生骨密骨方對骨質疏松大鼠血清細胞因子水平的影響

常波倫 ，柴 儀 △，李 倩 ，楊家祥 ，劉爍煒

（1．河北省中醫院，河北 石家莊 050011； 2．河北友愛醫院，河北 石家莊 050030）

骨質疏松（osteoporosis，OP）是臨床常見的一種全身骨代謝疾病，具有骨量減少及骨組織微結構退變的特征，可伴隨骨折和骨脆性增加[1]。隨著人口老齡化的到來，OP患者逐漸增多，已成為全球的健康問題。目前防治OP的藥物選擇趨勢是開發傳統中草藥合成制劑。河北省中醫院自制中藥制劑生骨密骨方在防治OP患者臨床中有良好療效，但其作用機制分析尚缺乏研究[2]。原發性OP癥主要發生在老年人群中，中老年絕經后婦女最多見。近年來，隨著對OP發病機制的深入研究，發現細胞因子如腫瘤壞死因子（TNF）、白細胞介素（IL）等分泌量與OP的形成關系緊密，因此眾多學者將OP的研究重點轉移到細胞因子上[3]。本研究中以去卵巢OP大鼠為研究對象，探討中藥生骨密骨方對OP大鼠模型血清細胞因子水平的影響。現報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器、試藥與動物

7170A型生化分析儀（日本日立）；Mettler Toled AL104型天平（中國上海升隆電子科技有限公司）。戊酸雌二醇片（拜耳醫藥保健有限公司廣州分公司，批號為222A，規格為 50 μg/kg）；生骨密骨方組方為熟地黃、山茱萸、淫羊藿、杜仲、菟絲子、雞血藤、丹參、續斷、鹿角膠、骨碎補、當歸、川牛膝、木瓜、獨活、水蛭、桑螵蛸、稻芽、飴糖、炙甘草，其水煎濃縮液1 mL含生藥1．19 g；試劑盒購自上海勁馬生物科技公司（批號為201402435）。試驗動物選擇6個月齡健康清潔級雌性SD大鼠48只，體質量為（256．6 ±35．8）g，由河北醫科大學實驗動物中心提供，許可證號為SCXK（冀）2013-1-003，本試驗符合動物倫理學標準。

1.2 方法

取6個月齡健康清潔級雌性SD大鼠48只，采用戊巴比妥鈉（30 mg/kg）腹腔麻醉，下腹部正中切口作雙側卵巢摘除。術后予以肌肉注射青霉素80萬U/只，連續3 d，每天1次，預防傷口感染，術后密切觀察，每周測量體質量，3周后大鼠生長良好，隨機分為對照組（A組）、雌二醇（E2）組（B 組）、中藥組（C 組），每組 16 只。B組給予戊酸雌二醇片灌胃，C組給予生骨密骨方水煎濃縮液（每1 mL含生藥1．19 g），A組給予等量生理鹽水，連續灌服12周。

1.3 檢測指標

試驗結束后，處死大鼠，取子宮標本，用天平稱取濕重，計算子宮指數。取血清進行生化指標檢測，按試劑盒說明書進行，包括E2，TNF-α，IL-6及胰島素樣生長因子（IGF）-1。

1.4 統計學處理

2 結果

2.1 子宮指數

成功建模后，3組大鼠體質量差異不明顯。治療后，B 組大鼠子宮指數為（112．85±22．63）mg/20 g，與 C 組的（114．92 ±21．55）mg/20 g 無顯著差異（t=0．320，P=0．751>0．05）；B 組及 C 組大鼠子宮指數均高于A 組大鼠的（86．45 ±19．62）mg/20 g（t=7．154，6．592，P＜0．01）。

2.1 實驗室指標

結果見表1。C組大鼠血清中E2和IGF-1均顯著高于 A 組大鼠（t=7．693，12．853，P＜0．01），與 B 組大鼠無明顯差異（t=0．296，1．251，P=0．769，0．221>0．05）。C組大鼠血清中IL-6，TNF-α均顯著低于A組大鼠（t=10．729，11．036，P＜0．01），與 B 組大鼠無明顯差異（t=0．953，1．569，P=0．348，0．127>0．05）。

