忍冬葉綠原酸含量測(cè)定

黃興龍等

【摘要】目的：研究忍冬葉的化學(xué)成分，為忍冬葉藥材標(biāo)準(zhǔn)的制定提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和科學(xué)依據(jù)。方法：采用高效液相色譜法測(cè)定了綠原酸的含量。結(jié)果：綠原酸含量不得少于0.83%。結(jié)論：為忍冬葉藥材的準(zhǔn)確鑒定和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供了科學(xué)依據(jù)和資料，也為忍冬葉的開發(fā)應(yīng)用研究奠定了基礎(chǔ)。

【關(guān)鍵詞】忍冬葉；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；高效液相

1實(shí)驗(yàn)方法

1.1色譜條件

色譜柱：Damonsil C18 柱（250x4.6mm，5μm）：流動(dòng)相：乙睛：0.4%磷酸（14：86），臨用前以0.45gm微孔濾膜過濾并經(jīng)超聲脫氣處理；檢測(cè)波長(zhǎng)：327mm：柱溫：35℃；流速：0.8mL/min：進(jìn)樣量20μl。

1.2對(duì)照品溶液的制備

精密稱取綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品4.33mg，置25mL棕色容量瓶中，精密加入水，定容至刻度，搖勻，備用。

1.3供試品溶液的制備

取藥材粉末（過四號(hào)篩）0.25g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入水25ml，稱定重量，水浴回流45min，放冷，再稱定重量，用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。棄初濾液，精密吸取續(xù)濾液5ml置25ml棕色容量瓶中，加水至刻度，搖勻，再用0.45μm微孔濾膜過濾，即得。

1.4工作曲線的繪制

分別精密吸取綠原酸對(duì)照品溶液各0.5、1、1.5、2、2.5、3mL，置10ml的容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾；按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，設(shè)定進(jìn)樣體積為20μL，記錄色譜圖。以峰面積為縱坐標(biāo)，綠原酸進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=29.99X+2.8893，r=0.9999，（n=6）。表明綠原酸在0.1732gg/ml～1.0392gg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，結(jié)果見表1、圖1。

1.4.1精密度考察

將4號(hào)供試品溶液按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣量20μL，測(cè)定峰面積，結(jié)果見表，RSD=1.62%（n=6），表明精密度良好。如表2所示。

1.4.2重現(xiàn)性考察

精密稱取6份同一樣品（4號(hào)），各約0.25g，按上述供試品溶液的制備方法平行制備6份供試品溶液，再上述色譜條件測(cè)定，進(jìn)樣體積為20μL，得出綠原酸峰面積的RSD=2.10%（n=6），表明重現(xiàn)性良好，結(jié)果見表3。

1.4.3穩(wěn)定性考察

精密稱取4號(hào)供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定，設(shè)定進(jìn)樣體積為20μl，

每隔2h進(jìn)樣1次，共進(jìn)6次，測(cè)定峰面積，結(jié)果見表，RSD=2.82%（n=6），表明樣品溶液在lOh內(nèi)穩(wěn)定。如表4所示。2加樣回收實(shí)驗(yàn)

取6份干燥至恒重的己知含量的忍冬葉粉末（4號(hào)）約0.25g，精密稱定后，分別加入綠原酸對(duì)照品約2mg，按上述條件進(jìn)行供試品溶液的制備；按上述色譜條件測(cè)定進(jìn)行測(cè)定含量，按公式回收率一（測(cè)得量一樣品中的含量）/（加入對(duì)照品的量）×100%計(jì)算，結(jié)果表明平均回收率為98.48%，RSD=2.65%（見表5）。

2.1樣品含量測(cè)定

按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，進(jìn)樣量為20μl，測(cè)定不同樣品忍冬葉中綠原酸的百分含量。

2.2數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

將測(cè)得數(shù)據(jù)采用SAS統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行顯著性分析。

3結(jié)果與分析

本次實(shí)驗(yàn)選用了15批忍冬葉樣品，每個(gè)樣品測(cè)得了6個(gè)含量，不同樣品忍冬葉中綠原酸的平均含量（以干燥品計(jì)算）以及經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理的結(jié)果見表6。

研究結(jié)果顯示，15個(gè)樣品中綠原酸含量為0.65～2.56%，樣品間表現(xiàn)出較大的差異。10號(hào)樣品葉中綠原酸的含量最高，為2.51±0.048%，并與其它樣品存在顯著性差異；樣品6、2、14、1、5、9、3中綠原酸含量為1.48～2.30%，屬于含量較高的樣品，己經(jīng)達(dá)到了《中國(guó)藥典》規(guī)定的金銀花中綠原酸的含量，且與其它樣品存在顯著性差異；樣品13、7、8、12、15、4葉中綠原酸含量為0.83～1.38%，屬含量較低的樣品，并與其它樣品比較具有顯著性差=異；樣品11號(hào)葉中綠原酸含量最低，僅為0.67+0.018%，亦與其他樣品存在顯著性差異。

（通訊作者：張麗艷）