轉(zhuǎn)化生長因子-β1基因多態(tài)性與新疆地區(qū)維漢妊娠期糖尿病易感性的關(guān)系分析

米麗邦古麗·吾布里，馬 英，丁桂鳳，李曉紅

0 引言

妊娠期糖尿病(Gestational diabetes mellitus,GDM)為婦產(chǎn)科較常見妊娠期疾病，患者糖代謝一般正常，而在妊娠期才出現(xiàn)或發(fā)現(xiàn)糖代謝異常，以血糖升高為主要特征，該病發(fā)病率約為1%～14%[1]，在不同地區(qū)及民族差異較大，如北京地區(qū)[2]2013年下半年GDM發(fā)病率為19.7%，廣州地區(qū)[3]2013年下半年GDM發(fā)病率為18.4%，而關(guān)于新疆等西北地區(qū)GDM的調(diào)查尤其是該地區(qū)維漢族人群GDM發(fā)病特點(diǎn)及研究較少涉及[4]。TGF-β1為TGF-β家族成員，可調(diào)節(jié)機(jī)體生長、發(fā)育、炎性反應(yīng)、創(chuàng)傷修復(fù)及免疫等過程，在介導(dǎo)及維持抑制某些自身抗體的耐受性方面有重要作用，目前已有研究證實(shí)TGF-β1基因多態(tài)性與張家口漢族橋本甲狀腺炎、上海漢族人群2型糖尿病均有一定相關(guān)性，而其與GDM易感性研究較少[5-6]。本文以2014年6月至2017年12月新疆烏魯木齊市婦幼保健院收治的450例孕婦為研究對象，分析TGF-β1基因多態(tài)性與該地區(qū)維漢族人群GDM易感性的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對象與方法

1.1 對象 納入2014年6月至2017年12月于新疆烏魯木齊市婦幼保健院產(chǎn)檢的450例孕婦為研究對象，其中200例經(jīng)口服糖耐量篩查試驗(yàn)(OGTT)確診為GDM，250例OGTT正常。OGTT確診為GDM者納入GDM組(200例)，OGTT試驗(yàn)正常的健康孕婦納入對照組(250例)，GDM組年齡24～39歲，平均(31.2±3.4)歲；維族100例，漢族100例；孕周24～28周，平均(26.1±1.5)周；體重指數(shù)25～31 kg/m2，平均(28.1±1.4)kg/m2，對照組年齡25～38歲，平均(31.3±3.3)歲；維族100例，漢族150例；孕周25～28周，平均(26.2±1.4)周；體重指數(shù)26～30 kg/m2，平均(28.0±1.5)kg/m2，兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，有可比性。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：①GDM孕婦符合加拿大婦產(chǎn)科醫(yī)生協(xié)會(SOGC)制定的妊娠期糖尿病指南[7]，均孕24～28周，尚未接受飲食控制及胰島素治療；②GDM孕婦OGTT試驗(yàn)時(shí)空腹血糖≥5.1 mmol/L、餐后1 h血糖≥10.0 mmol/L、餐后2 h血糖≥8.5 mmol/L，三項(xiàng)中符合任意一項(xiàng)即可診斷為GDM；③所有患者均無嗜酒嗜好、重要臟器疾病，知情同意本研究并簽署知情同意書。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①孕前及妊娠期高血壓、腎臟、心臟與自身免疫性疾病等重要臟器疾病者；②全身急慢性感染或其他伴發(fā)疾病者；③孕前1周服用影響糖代謝藥物、激素類藥物或保健品。

1.3 方法 血樣采集：均于入院次日分管采集清晨空腹肘靜脈血4 ml(采血前夜22∶00以后禁食)，其中2 ml靜置凝固，分離血清后置于-20 ℃冰箱中凍存?zhèn)溆茫悦嘎?lián)免疫吸附試驗(yàn)測定TGF-β1水平，另2 ml行EDTA抗凝，高速離心后分離白細(xì)胞，采用德國Qiagen DNA提取試劑盒按照說明書進(jìn)行DNA提取，后置于-20 ℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

