血力口服液的毒理學(xué)安全性評價(jià)

姜濤　黃靜　彭曉輝　董婧婧　許冬瑾　樂智勇

【摘 要】目的：探討血力口服液的安全性。方法：以健康成年SPF級昆明小鼠、SD大鼠及鼠傷寒沙門氏菌組氨酸缺陷型四株試驗(yàn)菌株（TA97、TA98、TA100、TA102）為受試對象，進(jìn)行急性經(jīng)口毒性實(shí)驗(yàn)、三項(xiàng)遺傳毒性試驗(yàn)及30天喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。結(jié)果：血力口服液對兩種性別的小鼠經(jīng)口MTD均大于15g/kgBW；三項(xiàng)遺傳毒性試驗(yàn)結(jié)果均為陰性，在受試劑量范圍未見致突變活性；30天喂養(yǎng)試驗(yàn)中受試大鼠各項(xiàng)生理、生化指標(biāo)與對照組比較，無顯著性差異（P>0.05）。結(jié)論：血力口服液無明顯毒副作用。

【關(guān)鍵詞】血力口服液；急性毒性；遺傳毒性；30天喂養(yǎng)試驗(yàn)

【中圖分類號】R285.5 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B 【文章編號】1005-0019（2018）04--01

為確保其發(fā)揮藥效的同時(shí)兼顧安全性，本次試驗(yàn)參考《保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范》[1]，對血力口服液進(jìn)行了系統(tǒng)的毒理學(xué)安全性評價(jià)，為血力口服液的進(jìn)一步開發(fā)提供安全性依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 受試物 血力口服液（批號 20160404，20ml/瓶，每日推薦劑量為40ml/60kgBW），為滿足毒理實(shí)驗(yàn)要求，將樣品濃縮8倍后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.1.2 動(dòng)物 SPF級昆明種小鼠，北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證號：SCXK（京）2012-0001；SD大鼠，北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證號：SCXK（京）2016-0011。

1.1.3 試驗(yàn)菌種 鼠傷寒沙門氏菌組氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四株試驗(yàn)菌株。

1.2 方法

1.2.1 急性毒性試驗(yàn)

選用昆明小鼠20只，雌雄各半，動(dòng)物體重為18-22g。采用最大耐受量（MTD）法進(jìn)行小鼠急性毒性試驗(yàn)，設(shè)計(jì)劑量為25.00g/kg BW（相當(dāng)于人推薦日攝入量的240倍）。動(dòng)物檢疫3d，試驗(yàn)前動(dòng)物禁食16h、自由飲水。樣品用無菌水配制，配制濃度為0.75g/mL，按最大灌胃量（20mL/kg BW），一次給樣，受試物給予劑量為25.00g/kg BW。給樣后連續(xù)觀察14d，記錄中毒表現(xiàn)及死亡情況。

1.2.2 三項(xiàng)遺傳毒性試驗(yàn)

1.2.2.1 Ames試驗(yàn)

選用經(jīng)鑒定符合要求的鼠傷寒沙門氏菌組氨酸缺陷型試驗(yàn)菌株（TA97、TA98、TA100、TA102），開展加與不加大鼠肝S9的平皿摻入法試驗(yàn)。受試物配制及滅菌方法：稱取1g樣品加無菌水配制成20ml液體，于0.103MPa，滅菌20min，滅菌后對受試物進(jìn)行無菌檢測，37℃培養(yǎng)24h，無菌生長，即得到最高工作濃度50mg/ml（5000μg/皿），其他濃度以此為基礎(chǔ)，依次用無菌水，5倍等比稀釋。共設(shè)5個(gè)劑量組，分別為5000、1000、200、40、8μg/皿，同時(shí)設(shè)未處理對照、溶劑（無菌水、無菌DMSO）對照和陽性對照組，不加S-9的陽性對照為敵克松（50.0μg/皿，適用菌株TA97、TA98、TA102）、疊氮鈉（1.5μg/皿，適用菌株TA100）；加S-9的陽性對照為2-氨基芴（10.0μg/皿，適用菌株TA97、TA98、TA100）、1，8-二羥蒽醌（50.0μg/皿，適用菌株TA102）。

