山綠茶3種不同炮制品醇提物對正常小鼠糖耐量的影響*

山綠茶(Ilex hainanensis Merr)屬冬青科冬青屬植物，多用其干燥葉，具有清熱解毒，平肝潛陽，活血化瘀的功效［1］，用于降血壓、降血脂、降膽固醇及冠心病、腦血管意外所致的偏癱以及風熱感冒、肺熱咳嗽、咽喉水腫、扁桃體炎、痢疾等病癥［2］。其主要化學成分包含黃酮類、三萜酸類、綠原酸及山綠茶苷等，而經過不同方法炮制后的山綠茶中化學成分含量也各不相同。近年對糖尿病小鼠、高脂鵪鶉以及麻醉貓進行降血糖、降血脂、降血壓的研究，結果顯示山綠茶醇提物具有降糖，降脂，降壓作用，且降血糖作用機制可能與胰島素分泌增加有關［3-4］。本課題早期研究發現不同炮制方法的醇提物總黃酮含量不同，以清炒炮制含量最高，本研究以此為基礎，對山綠茶3種不同炮制品的醇提物對正常小鼠糖耐量可能產生的影響進行研究。

1 材料與方法

1.1動物SPF級昆明種小鼠，雌雄各半，體質量18～22 g，廣西醫科大學實驗動物中心提供，實驗動物許可證號：SCXK桂2014-001，飼養環境：恒溫恒濕。

1.2儀器與試劑TU-1901雙光束紫外-可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)；配套放免專用冷凍離心機(上海安亭科學儀器廠)；LG16-W型離心機(北京醫用離心機廠)；AE100型1/10000電子分析天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)；葡萄糖(Glu，石家莊市華營聯合Glu廠，批號：023974)；鹽酸腎上腺素注射液(Adr，天津金耀氨基酸有限公司，批號：021121，規格：l mg/mL)；Glu試劑盒(四川省邁克科技有限責任公司，批號：0941365)。

1.3醇提物本藥材經廣西中醫藥大學陳勇教授鑒定，符合廣西中藥材標準(1990年版)山綠茶項下藥材品種，鑒定為冬青科冬青屬植物海南冬青的干燥葉。清炒炮制法：將山綠茶鮮葉置于炒鍋中，用中火或武火加熱，炒至藥材表面呈焦黃或焦褐色，內部顏色加深，有焦香氣味時即可取出，后用70%乙醇回流提取2次，分別為10倍乙醇10小時和8倍乙醇1.5小時，合并濾液，回收乙醇濃縮后備用；傳統炮制法：將山綠茶的鮮葉用熱鍋(260～280℃)翻炒 5分鐘，殺青，后用手揉搓，其次復炒2～3次，至葉色呈暗綠色，略有光澤為宜，取出，放涼，醇提方法同前；陰干炮制法：將山綠茶鮮藥材放在陰涼處晾干即可，醇提方法同前。后以綠原酸和蘆丁為標準采用高效液相色譜法測其黃酮類成分含量，見表1。

表1 山綠茶3種不同炮制品中蘆丁和綠原酸含量 mg/g

1.4實驗方法［5］

1.4.1 對口服葡萄糖致瞬時高血糖(Glu性)小鼠糖耐量的影響 正常小鼠120只，隨機分為12組，灌胃給藥含生藥 20、15、10 g/kg藥物，其中15 g/kg為早期預實驗結果提示的山綠茶對小鼠血糖的有效濃度，在此基礎上，增加和減小相應濃度觀察各炮制品藥效學。給藥14天后禁食12小時，然后各組小鼠給藥0.5小時后，眼眶取血測空腹0小時(即時)血糖。0.5小時后除空白組小鼠腹腔注射(ig)等量生理鹽水外，其余小鼠均ig Glu溶液2.5g/kg，眼眶取血測定給予Glu后0.5、1、2小時的血糖值。按Glu試劑盒GOD-POD法測空腹血糖值。并以空腹血糖值作為零時，計算不同時間血糖值的變化。

