延胡索塊莖中延胡索乙素含量分布的研究△

胡珂，何忠臻，彭華勝，詹志來

(1.安徽中醫藥大學 藥學院 安徽省道地中藥材品質提升協同創新中心，安徽 合肥 230012；2.中國中醫科學院 中藥資源中心 道地藥材國家重點實驗室培育基地，北京 100700)

常用中藥延胡索CorydalisyanhusuoW.T.Wang為多年生植物，以干燥塊莖入藥，有活血、止痛作用[1]。延胡索最早記載于唐代陳藏器的《本草拾遺》，是著名的浙八味之一[2]。根據前期調查，目前市場上延胡索商品都以粒徑大小進行等級劃分，而且在全國最大產區的陜西，產地加工方法簡陋，易造成塊莖頹廢組織大量脫落，這些狀況都會對正確評價藥材質量產生不利的影響。本實驗采用高效液相法分別測定延胡索塊莖的頹廢組織、表皮、韌皮部等不同部位中延胡索乙素的含量，結合前期市場調查及產地現狀對其品質進行分析評價，以期為今后延胡索產地加工方法的改進及商品規格等級的制定起到參考作用。

1 材料與儀器

1.1 材料

分別于2016年11～12月延胡索休眠期采集安徽省合肥市大蜀山的野生塊莖，由安徽亳州康美中藥材市場、河北安國東方藥城、四川荷花池中藥材專業市場、廣西玉林市中藥材專業市場購得栽培延胡索藥材商品，經胡珂教授鑒定為罌粟科植物延胡索CorydalisyanhusuoW.T.Wang的塊莖。

1.2 儀器

Milli-Q Advantage A10一體式超純水機(美國Milipore公司)；移液槍；FA2014B電子天平(上海越平科學儀器有限公司)；Agilent 1260型自動進樣高效液相色譜儀，美國安捷倫有限公司(Santa Clara，CA，USA)；色譜柱Agilent 5 TC-C 18(2)250×4.6 mm；WL-100型打粉機(威力制藥機械廠)；旋轉蒸發儀，超聲機、烘箱。

1.3 試劑

超純水(電阻率大于18.2 M·Ωcm-1)；甲醇(色譜純)；濃氨(分析純)；延胡索乙素(HPLC>98%)。

2 方法與結果

2.1 樣品前處理

采挖合肥大蜀山自然休眠5個月的野生延胡索塊莖(此時頹廢組織已形成)，洗凈后于烘箱中60 ℃恒溫烘6 h，陰干保存一天左右。用刀片剝離出頹廢組織、表皮、韌皮部、木質部及髓，分離后繼續陰干，至完全干燥后分部位用搗藥罐搗碎，過藥典3號篩。

2.2 色譜條件

色譜柱Agilent 5 LC-TC18(2)250×4.6 mm；流動相為甲醇-水(69：31)，等度洗脫，檢測波長280 nm；流速1.0 mL·min-1，進樣量5 μL，柱溫28 ℃。

2.3 溶液的制備

2.3.1 對照品溶液的制備 精密稱取延胡索乙素對照品0.53 mg置25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度線定容，用移液槍精密移取1 mL母液和4 mL甲醇，混合配成1 mL含4.24 μg延胡索乙素的對照品貯備溶液。

2.3.2 供試品溶液的制備 精密稱取各組樣品粉末(過三號篩)約0.5 g，置錐形瓶中，加入現配好的濃氨試液-甲醇(1∶20)混合溶液50 mL，冷浸30 min后，超聲30 min。搖勻，抽濾。續濾液用旋轉蒸發儀蒸干，殘渣加甲醇(色譜純)溶解，轉移至5 mL量瓶中，并用甲醇(色譜純)稀釋至刻度，搖勻。用5 mL一次性注射器吸取約1.5 mL樣品，溶液用0.22 μm過濾針頭濾過，取續濾液于2 mL的干燥潔凈的進樣瓶中，編號即得。

2.4 線性關系考察

精密吸取延胡索乙素對照品溶液5、7、10、15、17、20 μL在上述色譜條件下進樣，測得峰面積值，以峰面積值和進樣量進行回歸處理，以峰面積(Y)為縱坐標，以對照品的進樣量(X，μL)為橫坐標，縱到標準為曲線得回歸方程Y=3.209X+0.136 1，r=0.999 9，呈良好的線性關系。結果見圖1。

圖1 延胡索乙素標準曲線

2.5 精密度實驗

精密吸取延胡索乙素對照品溶液10 μL，按上述色譜條件重復進樣6次，測定峰面面積值，延胡索乙素的峰面積的RSD(n=6)=0.887 9%，結果見表1。

表1 延胡索標準品精密度實驗結果統計表(n=6)

2.6 穩定性試驗

分別取延胡索同一份供試品溶液，按照2.3條件下的方法進行提取，采用上述2.2色譜條件，在9、12、15、18、21、24、3、6 h進樣5 μL測定，延胡索乙素的峰面積的RSD(n=8)=0.715 6%，結果見表2。

2.7 重復性實驗

取同一批延胡索藥材樣品5份，按2.3條件下的方法進行提取，依照2.2色譜條件進樣5 μL，其延胡索乙素的峰面積的RSD(n=5)=1.652 1%，結果見表3。

表2 延胡索樣品穩定性實驗結果統計表(n=8)