1.2.2.2 小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)

選用體重25-30g小鼠50只，隨機(jī)分組，每組10只，雌雄各半。設(shè)計(jì)高、中、低劑量組分別為10.0g/kg BW、5.0g/kg BW、2.5g/kg BW，分別相當(dāng)于人體推薦劑量的96、48、24倍。陽性對照組給予40mg/kg BW環(huán)磷酰胺，陰性對照組給予等體積蒸餾水，小鼠灌胃體積20mL/kg BW。采用30h給予受試物法，即兩次給受試物間隔24h，第二次給受試物后6h，頸椎脫臼處死小鼠，取胸骨骨髓材料制片、染色，雙盲法閱片。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS11.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。對計(jì)量資料采用單因素方差分析，按方差分析的程序進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，若方差齊，采用單因素方差分析進(jìn)行總體比較，發(fā)現(xiàn)差異再用Dunnett進(jìn)行多個(gè)劑量組與一個(gè)對照組均數(shù)間的兩兩比較，對方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，使其滿足方差齊性要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到方差齊，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。對計(jì)數(shù)資料采用X2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 急性毒性試驗(yàn)

染毒后14d內(nèi)，動(dòng)物狀態(tài)正常，無中毒體征和死亡況，在第15d處死動(dòng)物進(jìn)行大體解剖檢查，主要器官未見明顯異常。受試物對兩種性別小鼠的經(jīng)口MTD大于25g/kg（>15g/kg），屬于無毒級

2.2 三項(xiàng)遺傳毒性試驗(yàn)

2.2.1 Ames試驗(yàn)：受試物各劑量組回變菌落數(shù)均未超過溶劑對照組、未處理對照組回變菌落數(shù)2倍以上，無劑量-反應(yīng)關(guān)系，血力口服液在加與不加肝微粒體酶活化系統(tǒng)情況下，Ames試驗(yàn)結(jié)果均為陰性。

2.2.2 小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)

各劑量受試物對兩種性別小鼠的骨髓細(xì)胞增殖無明顯抑制作用，低、中、高三個(gè)劑量組PCE/NCE比值說明受試物無細(xì)胞毒性。兩種性別小鼠各劑量組骨髓PCE微核率與溶劑對照組比較均無顯著性差異（P>0.05），說明在受試劑量范圍內(nèi)，血力口服液小鼠嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)陰性。

3 討論

血力口服液組方安全，其中阿膠及茯苓屬于《衛(wèi)生部關(guān)于進(jìn)一步規(guī)范保健食品原料管理的通知》（衛(wèi)法監(jiān)發(fā)[2002]51號）附件1《可用于保健食品的物品名單》中的品種，葡萄糖酸亞鐵為食品營養(yǎng)強(qiáng)化劑，收載在國家中醫(yī)藥管理局制定的《保健食品原料目錄（一）》（2016年第205號）中，其他原料黨參、白術(shù)、木香屬于《衛(wèi)生部關(guān)于進(jìn)一步規(guī)范保健食品原料管理的通知》（衛(wèi)法監(jiān)發(fā)[2002]51號）附件2《可用于保健食品的物品名單》中的品種。多項(xiàng)研究資料也證明了上述原料的安全性[2-5]。

參考文獻(xiàn)

保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范[S]，中華人民共和國衛(wèi)生部，2003，167-224.

郭婕，謝瑋，顏燕，等.阿膠的毒理學(xué)安全性評價(jià)[J].《毒理學(xué)雜志》，2013，27（4）：314-315.

余濱，王伯章.復(fù)方茯苓甘草湯水煎液的毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究[J].《國醫(yī)論壇》，2010， 25（3）：46-48.

張麗娟.葡萄糖酸亞鐵在小兒缺鐵性貧血治療中的應(yīng)用價(jià)值探討[J].《中國繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育》，2015，7（32）：125-126.

李建恒，周玉勛，鄭富穩(wěn)，等.微量元素鐵對小鼠的時(shí)辰毒理作用研究[J].《河北職工醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)》，1999，16（1）：10-12.