QuEChERS-三重四級桿氣質法測定花椒油中抗氧化劑

景贊，劉超，胡丹，劉曉碧

(樂山市食品藥品檢驗檢測中心，四川 樂山 614000)

花椒油是人們餐桌上常見的一種調味品，在以麻、辣、鮮、香為特色的川菜食材中舉足輕重?；ń酚偷纳a工藝有浸提法、溶劑萃取法、超臨界二氧化碳萃取法和壓榨法，提取出的精油配以一定比例的食用油脂，得到成品花椒油[1,2]。BHA,BHT,TBHQ是廣泛用于油脂食品以防止油脂氧化的合成抗氧化劑，近幾年，食品添加劑超范圍、超限量使用問題依然嚴峻，食用油脂中抗氧化劑超標現象也時有發生，因此開發簡便、有效的檢測方法顯得尤為必要。

目前檢測BHA,BHT,TBHQ的方法主要有液相色譜法、氣相色譜法、液質聯用法，另外電化學法也有報道[3-7]。QuEChERS 法在農獸藥殘留檢測技術方面應用廣泛，具有很大的開發潛力[8-10]。本文將氣質聯用質譜技術可同時測定多個目標化合物、具有高選擇性、高靈敏度及豐富的結構信息與QuEChERS 法簡單、快捷、試劑消耗少等優點相結合，開發了花椒油中BHA,BHT,TBHQ的氣質聯用檢測技術。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

BHA標準品：含量99.4%；BHT標準品：含量99.9%；TBHQ標準品：含量99.4%，均購于Dr.Ehrenstorfer GmbH；正己烷、乙腈、丙酮：均為色譜純。

1.2 儀器與設備

TQ-8040氣質聯用儀 島津(中國)有限公司；EV331旋轉蒸發儀 萊伯泰科儀器股份有限公司。

1.3 標準工作溶液

準確稱取BHA，BHT，TBHQ標準物質各10 mg至100 mL容量瓶中，用丙酮定容至刻度，配制成濃度為100 μg/mL的混合標準溶液，混勻后置于冰箱中冷藏備用。使用時需要恢復到室溫后，根據實際配制成不同濃度的標準系列工作溶液。

以多反應動態監測模式(以下簡稱MRM)測定標準系列工作溶液，以工作液濃度為橫坐標，對應的響應值為縱坐標，擬合一元線性回歸方程。

1.4 樣品制備方法

稱取試樣0.5 g置于50 mL比色管中，加入5 mL乙腈飽和的正己烷，搖勻溶解試樣，加入10 mL正己烷飽和的乙腈，振搖3 min，充分靜置后，取上層溶液2 mL轉移至玻璃試管中，加入100 mg C18粉和100 mg PSA粉，漩渦3 min。取1 mL上層溶液經旋轉蒸發儀濃縮至近干，加入1 mL丙酮，12000 r/min高速冷凍離心后取上清液上機分析。

1.5 檢測條件

進樣口條件設置：進樣模式：不分流，高壓進樣，溫度250 ℃；毛細管柱：Rxi-5Sil MS，購于Restek公司，30 m×0.25 mm×0.25 μm；色譜柱升溫程序：初始溫度70 ℃保持2 min，以10 ℃/min的升溫速率升至280 ℃，保持8 min；恒線速度模式：40 cm；進樣體積：1 μL；載氣：氦氣，純度99.999%。

