非洲獅肝內膽管癌的病理形態學研究

邱波劉青仉偉英永王鳳乾張海靜胡建廷

(1.山東省藥學科學院，濟南，250101；2.濟南動物園管理處，濟南，250031)

肝內膽管癌(ICC)屬于肝癌的范疇，是指左右肝管匯合部以上的膽管上皮細胞起源的惡性腫瘤，也稱膽管細胞癌或外周型膽管癌，預后較差。ICC是僅次于肝細胞肝癌(HCC)的原發性肝臟惡性腫瘤，占原發性肝癌的5%[1]。與肝外膽管癌不同，肝內膽管癌早期無明顯臨床癥狀，患者就診時往往已處于晚期[2]。目前人們已經建立了多種實驗動物模型來研究肝內膽管癌并積累了相關的病例資料[3-9]，但對于野生動物來說，肝內膽管癌的病例較為罕見，對其缺乏足夠的了解。本研究將對來自濟南某動物園的一例自發性非洲獅(Pantheraleo)肝內膽管癌為研究對象，通過肉眼形態學及組織病理學觀察，對該病例進行初步的病理形態學探討。

1 背景資料

1.1 個體資料

非洲獅，雌性，8歲，性情機警，易暴躁，曾繁殖1胎，未成活。

1.2 既往病史

該獅于2017年4月28 ～30日出現一過性食欲下降、嘔吐，精神狀態差等癥狀，口服消炎健胃藥物后康復。2017年6月8日該獅出現嘔吐、不食等癥狀，根據情況先后調整飼料配比，吹管注射藥物治療3 d，同時配合口服助消化藥物，效果明顯，精神食欲好轉，恢復正常。

1.3 此次發病及治療

2017年7月以來，該獅外放時經常趴臥于內舍與外活動場之間的假山洞口，活動減少，并出現不食，嘔吐等癥狀。糞便含有草團及毛發，取糞便化驗可見有少量炎性細胞，未見寄生蟲。經培養并作藥敏試驗發現對頭孢曲松、頭孢噻肟、慶大霉素敏感。根據藥敏試驗結果吹注抗菌藥物頭孢曲松鈉和促進胃腸動力藥物胃復安、維生素B1。同時飲水中添加葡萄糖、口服補液鹽和香油；投喂活食時只見咬死并不食。經過上述治療未見明顯效果，遂決定串籠至壓縮籠內采血化驗、腹部B超檢查，輸液治療。血常規、血生化結果顯示白細胞升高，心臟、肝臟、腎臟、胰臟功能異常。B超檢查顯示肝臟、胃底、膀胱有占位病變，腹腔腸腔有大量液性暗區。

根據檢查結果對癥治療：(1)糾正水、電解質、酸堿紊亂：乳酸林格氏液、葡萄糖酸鈣、氯化鉀、小蘇打；(2)補充能量：氨基酸3AA，20%白蛋白、輔酶A、ATP、維生素B6、維生素C；(3)抗菌消炎：5%葡萄糖氯化鈉、頭孢曲松鈉、地塞米松；(4)抑酸解痙保護胃黏膜：奧美拉唑注射液、鹽酸消旋山莨菪堿；(5)強心保肝護腎：去乙酰毛花苷注射液、復方甘草酸銨注射液。連續治療5 d后狀態有所好轉，為避免造成更大應激，轉出治療籠放置于過廊增加活動空間，同時繼續口服藥物。該獅在治療期間未見主動采食，每天人工投喂塞食，精神狀態逐漸變差，數次進行血液、尿液、糞便的化驗，結果顯示肝臟、腎臟功能進一步下降，終因病情嚴重于2017年8月5日死亡。

2 方法

通過肉眼形態學及組織病理學觀察，對該病例進行初步的病理形態學探討。死亡的非洲獅立即進行大體解剖并記錄肉眼觀察異常的組織臟器改變。所取組織均保存于甲醛溶液中并進行常規取材、脫水、石蠟包埋、切片(厚3～5μm)、HE染色，光鏡下進行組織病理學觀察。

