高脂誘導肥胖大鼠血清及內臟脂肪內脂素水平及與肥胖的相關性

孫 陽 陳樹春

(山東省泰山醫院內分泌科，山東 泰安 271000)

隨著人們飲食結構與生活方式的變化，肥胖癥的發病率逐年增加。在肥胖患者中，高血壓、冠心病、動脈粥樣硬化、2型糖尿病等發病率均升高，常并發睡眠呼吸暫停綜合征，肥胖給很多疾病的預防及治療增添負擔。脂肪組織是一個內分泌器官，它能分泌多種脂肪因子〔1〕。內脂素是近年來新發現的脂肪因子，它有多種生物學作用，與肥胖、胰島素抵抗(IR)的發生密切相關〔2，3〕。目前肥胖患者內脂素水平尚未完全明確，本研究旨在探討高脂飲食誘導的營養性肥胖大鼠血清內脂素水平及內臟脂肪內脂素蛋白表達的變化及內脂素與肥胖的相關性。

1 材料與方法

1.1建立肥胖大鼠模型 雄性Wistar大鼠22只，適應性喂養1 w后，隨機分為對照組(NC組)11只，高脂喂養組(HF組)11只。NC組予基礎飼料喂養(熱量組成：碳水化合物65.5%，蛋白質24.2%脂肪10.3%)，總熱量348 kcal/100 g；HF組以高脂飼料喂養(熱量組成：碳水化合物20%，蛋白質20%，脂肪60%)，總熱量502 kcal/100 g。高脂飼料由美國research diets公司提供。16 w后，測定兩組Lee指數、體重，判斷造模是否成功。Lee指數=BW(g)1/3×1 000/體長(cm)。

1.2血清學指標檢測 采用葡萄糖氧化酶法，用Roche公司羅康全快速血糖測定儀檢測空腹血糖；血脂的測定：用酶法檢測膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)，采用美國產Beckman X20自動生化分析儀；血清空腹胰島素，內脂素的測定采用酶聯免疫法。

1.3內臟脂肪組織內脂素蛋白表達 提取內臟脂肪的組織蛋白，檢測總蛋白含量。分別配制10%分離膠與5%濃縮膠。灌膠在1.5 mm厚的電泳板內。每孔上樣60 μg蛋白，其中一上樣孔加入預染蛋白10 μl。90 V穩壓電泳，等溴酚藍進入分離膠后，換用120 V穩壓電泳，溴酚藍前緣移動到凝膠底部時，取出凝膠。轉移電流250 mA，轉膜60 min。轉膜結束后用5%脫脂奶粉封閉2 h。兔抗大鼠內脂素多抗一抗封閉，在4℃冰箱過夜。后用山羊抗兔IgG二抗封閉2 h，用化學發光法顯色。

1.4統計學方法 應用SPSS13.0統計軟件，計量數據正態方差齊資料組間比較用t檢驗，正態方差不齊資料采用秩和檢驗，相關性分析采用Pearson分析。

2 結 果

2.1兩組各指標對比 HF組Lee指數、體重、內臟脂肪含量、血清內脂素、空腹血糖、空腹胰島素、穩態模型(HOMA)-IR、TC、TG均顯著高于對照組(P<0.05)。見表1。HF組內臟脂肪內脂素蛋白表達水平(0.93±0.16)顯著高于NC組(0.51±0.03)(P<0.05)。

表1 兩組各指標數據

與NC組比較：1)P<0.05，2)P<0.01

2.2相關性分析 血清內脂素與HOMA-IR、Lee指數、內臟脂肪含量呈正相關(r=0.877，P<0.01;r=0.608，P<0.01;r=0.716，P<0.01)。內臟脂肪內脂素與HOMA-IR、Lee指數、內臟脂肪含量呈正相關(r=0.571，P<0.01;r=0.579，P<0.01;r=0.603，P<0.01)。

3 討 論

肥胖可引起多種代謝紊亂，還可導致多種脂肪因子分泌異常〔4～7〕。內脂素有多種生物學作用和胰島素樣作用，還有促進脂肪的合成與聚集的作用。研究表明〔8～12〕，肥胖患者血清內脂素水平升高。內臟脂肪含量越高，表明內臟脂肪的堆積越多。研究發現〔13〕血漿內脂素作為一項獨立變量與體質量指數呈正相關。本實驗動物模型結果與以往研究相一致。這均提示內脂素與肥胖密切相關，尤其是與內臟脂肪的異常堆積相關。但是肥胖大鼠內脂素升高的原因還不明確。分析肥胖大鼠內脂素血清水平及蛋白表達水平的升高可能原因：(1)內脂素是由脂肪細胞分泌的，肥胖大鼠內臟脂肪含量增多，內脂素的分泌水平升高。(2)有研究發現，從前脂肪細胞分化成為脂肪細胞，內脂素表達升高，內脂素重組蛋白可以上調豬脂肪細胞過氧化物酶體增殖物激活受體(PPAR)γ mRNA 表達并促進脂質積累〔14〕。這提示內脂素參與脂肪細胞周期的調節，在脂肪細胞分化、脂質積累中發揮一定的作用，如此循環，加重內臟性肥胖。(3)脂肪組織甘油水解酶(ATGL)、激素敏感性脂肪酶(HSL)是脂肪分解的限速酶。脂肪組織甘油水解酶是TG水解形成二酰甘油和游離脂肪酸的限速酶，而是甘油二酯水解的限速酶。二者都是 PPARα 的靶基因。在內脂素基因表達抑制的脂肪細胞中，HSL、ATGL mRNA 的表達降低，表明 內脂素對脂肪分解有調控作用〔15～17〕。本實驗中肥胖大鼠中內脂素水平升高可能使ATGL、HSL表達水平升高，脂肪分解增強。這可能是肥胖大鼠發生的代償性機制。本研究結果提示內脂素與IR密切相關。但是目前內脂素是IR的因還是果，觀點還不統一。有研究〔18〕發現，網膜脂肪組織比腸系膜脂肪組織有較高的內脂素蛋白濃度。此外，內脂素蛋白濃度和網膜脂肪組織基因表達水平與HOMA-IR呈正相關。糖尿病患者比非糖尿病和糖尿病前期組有顯著較高的內脂素蛋白濃度。可能原因是內脂素有類胰島素樣作用。由于糖尿病患者的糖耐量受損，從而誘發網膜脂肪組織分泌內脂素，彌補IR。總的來說，這些結果提示內脂素網膜脂肪組織可能在IR中發揮重要作用。也有研究〔19〕表明，肥胖可使M1型巨噬細胞遷移到脂肪組織，導致慢性炎癥。并使脂肪組織分泌炎性細胞因子和趨化因子，如白細胞介素(IL)-1、IL-6、腫瘤壞死因子(TNF)-α、趨化因子CX3C、CCL2、CCL5、CCL26等，使脂肪因子分泌異常，如脂聯素、內脂素等。在多種細胞因子的作用下，機體出現IR。肥胖大鼠組內脂素水平與HOMA-IR 呈正相關，但是內脂素與IR的具體因果關系還需要深入研究。