小議PCR技術(shù)在中藥鑒定中的應(yīng)用

張曉哲

摘 要：中藥是我國(guó)傳統(tǒng)的醫(yī)用藥物，古人治病都離不開中藥，中藥在古代乃至現(xiàn)代，都起著不可替代的作用。中藥種類較多，有人工種植的，也有野生的，同一種中藥，在不同的種植產(chǎn)地或者生長(zhǎng)模式下，質(zhì)量和藥效就存在較大的差異。中藥鑒定一直以來就是一個(gè)難題，一方面源于中藥市場(chǎng)較為混亂，弄虛作假，以次充好的情況經(jīng)常發(fā)生，外行人很難辨別出中藥的品質(zhì)，本文從中藥鑒定出發(fā)，分析PCR技術(shù)在中藥鑒定中的應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：PCR技術(shù) 中藥鑒定 應(yīng)用

中圖分類號(hào)：Q55 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-3791（2018）03（b）-0213-02

1 相關(guān)概述

1.1 中藥鑒定學(xué)

中藥鑒定學(xué)主要是對(duì)中藥的質(zhì)量和品種進(jìn)行鑒定和研究，制定出中藥質(zhì)量鑒定標(biāo)準(zhǔn)，尋找新的藥源。中藥鑒定的五大方法：性狀鑒定法、基原鑒定法、生物鑒定法、理化鑒定法、顯微鑒定法。

1.2 PCR技術(shù)

PCR技術(shù)屬于生物鑒定法的一種，PCR技術(shù)又叫聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)，可以實(shí)現(xiàn)特定DNA片段的擴(kuò)增。PCR技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)在于，可以實(shí)現(xiàn)微量DNA的增加，該項(xiàng)技術(shù)不僅適用于研究歷史人物殘骸和古生物化石，還可以用于中藥的檢驗(yàn)，只要從中藥中分離出NDA，便可以利用PCR技術(shù)增大分離出來的DNA，用于對(duì)比。

2 鑒定中藥真?zhèn)蝺?yōu)劣的必要性

中藥用于疾病治療，好品質(zhì)的中藥可以實(shí)現(xiàn)治病救人的目的，品質(zhì)差的中藥不僅藥效較低，還會(huì)對(duì)人的身體有害。中藥中假藥和劣藥的存在，會(huì)影響藥品生產(chǎn)、科研結(jié)果，導(dǎo)致臨床治療失敗，不僅帶來經(jīng)濟(jì)損失，還會(huì)誤病害人。因此，對(duì)中藥進(jìn)行鑒定，區(qū)分其中的“真?zhèn)蝺?yōu)劣”，也就是中藥的真假以及中藥質(zhì)量的好壞，很有必要。當(dāng)前中藥真?zhèn)蔚谋鎰e依舊是個(gè)難題，中藥中經(jīng)常出現(xiàn)一些混品、偽品、摻偽品的行為，究其原因主要有：

首先，人為失誤。出現(xiàn)誤種、誤采、誤收、誤售、誤用的行為。如將藏邊大黃、河套大黃誤種為大黃；將風(fēng)寒草（聚花過路黃）誤采為金錢草（過路黃）；市場(chǎng)上將十字花科芫菁的種子，冒充菟絲子；用絲石竹的根冒充桔梗；用參薯的塊莖冒充山藥等。其次，名稱、外形、基原相近的中藥品種容易出現(xiàn)混亂。以防己商品為例，種類繁多，廣防己、粉防己、木防己、漢防己，名稱相近，容易弄混。最后，人為故意作假，以假充真。受到經(jīng)濟(jì)利益的影響，中藥市場(chǎng)出現(xiàn)造假的行為，例如：將銀環(huán)蛇縱剖成條狀，接上小蛇頭盤，冒充金錢白花蛇，也有用帶有環(huán)紋的幼蛇來冒充金錢白花蛇，也有使用白色油漆的方式，畫出環(huán)紋，冒充金錢白花蛇；部分商家將馬鈴薯片進(jìn)行加工，用來冒充白附片；使用其他動(dòng)物的皮熬膠，冒充阿膠。

中藥的質(zhì)量直接關(guān)系到，用藥的藥量以及用藥效果，質(zhì)量是中藥的生命。因此，中藥在明確品種后，必須注意對(duì)中藥的檢查，辨別中藥的真假優(yōu)劣，對(duì)于不符合用藥標(biāo)準(zhǔn)的中藥，不能使用。

3 基于PCR技術(shù)的分子生物鑒定技術(shù)

3.1 PCR-RFLP技術(shù)

PCR-RFLP技術(shù)，又叫聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性內(nèi)切酶長(zhǎng)度多態(tài)性技術(shù)，可以對(duì)中藥的品種進(jìn)行鑒別，還可以對(duì)中藥的摻偽程度進(jìn)行監(jiān)測(cè)。例如：運(yùn)用PCR-RFLP技術(shù)，可以對(duì)川貝母進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)樣品中存在的摻偽比例，這種半定量的檢測(cè)方法，可以避免一些商戶，在川貝母中摻入偽品。具體測(cè)試方法如下：首先，提取NDA，按照體積比，從川貝母粉中進(jìn)行DNA的提取，同不同比例偽品的NDA進(jìn)行對(duì)比。其次，利用PCR-RFLP技術(shù)，在凝膠電泳后通過軟件分析條帶強(qiáng)弱來計(jì)算摻偽量。

