大紅袍花椒不同部位提取物抗氧化效果研究

王征帆，李娜

（渭南師范學(xué)院 化學(xué)與材料學(xué)院，陜西 渭南 714099）

花椒屬于蕓香科植物，香氣濃郁，是居家必備的一種調(diào)味品，具有定麻味、增香辛和除腥減膻的作用，位列調(diào)料“十三香”之首，被稱為“調(diào)味之王”。花椒同時也是一味中藥，其藥性辛熱，歸脾、胃、腎經(jīng)，具有芳香健脾、溫中散寒、除濕止痛、殺蟲解毒、止癢等功效。李時珍在《本草綱目》中曰：“花椒堅齒，烏發(fā)，明目，久服好顏色，耐老，增年，健神。”現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明，花椒中含有多種化學(xué)成分，具有局麻、鎮(zhèn)痛、抗炎、抑菌、抗氧化、抗腫瘤、殺蟲等藥理活性［1］。目前，對花椒成分研究的資料很多，但花椒不同部位提取物抗氧化效果的研究還未見報道。本研究采用超聲波提取法提取陜西韓城產(chǎn)大紅袍花椒不同部位的活性成分，并采用紫外分光光度法測定花椒各部位提取物的抗氧化效果，為人們合理利用和進(jìn)一步開發(fā)花椒資源提供參考。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

紫外－可見光譜儀 萊伯泰克有限公司；超聲震蕩儀 昆山市超聲儀器有限公司；多功能攪拌器 廣東美的生活電器公司；電子分析天平 北京賽多利斯儀器公司。

過氧化氫（30%，分析純）、乙醇（75%，分析純）、硫酸亞鐵（分析純）：西安化學(xué)試劑廠；水楊酸（分析純）：天津市百世化工有限公司；鄰苯三酚（分析純）：天津市北辰區(qū)方正試劑廠；磷酸氫二鉀（分析純）：四川金地亞美科技有限公司；磷酸二氫鉀（分析純）：天津市登峰化學(xué)試劑廠。

大紅袍花椒：產(chǎn)地陜西韓城。

1.2 實驗方法

1.2.1 抗氧化成分提取

將處理好的花椒殼、花椒籽、花椒葉分別洗干凈，放置于70℃烘箱中烘制4h，取出后分別用粉碎機粉碎，準(zhǔn)確稱取0.8g 3種樣品于3個錐形瓶中加入30mL乙醇（75%），將錐形瓶放入超聲震蕩儀中震蕩30min，取出后進(jìn)行過濾，將過濾后的濾渣在相同提取條件下再提取2次，將提取液用玻璃棒引流至250mL的容量瓶中定容，制成提取液備用。

1.2.2 羥基自由基清除能力的測定

羥基自由基是目前所有自由基中最活潑的一種，可以與體內(nèi)的分子發(fā)生氧化反應(yīng)，對身體產(chǎn)生危害，因此研究大紅袍花椒不同部位對羥基的清除能力可以評價其抗氧化效果。此次實驗利用Fenton反應(yīng)產(chǎn)生羥基自由基后，加入水楊酸可以與羥基自由基反應(yīng)生成有色物質(zhì)。加入具有清除羥基自由基的提取液，能有效地清除羥基自由基，進(jìn)而減少有色產(chǎn)物的生成量，以致吸光度減少，具體操作如下：

取1支試管，加入8.8mmol/L的H2O2標(biāo)液0.5mL，然后加入FeSO4（9mmol/L）標(biāo)液0.5mL，搖勻后加入0.5mL（9mmol/L）水楊酸溶液和2.5mL乙醇（75%），在37℃的恒溫水浴鍋中反應(yīng)30min后，設(shè)置紫外分光光度計波長為510nm，記錄測得吸光度為A1。隨后將提取液取一定量加入試管中，反應(yīng)3min，此時測得吸光度為A3。當(dāng)顯色劑有顏色時，它對測定波長會有吸收，而其他均沒有或很少，因此，需要做1組試劑空白實驗，將上述FeSO4（9mmol/L）標(biāo)液換為0.5mL的乙醇（75%），重復(fù)上述操作，記錄測得的吸光度為A2，清除率計算公式為［2］：

1.2.3 超氧自由基清除能力的測定

超氧自由基也是在人體內(nèi)產(chǎn)生的一種自由基，會引起人體脂質(zhì)過氧化，誘發(fā)癌癥等疾病，嚴(yán)重危害著人體健康。此次實驗選用鄰苯三酚自氧化法測定花椒各部位提取液對超氧自由基的清除效果，評價其抗氧化效果，具體實驗操作如下：

將pH為8.2的K2HPO4－KH2PO4緩沖溶液和濃度為3mmol的鄰苯三酚溶液分別放置于30℃的恒溫水浴鍋中預(yù)熱30min，預(yù)熱結(jié)束后，先移取鄰苯三酚溶液0.3mL至試管中，再加入緩沖溶液5.0mL，迅速震蕩使之反應(yīng)，倒入比色皿中，設(shè)定測定波長為320nm，記錄測定的吸光度為A4，另取試管加入0.3mL鄰苯三酚溶液，加入一定量的花椒殼、花椒葉、花椒籽提取液，再加入5.0mL緩沖液，記錄吸光度為A5，清除率計算公式為［3］：

清除率＝（1－A4/A5）×100%。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同部位提取物對羥基自由基的清除效果

按上述1.2.2的方法分別加入0.2，0.4，0.6，1.0mL提取物樣品，測定吸光度，并通過清除率計算公式得出清除率，不同體積乙醇提取液對羥基自由基的清除率見表1。

表1 提取液對羥基自由基的清除率

由表1可知，花椒不同部位的提取液對羥基自由基有一定的清除能力，且清除率與加入提取液的體積成正相關(guān)，但花椒部位不同，對羥基的清除能力也有明顯的差別，具體表現(xiàn)為花椒葉＞花椒殼＞花椒籽。

2.2 不同部位提取物對超氧自由基的清除效果

按上述1.2.3的方法加入0.2，0.4，0.6，1.0mL提取物樣品，測定吸光度，并通過清除率計算公式得出清除率，不同體積乙醇提取液對超氧自由基的清除率見表2。

表2 提取液對超氧自由基的清除率

由表2可知，花椒不同部位的提取液對超氧自由基有一定的清除能力，且清除效果有明顯差異，具體清除效果表現(xiàn)為花椒葉＞花椒殼＞花椒籽。且總體清除效果沒有羥基自由基好，其中花椒籽對超氧自由基幾乎沒有清除能力。

3 結(jié)論

本實驗通過超聲波提取法，以乙醇為溶劑，分別對陜西韓城產(chǎn)的大紅袍花椒不同部位抗氧化成分進(jìn)行了提取，并利用鄰苯三酚自氧化法和Fenton反應(yīng)研究了提取物對超氧自由基和羥基自由基的清除效果，據(jù)此評價其抗氧化效果。實驗結(jié)果表明：花椒葉、花椒殼、花椒籽對羥基自由基和超氧自由基均有一定清除作用，清除率與提取物加入的體積成正相關(guān)，具有抗氧化效果。但不同部位對自由基清除率不同，表現(xiàn)為花椒葉＞花椒殼＞花椒籽。另外花椒相同部位提取物對2種自由基的清除率有差異，表現(xiàn)為羥基自由基＞超氧自由基。因此，陜西韓城產(chǎn)大紅袍花椒葉和花椒殼是非常好的藥食兩用類原料和天然抗氧化產(chǎn)品。該實驗方法具有儀器簡單、操作簡便等特點，對尋找和篩選天然抗氧化劑資源有實際的意義。