表3 延胡索樣品重復性實驗結果統計表(n=5)

2.8 加樣回收率實驗

取同批延胡索藥材粉末6份0.5 g，精密稱定，按照上述提取方法及色譜條件進行延胡索乙素含量測定，另外加標準品0.20 mg，測得其延胡索乙素總含量，平均回收率為96.91%，RSD(n=6)=1.561%，結果見表4。

表4 延胡索樣品加樣回收結果統計表

2.9 樣品含量測定

2.9.1 11月份延胡索塊莖不同部位延胡索乙素測定

11月份采挖合肥大蜀山野生延胡索洗凈后于烘箱中60 ℃恒溫烘6 h，陰干保存1d左右。用刀片將延胡索剝離為3部分：頹廢組織及表皮、韌皮部、木質部及髓，分離后繼續陰干。至完全干燥后分部位用搗藥罐搗碎，過藥典3號篩。按照2.3條件下對剝離的不同部位進行提取，在2.2色譜條件下進樣。結果見表5。

表5 11月份延胡索不同部位延胡索乙素含量測定結果統計表

2.9.2 12月份不同塊莖延胡索乙素測定

根據11月份測定結果，于12月份采挖合肥大蜀山野生延胡索洗凈后于烘箱中60 ℃恒溫烘6 h，陰干保存一天左右。手工剝離延胡索的頹廢組織及表皮兩部分。烘干至完全干燥后分部位用搗藥罐搗碎，過藥典3號篩。按照2.3條件下對剝離的不同部位進行提取，在2.2色譜條件下進樣。結果見表6。

表6 12月份延胡索不同部位延胡索乙素含量測定結果統計表

2.9.3 不同產地規格樣品中延胡索乙素測定

抽取市場中部分商戶的樣品，兩兩一組進行對照，將同一商戶的貨源地視為相同，測定各樣品中的延胡索乙素含量，結果見表7。

表7 不同產地規格樣品延胡索乙素液相結果統計表

3 討論

3.1 延胡索塊莖中延胡索乙素的分布

根據實驗結果，在延胡索塊莖中的各個部位均含有延胡索乙素，在相同質量的前提下，木質部及髓中含量最高，頹廢組織及表皮中次之，而占延胡索塊莖主要體積的韌皮部中含量最少，其中頹廢組織較表皮又略高一些。合肥大蜀山的野生品延胡索乙素含量普遍高于各產地不同等級的栽培品(商品延胡索)，而在這些不同規格等級的商品延胡索中，延胡索乙素的含量與等級沒有必然的相關性，因此也可說明延胡索乙素在延胡索塊莖各部位均有分布，非在等級高的選貨(體積大)，即韌皮部多的塊莖中分布多。

3.2 根據產地現狀對延胡索加工方式的建議

目前浙江與陜西為延胡索兩大主產區，其中陜西產量最大，但陜西產區由于條件限制，對延胡索的初加工方法簡陋，多以簡易大鍋水煮，煮后自然曬干的方式。在水煮過程中皮殼(即頹廢組織及表皮)大量脫落，脫落的皮殼均用風機吹去。本實驗的結果表明，延胡索頹廢組織及表皮中尚含有大量的延胡索乙素，此種加工方式可造成入藥部分的大量浪費，且有文獻報道水煮方法雖利于大規模生產，但會造成延胡索乙素的大量流失[3]。因此建議陜西產區應設立統一加工點，采用浙江產區直接烘干的方式，以達到提升藥材質量的目的。

3.3 對延胡索商品規格劃分的建議

目前市場中延胡索藥材規格等級主要分為統貨與選貨，以過篩的方式進行劃分，二者的價格在市場上也有區別。本實驗的結果表明，如以有效成分延胡索乙素的含量來衡量藥材質量并按質論價，此種劃分方法缺乏一定的合理性。曾有研究表明，剝離切塊的延胡索中生物堿與粒徑大小成負相關[4]；也有文獻闡明，在粒徑大小10～20 mm的延胡索塊莖中，延胡索乙素含量無顯著性差異[5]，其結論與本實驗市場樣品的測定結果相同，因此延胡索等級劃分方式及劃分依據有待商榷。

4 結論

延胡索塊莖的頹廢組織中延胡索乙素含量較高，因此采收加工中脫落的皮殼仍有很高的藥用價值，對于這一資源應當合理利用。野生延胡索資源雖有分布，但由于自然生長環境的限制，人工采挖效率低下，沒有產量，因此栽培延胡索仍然是商品的主要來源。據調查，當前國內栽培延胡索多由浙江引種，陜西已成為最大產區，但現有的產地加工方式會造成原藥材質量下降，應借鑒浙江產地加工模式進行改良。1984年由原國家醫藥管理局和衛生部聯合發布的《七十六種藥材商品規格標準》，規定延胡索規格等級為一等：每50克45粒以內；二等：每50克45粒以外[6]。目前市場上商品延胡索仍按照此標準，以粒徑大小作為等級劃分及確定價格的主要依據，這一劃分方式需要進一步修正。