TGF-β1基因多態(tài)性檢測：采用晶美生物工程有限公司提供的Taq DNA聚合酶、pfu DNA聚合酶、dNTPs、DNA marker，美國PE公司提供的PE-9600 PCR儀。應(yīng)用Primer Preimer 5.0軟件設(shè)計(jì)TGF-β1各位點(diǎn)引物：①-509C/T：前引物5′-GTCGCAGGGTGTTGAGTGACAG-3′，后引物5′-AGGGGGGAACAGGACACCTTA-3′；②+869T/C：前引物5′-CTCCGGGCTGCGGCTGCAGC-3′，后引物5′-GGCCTCGATGCGCTTCCGCTTCA-3′；③+915G/C：前引物5′-TACTGGTGCTGACGCCGGGC

C-3′，后引物5′-CTTGGACAGGATCTGGCCGCGG-3′。設(shè)計(jì)PCR擴(kuò)增體系及循環(huán)體系，93 ℃預(yù)變性5 min，93 ℃變性40 s，56 ℃退火1 min，72 ℃延伸1 min；總體進(jìn)行35個(gè)循環(huán)，后72 ℃延伸5 min，PCR反應(yīng)體系：體積30 μl，內(nèi)含模板DNF 50 ng，上下游引物各40 pmol/L，KCl 50 mmol/L，MgCl21.5 mmol/L，dNTP 200 μmmol/L，Taq DNA聚合酶1 U。PCR產(chǎn)物20 g/L凝膠電泳分帶，確定基因型。

1.4 觀察指標(biāo) 比較GDM組、對照組TGF-β1水平；分析兩組TGF-β1基因型頻率及等位基因頻率；分析GDM組中維族、漢族患者TGF-β1基因型頻率及等位基因頻率。

2 結(jié)果

2.1 電泳結(jié)果 見圖1～圖3。

圖1 -509C/T位點(diǎn)基因型電泳結(jié)果

圖2 +869T/C位點(diǎn)基因型電泳結(jié)果

圖3 +915G/C位點(diǎn)基因型電泳結(jié)果

2.2 兩組患者TGF-β1水平比較 GDM組血清TGF-β1總體水平高于對照組(t=30.56，P<0.01)，且GDM組中維族患者TGF-β1也高于漢族患者(t=17.13，P<0.01)，對照組中維、漢族患者TGF-β1水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.44，P>0.05)。見表1。

表1 兩組患者TGF-β1水平比較(ng/L)

注：與對照組比較，*P<0.05；與漢族比較，#P<0.05

2.3 兩組患者TGF-β1基因型頻率及等位基因頻率比較 GDM組+869T/C基因位點(diǎn)的TT、TC、CC基因型頻率與對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，兩組-509C/T基因位點(diǎn)的CC、CT、TT基因型頻率及+915G/C位點(diǎn)的GG、GC、CC基因型頻率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；GDM組等位基因T頻率低于對照組，而等位基因C頻率高于對照組(P<0.01)。見表2、表3。

表2 兩組患者TGF-β1基因型頻率比較(例，%)

表3 兩組患者TGF-β1基因+869T/C位點(diǎn)等位基因頻率比較(頻數(shù)，%)

2.4 GDM組維族、漢族+869T/C位點(diǎn)基因型頻率及等位基因頻率比較 GDM組維族患者869T/C基因位點(diǎn)的TT、TC、CC基因型頻率、+869T/C等位基因(T、C)頻率與漢族患者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且維族等位基因T頻率低于漢族，等位基因C頻率高于漢族(P<0.01)。見表4、表5。

表4 GDM組維族、漢族+869T/C位點(diǎn)基因型頻率比較(例，%)

3 討論

GDM為孕期最常見的并發(fā)癥，隨著我國新標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施，各地診斷GDM的切點(diǎn)進(jìn)一步降低，診斷GDM并不困難，但確診后若未及時(shí)控制病情，可能增加剖宮產(chǎn)率，導(dǎo)致羊水過多、巨大兒、新生兒窒息、新生兒呼吸窘迫綜合征等不良結(jié)局，而新疆處于西北地區(qū)，地域、飲食環(huán)境影響對血糖控制更為不利，因此，分析其GDM發(fā)病機(jī)制有重要意義[8-11]。胰島素抵抗及胰島B細(xì)胞功能受損是導(dǎo)致GDM的2個(gè)重要病理基礎(chǔ)，Brunetti等[12]研究發(fā)現(xiàn)，許多細(xì)胞因子包括TGF-β1與胰島素抵抗及胰島細(xì)胞受損有關(guān)，因此，考慮TGF-β1可能參與GDM發(fā)生發(fā)展。TGF-β1為一種多功能細(xì)胞因子，屬于TGF-β超家族，人類TGF-β1基因定位于染色體19q13.1，由7個(gè)外顯子、6個(gè)內(nèi)含子組成，是分子量為25 kD的多肽二聚體，研究發(fā)現(xiàn)，TGF-β1至少存在9個(gè)SNP位點(diǎn)，其中-509C/T、+869T/C、+915G/C為研究較多的3個(gè)SNP位點(diǎn)，而關(guān)于TGF-β1基因多態(tài)性與GDM易感性的研究較少[13-15]。