3 討論

OP的特征包括骨吸收增加，骨量減少，骨脆性增加，骨顯微結構退化，臨床易發生骨折，是老年臨床常見疾病。隨著臨床OP患者的增多，有效防治OP藥物的應用開發成為熱點[4]。化學合成藥物均有一定不良反應，人們把傳統中草藥合成制劑作為首選[5]。傳統單味中藥如淫羊藿中總黃酮能改善骨組織的顯微結構，調節骨形成與骨破壞的紊亂狀態，進而有效對抗骨質疏松的發生；杜仲葉醇提取物具有類激素樣作用，能增進大鼠骨髓生成和增加骨質強度[6]。自制中藥制劑補腎活血方[7]防治OP療效良好，生骨密骨方是在此方基礎上進行改進，臨床療效更確切。方中稻芽和飴糖共用，健脾益胃，以防熟地黃、山茱萸、雞血藤等膩滯脾胃，又促進骨碎補、續斷補腎助陽之功效，桑螵蛸既緩解水蛭、川牛膝等峻烈之性，又促進淫羊藿、杜仲補腎壯陽之效。

表1 3組大鼠模型手術前后實驗室指標水平比較（±s）

表1 3組大鼠模型手術前后實驗室指標水平比較（±s）

注：與 A 組術后比較，*P＜0．01。

組別A組B組C組時間術前術后術前術后術前術后E2（ng/L）15．86 ± 2．06 8．13 ± 3．16 15．38 ± 2．15 14．87 ± 6．32*15．63 ± 2．57 14．65 ± 4．83*IGF-1（ng/mL）359．91 ±76．35 235．11 ±42．67 349．44 ±82．16 347．62 ±53．16*355．74 ±76．54 326．14 ±46．89*IL-6（pg/L）22．16 ± 4．45 41．65 ± 7．83 22．61 ± 5．96 26．48 ± 7．30*23．58 ± 6．23 25．89 ± 8．53*TNF- α （ng/L）28．85 ± 7．32 57．83 ± 11．35 26．94 ± 5．68 32．86 ± 11．58*25．88 ± 4．61 31．19 ± 12．47*

雌激素是維持骨吸收和骨形成平衡的重要因素，E2水平降低導致骨形成抑制、骨吸收亢進已得到公認[8]。OP主要影響TNF-α與IL-6水平，IL-6 mRNA主要在破骨細胞表達[9]。OP的發病過程是骨重建偏向破骨細胞所致的骨吸收不平衡過程，細胞因子產生于骨的微環境中，骨重建過程受到TNF-α及IL-6等細胞因子的調節[10]。IL-6可刺激破骨細胞前體細胞，使其分裂、增殖加快，影響成骨細胞活性。TNF-α是單核細胞和巨噬細胞分泌的細胞因子，具有抑制骨形成、促進骨吸收的作用[11]。IGF-1是依賴于生長激素的多肽蛋白，可通過內分泌、旁分泌和自分泌途徑作用于骨，在骨組織中與其受體結合，從而參與骨細胞生長、增殖與代謝的調節，對骨形成有刺激作用[12]。細胞因子中IL-6及TNF-α都是機體免疫系統調節骨代謝的主要蛋白質因子，IL-6對成骨和破骨細胞的分化、成熟起著重要作用，而IL-6能更多地活化破骨細胞[13]。本研究結果顯示，生骨密骨方可防治OP，分析原因，可能與生骨密骨方能降低TNF-α和IL-6的陽性表達，以及提高體內E2和IGF-1陽性表達有關。當雌激素缺乏時，能使骨髓單核細胞分泌的細胞因子明顯增加，TNF-α和IL-6可促進OP患者體內鈣鹽丟失，且TNF-α對成骨細胞的功能有抑制作用，故E2水平降低，TNF-α和IL-6水平增加。

本研究結果表明，生骨密骨方預防及治療OP效果良好，且無不良反應，具有較大的潛力與優勢。但還需認識到，提高E2與IGF-1的陽性表達，降低TNF-α與IL-6的陽性表達，可能只是生骨密骨方防治OP的一個作用機制，其防治OP作用詳盡機制與合理劑量還有待深入研究。