血管性眩暈患者血清Nε-羧甲基賴氨酸、氧化低密度脂蛋白水平變化及其意義

張耀元，王立坤，常青，張繼超，龔姍姍，鄒玉安

(河北北方學院附屬第一醫院，河北張家口 075000)

血管性眩暈是血管病變導致的眩暈，占眩暈病因的3%～7%，其病變主要涉及椎-基動脈系統，包括前庭動脈前支、小腦前下動脈、迷路動脈(內聽動脈)、椎動脈、基底動脈等，該處血管形態和功能異常，即在相應的灌注區產生供血不足等一系列的臨床癥狀，主要以眩暈及頭暈為主[1，2]。動脈粥樣硬化(AS)是血管性眩暈血管病變最重要的原因，指動脈壁的一種非炎性、增生性、退行性的改變。目前，對于血管性眩暈的診斷和預后監測多借助于影像學檢查，缺乏有效的、特異度較高的血清學標志物支持。研究[3,4]證實，糖基化終末產物(AGEs)參與心腦血管粥樣硬化的病理生理過程，Nε-羧甲基賴氨酸(CML)是AGEs的重要活性成分，以往關于CML的研究多集中于內分泌系統和代謝性疾病方面。隨著研究的深入，發現CML在心血管病變中亦有重要作用[5]。氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)是LDL發生脂質氧化修飾而形成，其在AS病灶中呈高表達，而在正常動脈中無表達或低表達，且其水平的高低與AS病變發展密切相關。本研究觀察了血管性眩暈患者血清CML、ox-LDL水平變化，并探討其意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取河北北方學院附屬第一醫院2016年1月～2017年6月收治的血管性眩暈患者55例(血管性眩暈組)，男25例、女30例，年齡(63.42±10.22)歲，BMI(21.95±2.56)kg/m2；非血管性眩暈患者40例(非血管性眩暈組)，男18例、女22例，年齡(62.41±12.58)歲，BMI(21.55±2.81)kg/m2。血管性眩暈組納入標準[6,7]：①發病在1周之內；②主訴為頭暈或眩暈；③頭部CT、CTA、MRI、MRA和頸動脈彩超提示血管病變包括顱內外動脈狹窄、閉塞、血管迂曲、發育異常、粗細不均或血管舒縮紊亂等；④有吸煙、高血脂、高血糖等血管病變高危因素。非血管性眩暈組納入標準：①發病在1周之內；②血管評估無明星異常；③無神經系統缺損癥征；④確診為良性陣發性位置性眩暈、梅尼埃病、前庭神經炎等非血管疾病。血管性眩暈組和非血管性眩暈組排除標準：①發病2周前嚴重的感染病史；②近期服用抗凝及抗血小板聚集藥物；③伴嚴重的冠心病、肺心病、免疫性疾病、內分泌疾?。虎車乐氐母文I功能異常；⑤惡性腫瘤患者。另選40例既往未發生眩暈的健康體檢者作對照(健康對照組)，男20例、女20例，年齡(65.43±7.15)歲，BMI(22.04±2.13)kg/m2。本實驗按前瞻性、對照臨床研究方法設計，經院倫理委員會批準，受試者均簽署知情同意書。

1.2 血清CML、ox-LDL檢測方法 采用ELISA法檢測。采集所有入選對象清晨空腹靜脈血12 mL，以3 000 r/min離心20 min，取上清，分裝后置于-80 ℃冰箱凍存備用。樣本孔中加入含CML、ox-LDL的樣本，后加入辣根過氧化物酶標記的檢測抗體，封孔，37 ℃恒溫溫育，每孔復加入底物，避光溫育，在450 nm波長處測定各孔的吸光度值(OD值)，嚴格按照試劑盒步驟說明書進行操作，應用美國Bio-rad酶標儀，于450 nm波長處測定各孔的OD值，繪制標準曲線，檢測各樣本中CML、ox-LDL。

1.3 血清CML、ox-LDL診斷血管性眩暈的效能分析 繪制血清CML、ox-LDL單獨及兩者聯合診斷血管性眩暈的ROC曲線，分別計算曲線下面積，采用最大約登指數法計算CML、ox-LDL診斷血管性眩暈的截斷值，并計算各自的靈敏度及特異度。

2 結果

2.1 各組血清CML、ox-LDL水平比較 血清CML、ox-LDL水平見表1。

表1 各組血清CML、ox-LDL水平比較

注：與非血管性眩暈組、健康對照組比較，*P<0.05。

2.2 血管性眩暈組血清CML與ox-LDL的相關性 血管性眩暈組患者血清CML與ox-LDL呈明顯正相關(r=0.455，P<0.05)。

2.3 血清CML、ox-LDL單獨及聯合檢測診斷血管性眩暈的效能 血清CML、ox-LDL檢測診斷血管性眩暈的ROC曲線下面積分別為0.821和0.701，聯合檢測診斷血管性眩暈ROC曲線下面積為0.938，約登指數最大時血清CML、ox-LDL水平截斷值分別為475.9 ng/mL和154.3 μg/mL，此時血清CML水平檢測診斷此病的靈敏度和特異度分別為69.5%、70.1%，血清ox-LDL水平檢測診斷此病的靈敏度和特異度分別為58.3%、65.1%，兩者聯合檢測診斷此病的靈敏度和特異度分別為88.3%、84.5%。兩者聯合檢測診斷血管性眩暈的ROC曲線下面積、靈敏度和特異度均明顯高于血清CML、ox-LDL單獨檢測(P均<0.05)，詳見圖1。