表5 GDM組中維族、漢族+869T/C位點(diǎn)等位基因頻率比較(頻數(shù)，%)

本研究發(fā)現(xiàn)，GDM組血清TGF-β1水平高于對照組，且GDM組中維族患者TGF-β1水平較漢族患者高，可見TGF-β1在新疆地區(qū)GDM發(fā)病中起著重要作用，TGF-β1信號傳導(dǎo)通路參與調(diào)節(jié)并維持胚胎、成人胰島細(xì)胞功能，繼而參與血糖調(diào)控，調(diào)節(jié)胰島素敏感性，而新疆地處西北地區(qū)，是維吾爾族聚居地，受飲食、風(fēng)俗、文化、經(jīng)濟(jì)、地理?xiàng)l件等因素影響，使其在很多方面有一定遺傳性，飲食以牛羊肉等高蛋白高脂肪肉類為主，蔬菜較少，對血糖控制較為不利，因此，GDM孕婦中維族患者血糖控制水平可能更差，TGF-β1水平較漢族人群高。在基因多態(tài)性方面，本研究結(jié)果顯示，GDM組、對照組-509C/T基因位點(diǎn)的CC、CT、TT基因型頻率及+915G/C位點(diǎn)的GG、GC、CC基因型頻率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而GDM組、對照組+869T/C基因位點(diǎn)的TT、TC、CC基因型頻率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其與趙靜等[16]的研究結(jié)果相似，可見TGF-β1基因+869T/C基因位點(diǎn)的變異可能增加孕婦GDM危險(xiǎn)性，該位點(diǎn)基因多態(tài)性可能通過影響TGF-β1基因功能而改變胰島素基因的轉(zhuǎn)錄及胰島B細(xì)胞功能，導(dǎo)致GDM的發(fā)生。在GDM孕婦等位基因頻率方面，本研究中GDM組+869T/C等位基因T、C頻率與對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且GDM組等位基因T頻率低于對照組，而等位基因C頻率高于對照組。其與趙靜等[17]的研究結(jié)果相似，表明+869T/C位點(diǎn)T等位基因可能是GDM的保護(hù)因素，而C等位基因?yàn)槲ｋU(xiǎn)因素；Zhou等[18]通過Meta分析得出，亞洲人群中+869T/C基因多態(tài)性位點(diǎn)的CC基因型及所攜帶的T等位基因均與糖尿病腎病(DN)發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，+869T/C基因多態(tài)性位點(diǎn)的CC基因型是患DN的1個(gè)危險(xiǎn)因素，攜帶T等位基因是DN的保護(hù)因素。此外，本研究在既往研究基礎(chǔ)上對比了本地區(qū)維漢族GDM孕婦TGF-β1基因的+869T/C位點(diǎn)基因多態(tài)性，結(jié)果顯示，GDM組中維族患者869T/C基因位點(diǎn)的TT、TC、CC基因型頻率、等位基因(T、C)頻率與漢族患者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且維族人群等位基因T頻率低于漢族，等位基因C頻率則高于漢族，因此，新疆地區(qū)GDM中維漢族患者TGF-β1基因多態(tài)性也存在明顯差異，維族GDM群體可能因飲食、遺傳特性及高蛋白高脂肪飲食習(xí)慣而使胰島細(xì)胞損傷更嚴(yán)重，血糖控制更差[19]，TGF-β1基因的+869T/C位點(diǎn)所攜帶的C等位基因及C等位基因包含的基因型可能是維族GDM的易感基因，攜帶T基因及TT基因可能是該地區(qū)GDM的保護(hù)因素。

綜上所述，TGF-β1基因多態(tài)性與新疆地區(qū)維漢族人群GDM易感性密切相關(guān)，其中+869T/C位點(diǎn)的等位基因T是維族GDM的保護(hù)因素，而等位基因C為易感因素。