1.4.2 對腹腔注射腎上腺素致瞬時高血糖(Adr性)小鼠糖耐量的影響 正常小鼠120只，隨機分為12組，分組、給藥及給藥劑量同“1.4.1”項下方法，給藥14天后禁食12小時，然后各組小鼠給藥0.5小時，取血測空腹0小時(即時)血糖。0.5小時后除空白組小鼠ig等量生理鹽水外，其余小鼠均 ig Adr 240 mg/kg，測定給予 Adr 后 0.5、1、2 小時的血糖值。按Glu試劑盒GOD-POD法測空腹血糖值，并以空腹血糖值作為零時，計算不同時間血糖值的變化。

1.5統計學方法采用SPSS 13.0軟件分析數據，計量資料以(±s)表示，采用t檢驗，方差不齊采用t檢驗校正公式，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1山綠茶3種不同炮制品醇提物對G l u性小鼠糖耐量的影響模型組較空白組血糖升高(P＜0.01)，給藥前各給藥組間血糖比較差異無統計學意義(P＞0.05)，說明葡萄糖負荷成功；與模型組比較，灌胃Glu后0.5小時，傳統品(20、15g/kg)組以及清炒品和陰干品各劑量組對Glu引起高血糖小鼠血糖升高均有抑制作用(P＜0.01)。給藥后1，2 小時時傳統品(20、15g/kg)組、清炒品(20g/kg)組、陰干品(20、15 g/kg)組仍有抑制血糖升高的作用(P＜0.05)，提示山綠茶3種不同炮制品醇提物對Glu性高血糖小鼠均有治療作用，見表2。

表2 山綠茶3種不同炮制品對G l u性高血糖小鼠血糖的影響

2.2山綠茶3種不同炮制品醇提物對A dr性小鼠糖耐量的影響模型組較空白組血糖升高(P＜0.01)，且給藥前各給藥組間比較無明顯差異(P＞0.05)，說明造模成功；與模型組比較，ig Adr后0.5、1 小時傳統品(20、15 g/kg)劑量組、清炒品(20、15 g/kg)組和陰干品(20 g/kg)組對Adr引起高血糖小鼠血糖升高均有抑制作用(P＜0.01)。ig Adr后1小時3個炮制品低劑量(10 g/kg)組對高血糖小鼠血糖升高無降低作用(P＞0.05)。提示山綠茶3種不同炮制品醇提物對Adr性高血糖小鼠均有治療作用，見表3。

表3 山綠茶3種不同炮制品對A dr性小鼠血糖的影響

3 討論

糖耐量減低是糖尿病發展過程中的一個中間階段，若干年后這些人群大多數可能會發展為糖尿病［6］，而且糖耐量減低人群大血管病變的發生率較普通人群高。因此，防止由糖耐量減低發展為糖尿病，甚至使之恢復到正常糖耐量是防治糖尿病的一項重要措施，也是評價糖尿病防治藥物的一個重要指標［7］。在血糖濃度調節中，肝臟是一重要器官，其工作受神經和激素控制，其中包括胰島素、胰高血糖素、Adr等。本研究探討山綠茶3種不同炮制品的醇提物對正常小鼠糖耐量的干預作用，結果表明山綠茶3種不同炮制品醇提物可抵抗Adr性糖尿病小鼠血糖上升，并且抑制外源性Glu引起的血糖升高，結合山綠茶富含黃酮類、三萜及其皂苷類、咖啡酰奎寧酸類和半萜苷類等化學成分［8-9］，提示其降糖作用與山綠茶3種不同炮制品中總黃酮有關［10-11］。在已發現黃酮類中，蘆丁和綠原酸的作用是清除細胞活性氧自由基，而蘆丁與綠原酸已成為山綠茶質量標準應用較多的對照品［12］。本研究結果表明清炒組的綠原酸和蘆丁的含量最高，但其具體耐糖機理并不十分清楚。本研究后期發現山綠茶降糖機制可能與增加正常小鼠肝糖元的貯存，減少肝糖元分解，促進糖的有氧氧化而加速糖元合成等因素有關。這一發現為山綠茶進一步開發成為防治糖尿病的藥物提供了一定理論依據。