3 結果

3.1 肉眼形態學

3.1.1 外觀檢查

形體消瘦，體毛脫落。體重98 kg，體長139 cm，頭縱徑33 cm，橫徑28 cm，前肢長95 cm，后肢長118 cm，尾長91 cm。口腔黏膜及皮下脂肪及結締組織黃染(圖1A)。

圖1 非洲獅肉眼形態學觀察Fig.1 The gross morphology of African lion

3.1.2 剖檢檢查

消化系統：肝臟土黃色，表面及實質布滿大小不一的白色結節，小者如黃豆大小，大者呈菜花狀，質地較硬，占據整個肝葉(圖1 E、F 箭頭所示)，部分肝葉與附近組織(膈肌、腸管及腸系膜)黏連，腹腔內含淡黃色，渾濁的腹水(圖1 C 箭頭所示)。膈肌漿膜面布滿煎雞蛋樣大小不等的白色結節，質地較硬(圖1 B 箭頭所示)；脾臟腫大，瘀血呈深褐色，表面及實質有大小不等的白色結節(圖1 G 箭頭所示)，脾臟前端壞死，白色結節已于實質融合(圖1 H 三角形所示)；胃體底部靠近幽門漿膜肌層有數個大小不一腫瘤(圖1 D 箭頭所示)，胃內空虛，黏膜大部分變黑，壞死，幽門及十二指腸內有少許散在毛團；胰臟與十二指腸被腫瘤包裹融合為一體(圖1 D)；腸系膜及結腸、直腸腸管漿膜肌層布滿大小不一腫瘤結節(圖1 I 箭頭所示)，結腸、直腸內有少許宿便。

泌尿系統：腎臟被膜不易剝離，右腎切開后有積水約20 mL，左腎皮髓質界限模糊不清。

呼吸系統：氣管內有泡沫狀液體，肺臟質地柔軟，有黑褐色色素沉著，切面流出白色泡沫狀液體。

心血管系統：心肌柔軟，內外膜光滑，心耳充血。

3.2 組織病理學

圖2 A：肝臟：肉眼為白色結節的鏡下表現，呈圓灶性分布(箭頭所示)。(HE，標尺=100 μm，20×)。

圖2 B：肝臟：結節內腺體樣結構呈乳頭狀(箭頭所示)。(HE，標尺=100 μm，100×)。

圖2 C：肝臟：腺體樣結構放大，腺體樣結構上皮細胞大小不一，核異型性且具有病理性核分裂相(箭頭所示)并擠壓周圍的肝組織(三角形所示)。(HE，標尺=100 μm，200×)。