圖1 血清CML、ox-LDL診斷血管性眩暈的ROC

3 討論

血管性眩暈是以椎-基底動脈系統病變為主的多種腦血管病變導致前庭系統(前庭器官、前庭神經及腦干的諸前庭核)供血不足，而引起的以眩暈為主并伴惡心、嘔吐等癥狀的神經系統疾病。以往研究證實，AS引發的血流動力學異常是血管性眩暈主要的病因。文獻[8,9]報道，氧化應激、血管內皮細胞損傷、各種炎性因子異常表達、細胞外基質大量降解均參與了AS的形成，降低了血管彈性，最終導致腦缺血的發生。

近年來，隨著經顱多普勒超聲、頸動脈彩超、CT、CTA、MRI(MRA)、DSA等神經影像學技術的不斷發展和進步，對于血管性眩暈的診斷，尤其是對病變血管結構和功能的評估有了很大提高，有效的指導了臨床。但對于血管性眩暈的早期診斷，目前仍缺乏靈敏度、特異度高的血清學標記物支持。

CML是首個在機體內從AGEs中分離出來重要活性成分，具有交聯結構，但無熒光特性[10]。CML通過與細胞膜受體結合，影響細胞功能，如巨噬細胞、血管內皮細胞、系膜細胞等，參與組織老化及信號轉導等重要過程，在AS、腎病、冠心病、糖尿病等病變過程中發揮重要作用[11～15]。華強等[16]研究證實，在糖尿病早期患者機體內已啟動蛋白質等的非酶糖化反應，并誘導機體產生氧化應激，從而誘導AS等并發癥的形成，若初診時即開始應用有效藥物清除AGEs或CML，可有效預防和延緩糖尿病慢性并發癥的發生發展。Kizer等[17]發現，CML與急性冠脈綜合征(ACS)有密切相關性，其水平可能反映ACS病變嚴重程度。此外CML能誘導單核巨噬細胞過度分泌生長促進因子，并不斷吞噬ox-LDL，同時向內皮下遷移，導致血管內皮細胞增厚、增生，促進AS病變。Wang等[18]認為，CML/RAGE軸可能通過誘導巨噬細胞凋亡及主動脈平滑肌細胞向成骨細胞分化的機制在糖尿病動脈粥樣硬化性鈣化中發揮重要作用。此外，CML還能與內皮細胞反應，直接改變細胞膜的滲透性，增加血漿蛋白的滲透性，最終引起血栓。

ox-LDL是LDL發生脂質氧化而形成，其僅特異度存在于動脈硬化病灶，而在正常動脈中無表達。ox-LDL能抑制血管內皮細胞的NO合成和釋放，降低血管舒張及彈性功能，誘導PECAM-1、sVCAM-1、sICAM-1等血管內皮黏附因子和MCP-1、CCL3L1、CXCL14等趨化因子的表達，抑制抗凝物質的產生，促進AS的形成[19,20]。ox-LDL通過誘導內皮細胞釋放IL-1、IL-6、TNF-β等多種細胞因子，從而導致血管斑塊破潰、血栓形成，加速AS病變向更為復合的病變發展[21]。ox-LDL還能被巨噬細胞吞噬形成泡沫細胞，后者不斷沉積形成脂質條紋，并損傷血管平滑肌細胞和內皮細胞，加速AS的形成[22]。此外ox-LDL還可通過與血小板表面黏附的各類脂質蛋白結合，激活血小板，促使血小板黏附、聚集，最終導致各種動脈粥樣硬化性疾病的發生[23]。因而，ox-LDL水平的高低與AS病變發展密切相關[24]。

本研究顯示，血管性眩暈組血清CML、ox-LDL水平高于非血管性眩暈組和健康組，且血清CML水平與ox-LDL呈正相關，即血清CML能誘導血ox-LDL表達的上調，因而考慮血清CML與ox-LDL協同參與了血管性眩暈的發生發展。研究[25]表明，CML通過抑制PI3K/Akt信號轉導通路，抑制巨噬細胞源性泡沫細胞向外遷移，導致泡沫細胞大量聚集，同時正反饋于ox-LDL，加速其被巨噬細胞吞噬，最終促進AS病變。本研究還顯示，血清CML、ox-LDL單獨和兩者聯合檢測的ROC曲線下面積均高于0.5，且兩者聯合檢測的特異度和靈敏度均明顯高于單獨檢測，因而表明兩者均可作為血管性眩暈診斷的血清學指標，但兩者聯合檢測更加準確。

總之，血管性眩暈患者血清CML、ox-LDL水平升高，檢測兩指標有助于此病的診斷，且兩者聯合檢測的診斷效能優于單獨檢測。