化胃舒顆粒對DNCB致小鼠遲發型超敏反應模型的影響

孟 莉 向紹杰 劉小虎 賈 冬 賈天柱

1.遼寧省中醫藥研究院，遼寧沈陽 110034；2.遼寧中醫藥大學藥學院，遼寧大連 116600

化胃舒顆粒由人參、藿香、黃芪、甘草等中藥組成，具有和胃降逆、益氣養陰之功效，常用于治療癌癥患者使用化療藥物后因損傷脾胃造成的不良反應，如惡心、食欲不振、腹脹、嘔吐等癥[1-2]。研究表明，在腫瘤發生的同時也伴隨著機體的免疫力低下，中藥對腫瘤機體的免疫調節作用是較為重要的抗癌機理之一，機體的免疫系統具有限制腫瘤細胞生長的能力，通過生物反應調節改變宿主對腫瘤的生物反應[3-5]。因此在治療腫瘤過程中，調動、增強機體的抗腫瘤免疫學機制在腫瘤的防治過程中占有重要的地位。本文旨在通過實驗對化胃舒顆粒在調節機體免疫功能方面的作用進行研究，為進一步研究其作用機制奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 昆明種小鼠，SPF級，雄性，體重（20±2）g，購于遼寧長生生物技術有限公司，動物質量合格證號：SCXK（遼）2010-0001。

1.1.2 試驗藥物 化胃舒顆粒（遼寧省中醫藥研究院藥學室，生產批號：112404），復方環磷酰胺片（天津金世制藥有限公司，國藥準字：H12021006，生產批號：2110501），復方天仙膠囊（通化白山藥業股份有限公司，Z10880008，生產批號：1108011）。

1.1.3 試劑 2，4-二硝基氯苯（DNCB）（軍事醫學科學院藥材供應站，批號：991223），丙酮（天津市百世化工有限公司，批號：20050405），小鼠CD4（CD4+）酶聯免疫檢測試劑盒（美國RD公司，批號：201210），小鼠 CD8（CD8+）酶聯免疫檢測試劑盒（美國RD公司，批號：201210）。

1.1.4 儀器 多功能酶標儀，ELx800 光吸收酶標儀，美國寶特（BIO-TEK）公司生產。YLS-Q4耳腫打耳器，山東省醫學科學院生產；FA2004分析天平，上海舜宇恒平科學儀器有限公司生產。

1.2 方法

1.2.1 動物分組和小鼠遲發型超敏反應模型的制作 取體重18～22g昆明種雄性小鼠84只，禁食不禁水17小時，隨機分7組，分別為空白對照組，模型對照組、復方環磷酰胺片（環磷酰胺52mg/kg）組、復方天仙膠囊（0.58g/kg）組、化胃舒顆粒低（7.90g生藥/kg）、中（15.80g生藥/kg）、高（31.60g生藥 /kg）組，每組12只。實驗前1日，在小鼠背部去毛，面積約4cm2，實驗當日除空白對照組外，其余各組小鼠于去毛區涂以7% DNCB液100μL致敏1次[6-9]，空白對照組涂以基質溶液（丙酮/大豆油=4：1)100μL。空白對照組和模型對照組等容積蒸餾水灌胃，各組每天給藥1次，連續21d。給藥第5天后，除空白對照組外，于其余各組小鼠右耳內側涂1%DNCB丙酮液10μL激發，每隔3天激發1次，左耳涂抹等量基質，空白對照組左右耳均涂抹等量的基質。分別于第4次激發后72h處死小鼠。

1.2.2 耳重量差的測定 激發后72h，將小鼠離斷頸椎處死，立即剪下雙側耳廓備檢。在左右耳同一部位打孔迅速用天平稱重，計算耳腫脹率。耳腫脹率（%）=（右耳重-左耳重）/左耳重×100%。

1.2.3 血液中CD4+和CD8+含量的測定 激發后72h將小鼠摘眼球取血，放置2h后，3000r離心5min，取上層血清，分別用酶標儀測定小鼠血清中CD4+和CD8+的含量，比較各組間小鼠血清中CD4+和CD8+的含量差異的顯著性。

