關性分析

張緒光，鹿慶華

(山東大學第二醫院，濟南250000)

近年來，冠心病發病率顯著升高，是目前世界上最常見的死亡原因之一，嚴重威脅公眾健康。冠心病的發病機制目前并不完全明確，炎癥反應在其發生發展過程中起著重要作用[1]。研究表明，Wnt信號傳導通路與多種炎癥性疾病有關，其可通過多種途徑參與炎癥的調節，而該傳導系統受到多個分泌型抑制劑的影響，主要有可溶性卷曲蛋白相關受體以及Dickkopf家族，后者中研究最多的是Dickkopf相關蛋白1(DKK-1)[2]。Ueland等[3]研究發現，動脈粥樣硬化斑塊中DKK-1基因的表達增強，在動脈粥樣硬化斑塊中DKK-1能影響血管內皮細胞和血小板間的炎癥反應，能發揮促動脈粥樣硬化的作用。本研究通過檢測冠心病患者血漿DKK-1水平變化，分析其與冠狀動脈病變程度的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2017年1～8月在我院心血管內科住院并行冠狀動脈造影的患者299例，其中明確診斷為CHD患者182例為CHD組，其中男102例、女80例，年齡(50.12±14.42)歲。以冠狀動脈造影正常的受試者117例為對照組，其中男65例、女52例，年齡(49.35±13.68)歲。排除標準：嚴重的心臟瓣膜病變或心肌病變；合并心功能Ⅲ級以上的心力衰竭；嚴重的心律失常；嚴重的肝腎功能異常；惡性腫瘤；血液病；各種急慢性感染；自身免疫病。本研究獲醫院醫學倫理委員會批準，所有受試者均簽署臨床研究知情同意書。

1.2 外周血炎癥指標檢測 清晨抽取空腹血，檢測外周血超敏C反應蛋白(hs-CRP)、IL-6水平。在山東大學第二醫院免疫實驗室完成檢測。

1.3 血漿DKK-1水平檢測 EDTA抗凝管抽取空腹外周血5 mL，4 ℃下1 500 r/min離心15 min分離血漿，-80 ℃保存，采用ELISA試劑盒(Mouse DKK-1 ELISA Kit，購自武漢博士德生物公司)檢測血漿DKK-1水平。

1.4 冠狀動脈造影及冠狀動脈病變程度評價 兩組均應用GE Discovery IGS 730 DSA行冠狀動脈造影。患者取平臥位，常規消毒穿刺部位皮膚后鋪無菌洞巾，利多卡因麻醉穿刺部位后，采用Seldinger′s技術穿刺動脈，肝素化后應用5F多功能造影管分別送至左右冠狀動脈開口處行多角度造影。根據造影結果對CHD患者冠狀動脈病變進行分析及計算Gensini評分。由兩名以上醫師共同閱片，狹窄程度用定量冠狀動脈造影分析法分析。以管腔狹窄程度達到25%、50%、75%、90%、99%、100%分別計1、2、4、8、16、32分。冠狀動脈不同分段所占分值：左主干為5分；前降支近段、中段、遠段分別為2.5、1.5、1分；第一、第二對角支分別為1、0.5分；回旋支近段、遠段分別為2.5、1分，鈍緣支為1分；右冠狀動脈近段、中段、遠段、左室后支、后降支各1分。將各段的狹窄程度的分值與相應位置的系數相乘，然后將各狹窄段總分相加即為該患者的Gensini冠狀動脈評分[4]。

2 結果

2.1 兩組外周血炎癥指標比較 CHD組外周血hs-CRP、IL-6水平均高于對照組(P<0.05或0.01)。見表1。

2.2 兩組血漿DKK-1水平比較 CHD組血漿DKK-1水平高于對照組(P<0.01)。見表1。

表1 兩組外周血炎癥指標、血漿DKK-1水平比較

2.3 CHD組血漿DKK-1水平與炎癥指標的相關性 CHD組血漿DKK-1水平與hs-CRP(r=0.431，P=0.033)、IL-6(r=0.369，P=0.037)均呈正相關。

2.4 CHD組血漿DKK-1水平與Gensini評分的關系 Pearson相關分析結果顯示，血漿DKK-1水平與Gensini冠狀動脈評分呈正相關(r=0.541，P<0.01)。

3 討論

冠狀動脈病變的發生發展與多種因素有關，其確切機制尚不完全明確。近年來，關于其發病機理提出了新的觀點，即內皮損傷反應學說。該學說認為各種危險因素最終都損傷動脈內膜，而粥樣硬化的形成是對動脈內膜損傷做出的炎癥反應的結果[5]。炎癥反應在冠心病的發生、發展到斑塊破裂、血栓形成的多個階段均發揮了作用[6]。既往有很多流行病學研究已經證實了炎癥反應在冠狀動脈斑塊發生發展中的作用，病理學研究也發現動脈粥樣硬化斑塊中有大量炎性因子和炎性細胞的存在，其活躍程度與斑塊的易損性密切聯系。這個過程與多種循環免疫標志物之間有密切關系，hs-CRP、IL-6是研究比較多的兩個炎癥指標[7,8]。