圖2 D：肝臟：肉眼為白色結節的另一鏡下表現，呈圓灶性分布(箭頭所示)。(HE，標尺=100 μm，20×)。

圖2 E：肝臟：腺體樣結構內黃色似膽汁樣物質(箭頭所示)。(HE，標尺=100 μm，100×)。

圖2 F：肝臟：腺體樣結構內脫落的上皮細胞(圈線所示)。(HE，標尺=100 μm，200×)。

圖2 G：脾臟：瘀血(五角星所示)，轉移的腺體樣結構(箭頭所示)，還可見組織壞死(三角形所示)。(HE，標尺=100 μm，20×)。

圖2 H：脾臟：轉移的腺體樣結構(三角形所示)，組織壞死(箭頭所示)。圖2G的放大。(HE，標尺=100 μm，100×)。

圖2 I：脾臟：轉移的腺體樣結構，腺體樣結構上皮細胞大小不一，核異型性(箭頭所示)。(HE，標尺=100 μm，200×)。

圖2 J：脾臟：腺體樣結構上皮細胞大小不一，核異型性且具有病理性核分裂相(箭頭所示)。(HE，標尺=100 μm，400×)。圖2 I的放大。

圖2 K：脾臟：轉移的肉眼為白色結節的鏡下表現，呈圓灶性分布(三角形所示)。(HE，標尺=100 μm，40×)。

圖2 L：脾臟：白色結節的放大倍數可見腺體樣結構(箭頭所示)。(HE，標尺=100μm，100×)。

圖2 M：脾臟：腺體樣結構上皮細胞大小不一，核異型性且具有病理性核分裂相(箭頭所示)。(HE，標尺=100 μm，400×)。圖2 L的放大。

圖2 非洲獅組織病理學觀察Fig.2 The histopathological observation of African lion

圖2 N：膈肌：轉移的肉眼為煎雞蛋樣白色結節內的腺體樣結構(箭頭所示)。(HE，標尺=100 μm，40×)。

圖2 O：膈肌：腺體樣結構上皮細胞大小不一，核異型性(箭頭所示)。(HE，標尺=100 μm，400×)。圖2 N的放大。

圖2 P：胃漿膜肌層：漿膜肌層內的腺體樣結構(箭頭所示)。(HE，標尺=100 μm，40×)。

圖2 Q：胃漿膜肌層：腺體樣結構上皮細胞大小不一，核異型性(箭頭所示)。(HE，標尺=100 μm，400×)。圖2 P的放大。

圖2 R：肺臟：間質內可見含有色素沉著的異物組織(箭頭所示)。(HE，標尺=100 μm，200×)

4 討論

肝內膽管癌是指起源于肝內膽管上皮的惡性腫瘤。與肝外膽管癌不同，ICC早期缺乏黃疸等特異性癥狀，且生長速度相對較快，故ICC早期診斷困難[10]。雖然，目前肝內膽管癌模型主要集中于誘發模型和異位移植模型的建立，但是這種由多類化學藥物誘發的模型不能完全模擬人膽管癌的自然發病過程，誘發時間周期較長，而且同時誘發了肝臟、胃、胰腺、胸腺、甲狀旁腺和血液系統等其他類型的腫瘤。異位移植模型中膽管癌的生長環境又與人肝內膽管癌的生長環境迥然不同，必然會對模型中膽管癌的生物學特性產生影響。因此，到目前為止，仍缺乏一個理想的肝內膽管癌動物模型，給研究肝內膽管癌帶來了一定的困難。而本研究中非洲獅的自發性病例更好地模擬人肝內膽管癌的自然發病過程及生長環境，為研究人類肝內膽管癌帶來一定的背景資料。

實驗動物的膽管腫瘤往往通過大體形態學觀察就可發現。它們一般表現為多個硬度不一的白色結節。膽管腫瘤獨特的光澤和通常情況下的堅硬程度使其在大體觀察時很容易與其他原發性肝臟腫瘤區分[11]。結合本病例的肉眼形態學觀察，該患病動物肝臟表面及實質布滿大小不一的白色結節，小者如黃豆大小，大者呈菜花狀，質地較硬；因此可初步與其他原發性肝臟腫瘤相區分。另外，經組織病理學觀察，肝組織結節內可見適量的膠原結締組織基質包繞著腺體樣結構的腫瘤細胞，該腫瘤細胞大小不一，核異型性且具有病理性核分裂相，其形狀和大小都不規則，呈砥柱狀外觀。腺體樣結構內可見脫落的腫瘤細胞及染為黃染的物質，只有極少的甚至沒有黏液。綜合分析，可初步診斷該病例為膽管腫瘤中的肝內膽管癌，腫瘤細胞來源于肝內膽管上皮。又因肉眼觀察該患病動物膽囊充盈，口腔黏膜及皮下脂肪及結締組織黃染，推測可能因膽管上皮腫瘤細胞增生引起膽汁淤積所致。但是，欲將一個原發性膽管腫瘤與從其他部位轉移來的上皮性腫瘤區分開是比較困難的。為了更好地區分從其他部位轉移來的上皮性腫瘤，我們對其他臟器進行了組織病理學觀察。結果顯示膈肌、脾臟、胃、腸系膜組織內呈彌漫性分布的呈腺體樣的結構的腫瘤組織，該腺體樣結構與肝組織的腺體樣結構一樣，進一步證實了該腫瘤細胞來源于肝內的膽管上皮。因此，可初步確診該病例為原發性的肝內膽管細胞癌。