1.3 統計學處理

實驗數據采用SPSS11.5軟件進行統計學處理，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 對小鼠遲發型超敏反應模型耳腫脹的影響

與空白對照組比較，模型對照組小鼠耳腫脹率明顯高于空白對照組，差異有統計學意義（P＜0.01），說明造模成功；化胃舒顆粒高劑量組（31.60g生藥/kg）小鼠耳腫脹率高于模型對照組，與模型對照組相比，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 化胃舒顆粒對小鼠遲發型超敏反應模型耳腫脹的影響（x ± s，n=12）

2.2 對小鼠遲發型超敏反應模型CD4+、CD8+含量的影響

造模后各給藥組小鼠血清中CD4+含量均高于空白對照組和模型對照組，各給藥組小鼠血清中CD4+含量，與空白對照組相比，差異有統計學意義（P＜0.01）。化胃舒顆粒中劑量組（15.80生藥/kg）和高劑量組（31.60g生藥/kg）小鼠血清中CD4+的含量，與模型對照組比，差異有統計學意義（P ＜ 0.05）。

造模各給藥組小鼠血清中CD8+含量均高于空白對照組和模型對照組。與空白對照組相比，模型對照組可增加CD4+/CD8+比值，但差異無統計學意義（P＞0.05），各給藥組除復方環磷酰胺片組可降低CD4+/CD8+比值外，其余各給藥組略有增加兩者比值的趨勢。見表2。

3 討論

2，4-二硝基氯苯（DNCB）致小鼠耳腫脹實驗是用于測定機體細胞免疫功能最常用的體內試驗方法。其本質屬于遲發型變態反應（第Ⅳ型）。當機體被一些細菌（如結核分枝桿菌、布魯菌）、病毒、或真菌等顯性或隱性感染，或接觸一些小分子物質、半抗原物質，當與體內組織蛋白接合成為完全抗原時機體就會產生針對這些抗原物質的特異性致敏淋巴細胞。當有相應抗原再次進入機體，局部的致淋巴細胞會釋放多種淋巴因子，經24～72h后導致以單核細胞浸潤為主的炎癥，表現為皮膚紅腫硬結，這種反應稱為遲發型變態反應[10-11]。由于小鼠耳朵比較薄，血管豐富但結構致密，引起水腫后不能有效擴散，于是在局部形成腫塊，通過雙耳重量差異反映水腫的程度，即炎癥嚴重程度。該反應可作判斷機體細胞免疫功能的指標之一。參與遲發型性超敏反應的主要細胞之一為T細胞，而CD4+T細胞和CD8+T細胞是T細胞的兩個亞群[3]。CD4+T細胞也叫輔助性T細胞（Helper T cells，Th），具有協助體液免疫和細胞免疫的功能；CD8+T細胞也叫抑制性 T 細胞（Suppressor T cells，Ts），具有抑制細胞免疫及體液免疫的功能[12-15]；它們的含量能直接反應人體的免疫功能，但是通常受人體生理情況不同而變化較大，而CD4+和CD8+的比值相對比較穩定。

表2 化胃舒顆粒對小鼠遲發型超敏反應模型CD4+ 、CD8+含量的影響（x ± s，n=12）

化胃舒顆粒對DNCB致小鼠遲發型超敏反應模型的影響結果表明，遲發型超敏反應模型小鼠的耳腫脹度明顯高于空白對照組（P＜0.05），說明模型成立，小鼠服用化胃舒顆粒后耳腫脹度明顯增加，差異有統計學意義（P＜0.05），說明化胃舒顆粒能增強DNCB致小鼠遲發型超敏反應。血液中的CD4+和CD8+T細胞的含量與對照組均有所提高，CD4+/CD8+比值僅略高于對照組，且體現出一定的劑量關系。提示化胃舒顆粒具有提高遲發型超敏反應小鼠的機體免疫力的作用。