Wnt傳導通路在心血管系統中的作用也越來越被重視，其在血管新生、血管鈣化、心肌缺血預適應和心肌梗死后恢復中發揮著關鍵的作用。Wnt信號通路是一條非常保守的信號轉導通路，人Wnt基因定位于12q13，該通路參與了細胞分化、細胞遷移、細胞軸分化、神經分布、器官形成等胚胎發育過程中的重要方面。異常的Wnt信號傳導通路與多種人類疾病有關，包括多種腫瘤和退化性疾病等。研究發現，在某種常染色體顯性遺傳的早發冠狀動脈疾病中已經鑒定出存在有缺陷的Wnt信號通路。Wnt通路在炎癥和免疫中亦有重要作用[9]。它可能發生在某些炎癥因子引發的信號傳導通路下游，例如TNF-α和IL-6。

多個家族的分泌性抑制劑共同參與調節Wnt通路，其中研究最多的就是DKK-1。DKK-1是由DKK-1基因編碼的一種糖蛋白，是Wnt通路中的重要調節因子。它是一種分泌蛋白，含有兩個富含半胱氨酸的區域，通過抑制Wnt信號通路參與胚胎發育。它是Wnt信號通路的拮抗抑制劑，通過隔離LRP6共受體發揮作用，因此它能對Wnt信號通路產生抑制作用[10]。DKK1還能減少β-連環蛋白的表達，同時增加OCT4基因的表達，從而拮抗Wnt/β-catenin信號通路[11]。研究發現，血漿DKK-1水平與動脈粥樣硬化性疾病有密切關系，Wnt-1低表達而DKK-1高表達與早期心肌梗死有關[12]。有學者研究了DKK-1與腦血管病的關系，結果證實，急性缺血性腦卒中患者血DKK-1水平與臨床病情穩定的腦血管病患者相比是顯著升高的，而臨床病情穩定的腦血管病患者血DKK-1水平顯著高于健康人群，該差異與卒中患者的發病原因無關，亦與就診時的癥狀嚴重程度及預后無關[13]。研究表明，DKK-1在頸動脈斑塊中的過表達促進了血小板與血管內皮細胞之間的炎癥反應，從而驅動了后續的炎癥循環[3]。巨噬細胞和血管內皮細胞中也發現了過表達的DKK-1，同時對斑塊破裂處的血栓組織進行免疫染色也發現了很強的血小板聚集反應。與hs-CRP相似，DKK-1可能也是一個經典的炎性因子，其與動脈粥樣硬化斑塊的形成、發展、甚至不穩定、破裂均有關系。Ueland等[3]曾報道，在活化的粥樣硬化斑塊中DKK-1表達增加。本研究發現，CHD組外周血hs-CRP、IL-6水平均高于對照組，CHD組血漿DKK-1水平高于對照組，且CHD組血漿DKK-1水平與hs-CRP、IL-6均呈正相關，提示冠心病患者血漿DKK-1水平高于正常人，且其水平與hs-CRP、IL-6呈正相關；血漿DKK-1水平與Gensini冠狀動脈評分呈正相關，提示DKK-1水平與冠狀動脈粥樣硬化呈正相關，即冠狀動脈病變越嚴重、斑塊負荷越重的患者，其血漿DKK-1水平越高，可能與繼發的炎癥反應有關。因此，血漿DKK-1的水平或可作為預測冠狀動脈病變嚴重程度的一個潛在指標。

目前，冠狀動脈造影是診斷冠心病的金標準，但仍存在有創、費用高、存在一定風險等弊端，限制了其在臨床的應用，對于無法行冠狀動脈造影的患者，需要一種簡單易行、無創、費用較低的檢查手段。本研究證實了冠心病患者血漿DKK-1水平與患者冠狀動脈Gensini評分呈正相關，提示DKK-1可作為冠心病的診斷及病情評估的一個潛在指標，值得更進一步的深入研究。

綜上所述，冠心病患者血漿DKK-1水平增高，且其水平與冠狀動脈病變程度呈正相關，可作為預測冠狀動脈病變嚴重程度的一個潛在指標。