溶劑切割時間：4 min；GC-MS接口溫度：280 ℃；離子源溫度：230 ℃；電離方式：EI，電離能量70 eV。

2 結果與分析

2.1 試樣提取及監測離子的優化

樣品提取液參考了國標方法和現有文獻，選用了正己烷飽和的乙腈，減少處理過程中對非極性成分的提取。C18粉和PSA 粉的加入能在很大程度上吸附油脂中的有機酸、親脂性色素、維生素等干擾物質，凈化提取溶液同時降低了對目標物的干擾。雖然經過了上述的凈化處理，但在14.397 min附近仍存在干擾峰，氣相色譜圖譜見圖1，通過優化現有條件后仍不能達到完全分離，進而選擇了氣質聯用技術，通過監測目標離子定性定量，可以大大減少其他成分的干擾，3種抗氧化劑在70 eV下的特征離子質譜圖見圖2～圖4，根據特征離子建立MRM方法，分別以165>137，205>57，151>123作為3種目標物的定量離子對，建立的方法在實際應用中目標物附近未見干擾物，見圖5，定性定量更為準確。目標物保留時間及MRM參數見表1。

圖1 花椒油提取液的氣相色譜圖Fig.1 The gas chromatogram ofZanthoxylum bungeanumoil extract

圖2 BHA碎片離子質譜圖Fig.2 The fragment ions of BHA

圖3 BHT碎片離子質譜圖Fig.3 The fragment ions of BHT

圖4 TBHQ碎片離子質譜圖Fig.4 The fragment ions of TBHQ

圖5 抗氧化劑的總離子流色譜圖Fig.5 The total ion chromatogram of antioxidants

目標物保留時間(min)定量離子對(m/z)CE定性離子對(m/z)CEBHA12.186165>13710180>16510BHT12.452205>5712205>17712TBHQ12.953151>1238166>15110

2.2 線性關系和檢出限

將濃度與對應的響應值進行一元線性回歸方程擬合，在0～5 μg/mL的濃度范圍內，3種物質的相關系數分別為0.9989，0.9996，0.9993,線性關系良好。檢出限計算方法為3倍的S/N，結果見表2。

表2 線性范圍和檢出限Table 2 Linear range and detection limit of antioxidants

目前檢測油脂中抗氧化劑的國標方法有GB 5009.32—2016，SN/T 1050—2014和SN/T 3849—2014，各方法主要采用液相色譜法、氣相色譜法、氣質聯用法分析BHA，BHT和TBHQ，本方法由于使用了質譜聯用技術，在方法檢出限方面更有優勢。

2.3 加標回收率

稱取若干份不含待測成分的空白樣品，加入BHA，BHT，TBHQ標準溶液，使其在油脂中的濃度分別達到0.1，0.2，0.4 g/kg ，每個濃度水平設定6個平行，按照1.4樣品提取方法制備，測定并計算方法的回收率和相對標準偏差，結果見表3，加標樣品色譜圖見圖6。

表3 加標回收率及其相對標準偏差(n=6)Table 3 Recoveries and relative standard deviation of samples (n=6)

圖6 加標樣品多反應監測色譜圖Fig.6 MRM chromatogram of spiked samples

由表3可知，3種抗氧化劑在低、中、高3個濃度下回收率均能達到80%以上，方法的準確性滿足測定要求。

2.4 精密度

為了考察方法的精密度，將1.0 μg/mL的混合標準溶液，連續進樣6次，測定數據見表4。

表4 精密度(n=6)Table 4 The precision of samples (n=6)

由表4可知，該方法測定的3種抗氧化劑精密度范圍為0.8%～1.4%，精密度滿足要求。

2.5 標準溶液的穩定性

利用該方法對標準溶液的穩定性進行了考察，將分別在室溫下放置2，4，8，12，16，20，24 h后的溶液進行測定，結果見表 5。

表5 標準溶液穩定性Table 5 The stability of standard solution

由表5可知，在該方法下3種抗氧化劑精密度范圍為1.4%～3.1%，穩定性滿足要求。

3 討論

本文采用乙腈提取并用QuEChERS方法凈化，結合氣質聯用的高選擇性，建立了檢測3種抗氧化劑的方法，結果表明該方法的各方面均滿足要求，相比傳統方法可有效去除干擾物質，簡化了處理過程，節省了溶劑的消耗，降低了對人和環境的污染，提高了工作效率，適用于花椒油中抗氧化劑的檢測。