巴戟天寡糖對大鼠子宮缺血再灌注損傷的抗炎作用*

程亮星(鄭州大學第一附屬醫院《腫瘤基礎與臨床》編輯部，河南 鄭州 450052)

子宮缺血再灌注損傷是臨床常見的子宮不可逆性損傷，嚴重者可能會影響子宮正常受孕和生育等功能[1]。炎癥反應被證實在多種器官或組織的缺血再灌注損傷過程中發揮重要作用。因此，通過減輕子宮缺血再灌注損傷過程中的炎癥反應可能起到保護子宮缺血再灌注損傷的作用。腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)、白介素-6(interleukin-6，IL-6)和白介素-8(interleukin-8，IL-8)是重要的炎癥反應因子，在炎癥反應過程中這些因子的過表達均可導致炎癥反應的加重[2-3]。巴戟天寡糖提取自補腎壯陽中藥巴戟天的肉質根，研究證實其具有提高免疫力、調節內分泌、抗氧化、抗凋亡等藥理學作用，在多種器官或組織的缺血再灌注損傷過程中具有對抗損傷的作用[4-6]。為尋找新型的能高效干預子宮缺血再灌注損傷的藥物，本研究采用線栓法制備大鼠子宮缺血再灌注損傷模型，觀察了巴戟天寡糖對子宮缺血再灌注損傷過程中炎癥反應的影響。

1 材料與方法

1.1 動 物

50只SPF級健康雌性Wistar大鼠，均為6月齡，體質量(378±23)g，購自河南省實驗動物中心，并飼養于該中心，動物合格證號為SCXK(豫)2010-0002。

1.2 藥品、試劑與儀器

巴戟天寡糖由河南大學藥學院提取，具體方法參照文獻[7]。TNF-α、IL-1β和IL-6 酶聯免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒，均購自美國RD公司，批號依次為SRTA00、SRLB00、SR6000B；IL-8 ELISA試劑盒，購自美國MyBioSource公司，批號為MBS282844)。SynergyTM H1型全自動酶聯免疫分析儀，美國BioTek公司產品；Biofuge Stratos臺式高速低溫離心機，德國Heraeus公司產品。

1.3 動物分組與給藥方法

將50只大鼠隨機分為假手術組，模型對照組，巴戟天寡糖低、中、高劑量組5組，每組10只。巴戟天寡糖低、中、高劑量組按體質量依次給予質量分數70，140，280 g/L巴戟天寡糖液10 μL/g灌胃，假手術組和模型對照組按體質量給予10 μL/g雙蒸水灌胃，每天1次，連用7 d。

1.4 大鼠子宮缺血再灌注損傷模型的建立

各組大鼠末次給藥后1 h采用線栓法制備大鼠子宮缺血再灌注損傷模型[2]：以質量分數10 g/L的戊巴比妥鈉(0.4 μL/g)腹腔注射麻醉大鼠，腹部正中切口；經大隱靜脈注射50 u /kg肝素鈉；鈍性分離腹主動脈，在髂總動脈分叉處上0.5 cm處結扎腹主動脈(假手術組大鼠僅穿線，不結扎)，結扎30 min；解除結扎線，復灌60 min；采用過量戊巴比妥鈉麻醉，使大鼠死亡；取出子宮，于-80 ℃冰箱中保存。

1.5 檢測指標

每例子宮標本稱取100 mg，制成生理鹽水勻漿，4 ℃、4 000 r/min離心15 min，取上清液，采用酶聯免疫吸附測定法檢測TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8水平，操作嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.6 統計學方法

2 結 果

與假手術組對比，模型對照組TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8水平升高，差別有統計學意義(P<0.05)。與模型對照組對比，巴戟天寡糖3個劑量組TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8水平降低，差別有統計學意義(P<0.05)。巴戟天寡糖3個劑量組TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8水平兩兩對比，差別均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

組 別TNF-α/(ng·g-1)IL-1β/(ng·g-1)IL-6/(ng·g-1)IL-8/(ng·g-1) 假手術組31．82±3．6019．41±2．5155．04±5．0443．57±4．25 模型對照組74．04±3．75??49．65±4．37??132．84±8．51??112．64±6．22?? 巴戟天寡糖高劑量組39．81±2．71##25．88±2．63##78．39±4．57##66．39±4．94## 巴戟天寡糖中劑量組46．13±3．39##△△31．13±2．42##△△93．23±3．90##△△78．02±3．73##△△ 巴戟天寡糖低劑量組53．55±4．57##△△＊＊34．71±2．26##△△＊＊101．81±7．22##△△＊＊87．83±6．77##△△＊＊ F193．714148．916222．766231．929 P<0．001<0．001<0．001<0．001

注：與假手術組對比，**P< 0.01；與模型對照組對比，##P< 0.01；與巴戟天寡糖高劑量組對比，△△P< 0.01；與巴戟天寡糖中劑量組對比，＊＊P< 0.01

3 討 論

炎癥反應是一種常見的病理生理現象，是由眾多炎癥因子共同作用而產生的。炎癥反應廣泛參與衰老、腫瘤、心肌梗死、腦梗死等多種疾病的疾病進展過程。在心、腦、腎、肝、肺等多種器官或組織的缺血再灌注損傷過程中也有炎癥反應的存在，許多炎癥因子已經被證實在這一過程中水平明顯升高[5-6]。TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8均屬于炎癥因子，其水平的高低間接反映了炎癥反應的程度。有研究[7]證實：在心肌缺血再灌注損傷的過程中，TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低，而IL-10的水平則明顯升高，并且這一現象能夠被藥物干預。目前，關于抗缺血再灌注損傷藥物的研究是這一領域的熱點問題，而炎癥反應已經被證實參與了多種器官或組織的缺血再灌注損傷，并且這一過程能夠被藥物干預，也就是說通過抗炎能夠對抗缺血再灌注損傷的進展[8]。本研究采用線栓法制備大鼠子宮缺血再灌注損傷模型，觀察巴戟天寡糖干預對子宮缺血再灌注損傷過程中炎癥反應的影響，初步探討巴戟天寡糖用于對抗缺血再灌注損傷的可能性。

本研究結果顯示：與假手術組對比，模型對照組TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8水平升高(P<0.05)，提示子宮經過缺血再灌注的過程，出現了炎癥反應。與模型對照組對比，巴戟天寡糖3個劑量組的TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8水平降低(P<0.05)，表明巴戟天寡糖用于子宮缺血再灌注損傷模型，能夠改善其炎癥反應的損傷。巴戟天寡糖3個劑量組的TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8水平兩兩對比差別均有統計學意義(P<0.05)，且隨著巴戟天寡糖質量分數的增加，炎癥因子的水平降低，表明巴戟天寡糖具有劑量依賴性的抗炎作用。

綜上所述，巴戟天寡糖能夠減輕子宮缺血再灌注損傷后的炎癥反應，從而發揮保護子宮免受缺血再灌注損傷的作用。

4 參考文獻

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*基金項目：河南省醫學科技攻關計劃項目(201702092)