3.2 RAPD技術(shù)

RAPD技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)對(duì)基因組的動(dòng)態(tài)性分析，該項(xiàng)技術(shù)有著操作快捷、簡(jiǎn)單、靈敏的特點(diǎn)，RAPD技術(shù)用于中藥鑒定，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)中藥生藥材，例如：名貴生藥材、動(dòng)物類生藥材進(jìn)行檢測(cè)，查找其中的混淆品和代用品。RAPD技術(shù)存在穩(wěn)定性和重復(fù)性較差的特點(diǎn)，導(dǎo)致其應(yīng)用不廣泛。

3.3 位點(diǎn)特異性PCR技術(shù)

位點(diǎn)特異性PCR技術(shù)是基于SNP位點(diǎn)的基因分型方法，該技術(shù)用于中藥鑒定，可以通過PCR反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)中藥真?zhèn)蔚蔫b別，有著快速、操作簡(jiǎn)單的特點(diǎn)，可以很好地適用于中藥材的鑒別。以何首烏的檢測(cè)為例，位點(diǎn)特異性PCR技術(shù)，可以對(duì)何首烏、接近何首烏的混淆品進(jìn)行ITS2序列的變異性分析，尋找變異位點(diǎn)，依靠特異性引物的設(shè)計(jì)，確定PCR的反應(yīng)條件，使用平板凝膠電泳的方法，用毛細(xì)管凝膠電泳檢測(cè)特異性PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，實(shí)現(xiàn)對(duì)何首烏的PCE分子鑒定。

3.4 ISSR技術(shù)

ISSR技術(shù)（錨定簡(jiǎn)單序列重復(fù)技術(shù)），該項(xiàng)技術(shù)有著多態(tài)性高、重復(fù)性好的特點(diǎn)，是近年來，新發(fā)展起來的一種分子標(biāo)記技術(shù)，廣泛地應(yīng)用于中藥鑒定方面。ISSR技術(shù)，使用錨定的微衛(wèi)星DNA做為引物，在PCR技術(shù)中，錨定引物可以引起特定位點(diǎn)退火，從而使與錨定引物互補(bǔ)間隔不太大的重復(fù)序列間DNA片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增。在對(duì)中藥雞血藤進(jìn)行鑒定時(shí)，可以采用ISSR技術(shù)，具體措施如下：選擇5個(gè)ISSR的隨機(jī)引物，進(jìn)行雞血藤以及混偽品擴(kuò)增，可以看出擴(kuò)增出的DNA指紋圖譜，有著明顯的差異性。由此可以看出ISSR技術(shù)可以用于雞血藤及其混偽品的辨別。

4 PCR技術(shù)鑒定方法的不足之處

PCR技術(shù)雖然可以用于中藥的鑒定，但是依舊存在不足之處，例如：部分中藥可能存在次生代謝產(chǎn)物，這會(huì)影響到DNA的提取工作，經(jīng)過炮制的中藥同樣會(huì)影響到DNA的提取。分子生物檢測(cè)技術(shù)，由于分子存在看不到摸不著的特性，需要經(jīng)過大量的實(shí)驗(yàn)，來進(jìn)行鑒定方法的探索和優(yōu)化，需要測(cè)試人員具有專業(yè)的技術(shù)能力。部分中藥藥材，會(huì)受到產(chǎn)地、種植方法、栽培變異等條件的影響，影響分子標(biāo)記法穩(wěn)定性和重現(xiàn)性，需要對(duì)大量的中藥樣品進(jìn)行驗(yàn)證。中藥鑒定需要不斷尋找準(zhǔn)確、便捷、高效的鑒定方法，分子標(biāo)記鑒別方法，雖然有著一定的科學(xué)性，但是需要經(jīng)過DNA提取、PCR擴(kuò)展、電泳檢測(cè)，相比其他鑒定方法，更加耗時(shí)，需要進(jìn)一步完善。

5 結(jié)語(yǔ)

綜上所述，從古至今，中藥在治療中都有著很好的應(yīng)用，中藥的種類繁多，存在名稱相似或者外形相似的情況，加上以次充好、假冒偽劣情況的存在，做好中藥鑒定很有必要。在中藥鑒定方法中，生物鑒定法是一種重要的鑒定方式。基于PCR技術(shù)分子生物鑒定技術(shù)可以很好地用于中藥的鑒定，鑒定中藥的品質(zhì)以及其中的摻偽比例。常見的分子生物鑒定技術(shù)有：PCR-RFLP技術(shù)、RAPD技術(shù)、位點(diǎn)特異性PCR技術(shù)和ISSR技術(shù)。相較于其他鑒定方法，PCR技術(shù)鑒定方式，耗費(fèi)時(shí)間較長(zhǎng)，依舊需要不斷完善，保證鑒定的快捷、高效和準(zhǔn)確。

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