復元醒腦湯對糖尿病腦梗死大鼠神經缺損行為及糖脂代謝的干預作用*

沈俊逸，趙智明，劉春麗，壯雨雯，徐文俊，蔡 輝

南京軍區南京總醫院中西醫結合科，江蘇 南京 210002

腦梗死是目前繼癌癥和心血管疾病之后危害人類生命健康的第三大疾病。每年全球約有1 500萬人發病，死亡率高達17%～35%，而存活下來的患者中3%～6%遺留殘疾［1-3］。糖尿病致代謝紊亂是引發腦梗死的一個獨立危險因素［4-7］。正常機體如果長期處在高血糖環境中脂類的代謝過程會發生紊亂、異常，進而引起蛋白質過度糖基化。而蛋白質的過度糖基化會使蛋白質的結構、溶解性、配位結合等理化性質發生改變。這些過度糖基化的蛋白終產物不能在體內有效代謝降解，沉積于血管內壁，久之，加速了血管病變［8-11］。中藥復元醒腦湯在治療糖尿病腦梗死中顯示出了良好的治療效果，本研究通過糖尿病腦梗死大鼠模型觀察復元醒腦湯對其血糖、膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)的調節作用以及對神經缺損行為的影響，現報道如下：

1 材料與方法

1.1動物與試劑健康雄性SD大鼠150只，體質量(250±25)g，購自上海杰思捷實驗動物有限公司，動物合格證：SCXK(滬)2011-009；2，3，5- 氯化三苯基四氮唑(TTC)購于正大青春寶藥業；水合氯醛購于上海國藥集團化學試劑公司；鏈脲佐菌素(STZ)購于美國Sigma公司。

1.2動物分組將實驗大鼠按隨機數字表法隨機均分為正常組、假手術組、模型組、西藥治療組、中藥治療組，每組30只。

1.3模型制備腹腔注射STZ 50 mg/kg后采用高能量高脂肪食物飼養2周復制糖尿病大鼠模型。

1.4腦梗死模型制備在STZ致糖尿病模型的基礎上，采用線栓法制備糖尿病腦梗死動物模型［11］。

1.5灌胃給藥中藥治療組大鼠灌胃復元醒腦湯［人參(單煎)10 g，三七 10 g，石菖蒲 12 g，水蛭10 g，益母草 30 g，生南星 15 g，制大黃(后下)9 g，濃度 388 g/L］10.4 g/kg(體質量)/d，2 次 /d，連續14天。西藥治療組灌胃二甲雙胍(君力達制藥有限公司，批號：H20058567，規格：0.5g×12 粒×4板)27 mg/kg(體質量)，2 次 /d；尼莫地平(中美上海施貴寶制藥有限公司，批號：11080056，規格：20mg×12片×2板)2.16 mg/kg(體質量)，2次 /d，連續 14天。模型組、假手術組灌胃等容量生理鹽水。

1.6血糖、膽固醇和甘油三酯檢測注射STZ 1周后大鼠尾靜脈采血測血糖值。腦梗死造模前后測定各組大鼠血脂水平，應用氧化酶法測定大鼠血清總膽固醇濃度；使用甘油磷酸氧化酶法測定大鼠血清中TG的濃度。

1.7神經缺損行為體征評價造模成功后大鼠完全清醒，術后3小時及7天根據Bederson神經缺損行為體征評分法對大鼠神經缺損行為體征進行綜合等級評分。將大鼠提尾懸空1米，觀察前肢屈曲情況，具體評分標準0級(0分)：無明顯神經缺損癥狀；Ⅰ級(1分)：實驗動物腦梗死對側前肢回收屈曲內收，同時實驗動物同側前肢向地面伸展；Ⅱ級(2分)：實驗動物Ⅰ級體征+實驗動物俯臥于桌面時，從腦梗死側向對側推動大鼠時阻力降低；Ⅲ級(3分)：實驗動物Ⅱ級體征+實驗大鼠行走時向腦梗死對側肢體旋轉(呈追尾狀)，甚至會傾倒。分值大于或等于Ⅰ級時表明實驗動物模型制作成功。

1.8統計學方法采用SPSS 16.0分析數據，計量資料以(±s)表示，不同組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較用LSD-t分析，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1大鼠造模生存例數入組150只大鼠，每組30只，正常組死亡2只。另外120只大鼠在糖尿病造模成功后，在高脂飼料喂養的條件下死亡20只。剩余糖尿病模型大鼠100只分為4組，每組25只。假手術組2只死亡；模型組10只死亡；西藥治療組9只死亡；中藥治療組7只死亡。因此各實驗組入組數據例數分別為正常對照組28例，假手術組23例，模型組15例，西藥治療組16例，中藥治療組18例。

2.2復元醒腦湯對糖尿病腦梗死大鼠血糖水平的影響注射STZ 1周后，各組大鼠空腹血糖高于正常組；手術(線栓)后7天，糖尿病模型(假手術組、模型組、中藥治療組、西藥治療組)與正常組相比，血糖濃度顯著升高(P＜0.01)；手術后7天，與模型組相比，中藥治療組和西藥治療組大鼠血糖濃度降低(P＜0.01)，說明西藥和中藥均有降低糖尿病模型大鼠血糖的作用，見表1。

