藥敏試驗在治療發情期藍狐陰道細菌性疾病的應用

郝芯緲段亞南魏來李杰李彥東劉志平

(1.東北林業大學野生動物資源學院，哈爾濱，150040；2.哈爾濱華隆藍狐育種有限公司，哈爾濱，150129；3.陜西佛坪國家級自然保護區管理局，佛坪，723400；4.東北林業大學醫院，哈爾濱，150040)

藍狐(Alopexlagopus)發情期陰道細菌感染為養狐場常見疾病，多表現為外陰可見膿狀分泌物。其預防與治療多憑經驗使用抗生素，因沒有針對性，同時長期、濫用抗菌藥物宜造成細菌對許多藥物產生耐藥性，所以效果往往不佳。綠膿桿菌、大腸桿菌、沙門氏菌及陰道加德納氏菌等均可引起藍狐繁殖障礙，且往往一種細菌感染后，造成機體免疫力降低，從而促使其他細菌繼發感染，表現出復雜的臨床癥狀，帶來嚴重的危害和損失[1]。

常規診斷、治療多采用分離致病菌后再做藥敏試驗的方法，如此耗時較長，往往耽誤治療。本次研究旨在應用快速藥敏試驗減少細菌耐藥性分析所需的時間，準確篩選出有針對性的藥物，為藍狐陰道細菌性疾病的早期治療提供依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病料

試驗用藍狐陰道分泌物20份，分別來自哈爾濱市某養狐場20只母狐，于2017年4月5～7日無菌采集。20份樣本顏色不一，包括綠色、紅色、黃色及白色，形態有膿狀、膠凍狀。對樣本分別編號，裝入EP管，置于-20℃冰箱內冷凍保存。

1.1.2 藥敏紙片

共12種，包括氨芐西林、青霉素、亞胺培南、頭孢他啶、頭孢西丁、氯霉素、四環素、氧氟沙星、頭孢呋辛、阿奇霉素、恩諾沙星、多粘菌素B。均購自北京奧博星生物技術有限責任公司。

1.1.3 培養基、試劑

普通營養瓊脂培養基購自青島海博生物科技有限公司、生理鹽水由實驗室自行配制。

1.2 方法

藥敏試驗采用紙片擴散法[2]。在20份樣品中分別加入少量滅菌生理鹽水充分稀釋，各取5 μL稀釋液到新的EP管中，混勻后取50 μL均勻涂布于直徑90 mm的普通營養瓊脂培養基上，待自然干燥后，用無菌鑷子將各藥敏紙片貼在培養基表面，每個平板均勻分布貼6張，置37℃恒溫培養24 h后，分別測定各抑菌圈直徑，以抑菌圈直徑的大小判定細菌對藥物的敏感度。

2 結果

2.1 藥敏試驗結果

所檢測的12種抗生素中，細菌對亞胺培南敏感性最高，無耐藥菌株產生，抑菌圈直徑為26 mm；對頭孢西丁和頭孢呋辛有一定敏感性，抑菌圈直徑分別為8 mm和12 mm；對氨芐西林、青霉素、頭孢他啶、氯霉素、四環素、氧氟沙星、阿奇霉素、恩諾沙星和多粘菌素B具有較強的耐藥性，耐藥率為100%，表現為0抑菌圈(表1)。

表1 藥敏試驗結果

Tab.1 Results of antibiotics susceptibility test

2.2 治療結果

根據藥敏試驗結果，使用敏感性最高的藥物亞胺培南對20只陰道分泌物異常的母狐進行治療，1 g/只·d，靜脈滴注。1周后，20只母狐陰道分泌物均明顯減少或消失，且再無癥狀出現(圖1～4)。

圖1 治療前Fig.1 Before the treatment

圖2 治療前Fig.2 Before the treatment

圖3 治療后Fig.3 After the treatment

圖4 治療后Fig.4 After the treatment

3 討論

隨著藍狐規模化養殖業的不斷擴大和人工授精技術的廣泛應用，母狐發情期生殖系統細菌性疾病頻頻發生，現已成為影響母狐繁殖率的重要因素。Gierloff 和Lefmann在1976年首次報道丹麥養狐場發生的綠膿桿菌引起母狐化膿性子宮內膜炎[3]。高玉蘭等[4]、尹燕博等[5]、蘇振渝等[6]也相繼證實了母狐人工授精的二次污染可引起綠膿桿菌感染。1987年，嚴忠誠等[7]從我國進口狐的流產胎兒及其流產狐的陰道分泌物中分離到陰道加德納氏菌共145株，感染率0.9%～21.9%。于國內外首次揭示，該菌是引起母狐空懷和流產的重要原因之一。除此之外，大腸桿菌、沙門氏菌、鏈球菌和葡萄球菌等均可引起母狐發生空懷、死胎和流產。以上多種細菌性疾病的發生日益頻繁、越來越普遍，尤其是以綠膿桿菌感染為主的混合感染，已成為影響藍狐養殖疫病的主要原因之一，嚴重地威脅到藍狐養殖業的持續發展。

近年來，大量研究報道表明，隨著多重耐藥菌在世界范圍內的散播，細菌耐藥日趨嚴重，準確且快速的抗菌藥物敏感性試驗結果對于指導治療臨床各種類型細菌感染顯得更加重要[8]。常規方法需將病料接種于培養基分離培養后進行藥敏試驗，而本研究所采用的直接藥敏試驗省去繁瑣的步驟，方便易操作，臨床適用性強，可提前2 d報告結果。通過亞胺培南的臨床應用，表現出較好的治療效果，有效地控制了疫情的發生。當母狐陰道分泌物異常或增多時，通過該方法一次性篩選出對混合細菌都敏感的兩種或兩種以上的藥物，為臨床治療提供有效的依據，對及早制定正確的治療方案具有重要意義。