難治性癲癇患兒血清谷氨酸脫羧酶抗體、神經節苷脂抗體水平變化

幸黔魯，白國輝

(1遵義醫學院附屬醫院，貴州遵義 563000；2貴州省普通高校口腔疾病研究重點實驗室)

癲癇是指可持續存在的能夠在未來引起癲癇發作的一類腦部疾患，并可引發神經生物學和認知改變，以及心理學及社會功能的變化[1]。難治性癲癇(RE)是癲癇的一種類型，2010年國際抗癲癇聯盟將RE的定義制定為選擇2種正確且耐受性強的抗癲癇藥物經過足夠療程和劑量加以治療依舊無法控制發作的一類癲癇[2]。小兒RE是臨床常見的一種疾病類型，此病發作頻率較高，發作類型較為復雜，且病因較多，發病機制仍然不甚明晰，但臨床大都傾向于認為RE可能與神經免疫機制有關。谷氨酸脫羧酶抗體(GADA)首次發現于1型糖尿病患者機體，被認為與小腦共濟失調和邊緣性腦炎等遭受免疫攻擊的神經類疾病發病機制密切相關[3]。神經節苷脂抗體(GM1-A)是一種鞘磷脂，在神經系統中分布廣泛，其在神經細胞的發育過程中能夠參與細胞分化和分型以及生長等過程，對于維持神經細胞的常規生理功能具有重要的意義[4]。本研究觀察了RE患兒血清GADA、GM1-A水平變化，旨在探討RE患兒發病與GADA、GM1-A的關系，為以后的靶向治療尋找新的靶點。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2016年9月～2017年9月遵義醫學院附屬醫院收治的RE患兒60例(觀察組)，男28例，女32例；年齡1～14(7.49±3.27)歲；病程1～6(4.21±1.33)a；發病年齡1～2(1.07±0.48)歲。癲癇患兒40例(對照組)，男17例，女23例；年齡1～15(8.21±3.48)歲；病程1～8(4.46±1.57)a；發病年齡1～4(3.32±0.66)歲。納入標準：①患兒均符合國際抗癲癇聯盟關于癲癇的有關診斷標準[5]；②經頭顱CT或MRI確診；③年齡≤16歲；④患兒的家長對于此次研究已經知情同意，并已簽署了同意書。排除標準：①其他種類的顱內占位型病變或遲發型腦病者；②醫源性因素導致的RE者；③有免疫系統類疾病或感染性疾病者；④有血液疾病者；⑤有惡性腫瘤者。本研究已得到醫院倫理委員會評審通過且患者知情同意。

1.2 血清GADA、GM1-A檢測 取患兒晨起空腹靜脈血4 mL，以3 000 r/min離心15 min，取血清并分為2份，每份0.5 mL，然后放入-80 ℃的冰箱中保存待測。采用ELISA法檢測血清GADA、GM1-A，檢測450 nm波長下樣品的吸光度值，操作需嚴格遵照說明書中描述的步驟逐步實施。獲得吸光度值后，建立二維坐標系，將X軸作為標準品濃度，將Y軸作為標準品所對應吸光度值，將樣品的吸光度值分別代入方程式，算出樣品濃度，而后乘以稀釋倍數，即可得樣品實際濃度。GADA：Y=2.880 8X2+4.392 9X-1.759 9，GM1-A：Y=378.08X2+0.147 4。

2 結果

2.1 兩組血清GADA、GM1-A水平比較 血清GADA、GM1-A水平見表1。

表1 兩組血清GADA、GM1-A水平比較

注：與對照組比較，*P<0.05。

2.2 血清GADA、GM1-A對RE患兒的診斷價值 結果見表2。由表2可知，AUC為0.842，截斷值為0.95 mmol/L，GADA診斷RE患兒的靈敏度和特異度均超過80%；AUC為0.760，截斷值為4.35 ng/mL，GM1-A診斷RE患兒的靈敏度和特異度均超過70%。

表2 血清GADA、GM1-A對RE患兒的診斷價值

3 討論

癲癇是發生于神經系統的一種常見疾病，在人群中的發病率是0.6%～1.1%，對人類生存健康造成了較大的危害[6～8]。關于癲癇的治療，藥物療法是首選方案，但據統計60%左右的患者常規服用抗癲癇類藥物仍然無法避免癲癇的發作，致使部分患者甚至自行停用藥物[9～11]。RE是指通過抗癲癇類藥物進行規范治療后不可終止癲癇的發作，亦或是已被臨床證實屬于難治的癲癇以及癲癇綜合征。我國每年的新發癲癇病例中，大約有1/4的比例屬于RE，加之RE存在慢性、頑固性以及藥物抵抗性和藥物的不敏感性等特點，對其進行早期診斷顯得十分必要[12～14]。而對于RE患兒的治療，由于幼兒機體排毒能力較弱，可能存在較強的藥物毒性反應，這就需要更及時的充分掌握患兒實際病情，尋找敏感而有效的血清生物學指標進行監測對于患兒的治療及預后具有十分重要的意義。

本研究顯示，觀察組血清GADA、GM1-A水平高于對照組，分析原因可能與GADA、GM1-A在RE患兒腦部的作用機制有關。谷氨酸脫羧酶作為人體中γ-氨基丁酸所合成的一種限速酶，其主要存在于神經系統中，并能夠催化L-谷氨酸成γ-氨基丁酸[15～17]。而在神經系統中大約含有40%的突觸屬于γ-氨基丁酸能突觸，其作為腦部的一種抑制型神經遞質，當機體中GADA高表達后，會抑制γ-氨基丁酸有關受體功能，導致神經系統的興奮性變大，最終誘發癲癇發作，而在RE患兒中，此種過程更加明顯[18～20]。神經節苷酯作為可與唾液酸基相結合的一種鞘磷脂，也是周圍神經系統和脊髓中神經細胞膜以及軸突膜的一個組成部分，當各類因素致使神經節苷脂的抗原物質發生暴露之后，可隨之激活機體的免疫系統，進而使得機體中的淋巴系統形成GM1-A，而GM1-A可將GM1作為攻擊抗原，并在補體和免疫反應的作用下損傷機體的神經細胞，最終引發RE。因此，RE患兒的發病與GM1-A、GADA水平的升高具有十分緊密的關聯。文獻[21～23]報道也指出，GM1-A和GADA水平的升高可能會導致機體的腦部神經調節作用產生一定程度的異常，并通過腦網絡及腦區間功能的變化而逐漸誘發RE。

本研究還顯示，血清GADA診斷RE患兒的靈敏度為80.28%、特異度為80.30%，血清GM1-A診斷RE患兒的靈敏度為73.31%、特異度為71.12%。證實GADA和GM1-A對于RE患兒的診斷價值較好，臨床上可將二者用于RE患兒的診治評估過程中[24,25]。

總之，RE患兒血清GADA、GM1-A水平升高，其發病可能與兩指標水平升高有關。目前，臨床上已有針對RE疾病的明確診斷標準，因此可嘗試額外增加針對GM1-A、GADA水平的監測，從而更加全面地研判患兒的病情及預后，并有助于更加科學而準確地對患兒實施治療。