表1 各組大鼠手術前后血糖變化情況(±s) mmol/L

表1 各組大鼠手術前后血糖變化情況(±s) mmol/L

注：＊＊表示與正常組比較，P＜0.01；##表示與模型組比較，P＜0.01；△表示與術前比較，P＜0.01

組別 只數 術前 術后7天正常組 28 8.03±1.27 7.71±1.20假手術組 23 24.60±4.36 28.29±3.65＊＊△模型組 15 24.26±3.53 32.35±4.12＊＊△西藥治療組 16 26.76±5.08 22.13±3.71##＊＊△中藥治療組 18 24.01±4.87 20.72±3.44##＊＊△

2.3復元醒腦湯對糖尿病腦梗死大鼠血清TC水平的影響與正常組相比，各組大鼠腦梗死術前血清中TC濃度提升(P＜0.01)。手術后7天假手術組、模型組、西藥治療組大鼠血清TC含量未降低，與模型組相比，中藥治療組TC濃度下降，差異具有統計學意義(P＜0.01)，見表2。

表2 各組大鼠手術前后TC變化情況 mmol/L

2.4復元醒腦湯對糖尿病腦梗死大鼠血清TG的影響與正常組大鼠相比，各組大鼠腦梗死術前血清TG濃度提升(P＜0.01)。手術后7天假手術組、模型組、西藥治療組大鼠血清中TG未降低，與模型組相比，中藥治療組大鼠血清TG濃度降低，差異具有統計學意義(P＜0.01)，見表3。

表3 各組大鼠手術前后TG變化情況 mmol/L

2.5復元醒腦湯對糖尿病腦梗死大鼠神經缺損行為的影響造模結束后假手術組和正常組大鼠神經功能缺損評分均為0分；模型組、中藥治療組及西藥治療組均出現不同程度的神經行為學異常，主要表現為右側霍納征(上瞼下垂，瞳孔散大)和左側前肢為主的癱瘓，表現為提尾時左側肢體屈曲內收緊貼胸壁，行走時失去正常的狀態，呈現出左側轉圈，或向左側傾倒等。各組大鼠神經功能缺損評分均高于正常組、假手術組，提示腦梗死模型造模成功；灌胃治療7天后中藥治療組與西藥治療組大鼠Bederson評分降低，差異具有統計學意義(P＜0.01)，見表 4。

表4 各組大鼠手術后Bederson評分比較 分

3 討論

糖尿病并發腦梗死以其居高不下的致殘率和病死率嚴重威脅著人類健康。糖尿病會增加腦卒中的風險，糖尿病患者血糖控制受損，腦梗死灶更容易擴大，持續高血糖條件下糖類的有氧代謝過程發生障礙，生成大量有害物質乳酸，造成乳酸性酸中毒，最終誘發正常細胞內的高滲狀態，細胞缺氧，從而加劇缺血腦組織損害［12］。Kwon 等［13］報道，相比于糖尿病患者，糖尿病腦卒中患者發病率更高，同時腦卒中會引發認知障礙［14］。丁承宗等［15］通過大量CT分析顯示糖尿病引發的腦梗死患者中超過一半伴隨多發腔梗灶，并累及大腦中動脈支配區。

清代醫家沈金鰲認為“元氣虛為中風之根也。”腦梗死的發病主要以元氣虛損為本,痰瘀互結及痰熱生風為核心病機。痰、瘀為元氣虛導致的中間病理產物，貫穿中風始終,痰瘀互阻，生熱化風，風火相煽，乃發“風”。據此，本研究以補益元氣為主，佐逐瘀化痰、泄熱熄風、醒腦開竅之法，自擬復元醒腦湯，方中人參大補元氣為君，扶正祛邪，為治本之藥；石菖蒲芳香走竄，功擅豁痰辟穢，開竅寧神；膽南星清熱化痰之力強，且能熄風定驚，擅祛頑痰、風痰；三七化瘀止血，活血定痛；水蛭為化瘀峻品，消癥破結通經。張錫純認為本品“破瘀血而不傷新血，專入血分而不損氣分”，以上共為臣藥。大黃苦降，功專通腑瀉下，又具有清熱瀉火，涼血解毒之功，且有逐瘀通經之功效，與三七通澀并用，活血止血，導濕熱、瘀熱外出，熱毒下泄，使氣血調達，經絡通暢；益母草為血家圣藥，不僅能活血調經，且有利尿消腫，清熱解毒之功，尤善解郁平肝，活血祛風，均為佐藥。諸藥合用，方小力專，共奏“復元醒腦，逐瘀化痰，泄熱熄風”之功。

本研究表明復元醒腦湯對糖尿病腦梗死大鼠的神經缺損有修復作用。很多學者認為血脂的增高是腦梗死的誘發因素，但是血脂異常與腦梗死之間的關系尚未闡明。高TC和TG易誘發動脈粥樣硬化。動脈粥樣硬化引起血栓形成，進而引起腦梗死。高血脂會引起多種凝血因子升高，增加血小板凝集，當血管內皮細胞受損時會引發血栓形成［16-18］。STZ誘導聯合高脂飼料喂養的糖尿病腦梗死大鼠血脂水平較高［19］，降低中藥治療組大鼠血清TG和TC低于模型組，提示復元醒腦湯對血脂有較好的干預作用，與模型組相比復元醒腦湯能夠降低糖尿病腦梗死大鼠的血糖水平。