EGFR、Her-2及Hsp90α在食管腺癌患者中的表達及病理研究

姜　波　高愛民　盛　瑩　文　進　趙勝乾　王仰坤

食管腺癌可以說是我國比較常見的1種惡性腫瘤，嚴重威脅著人們的生命健康。根治性手術雖然能夠切除病變早期的食管腺癌，但是大多數患者就診時屬于進展期。輔助化療治療該病效果理想，能夠降低患者的腫瘤分期，改善進展期切除率，從而延長患者的生存期[1]。不過進展期患者的預后方面，還缺乏統一的評估方案，同時術前對化療效果的預測也缺乏可靠的醫學證據。如果能夠篩選食管腺癌預后評估的可靠指標，有利于防止盲目用藥給患者帶來非必要的痛苦。本研究在此分析EGFR、Her-2及Hsp90α的表達在食管腺癌患者中的表達及同病理學特征之間的關系，現報告如下。

1　資料與方法

1.1　一般資料

選取2013年1月至2015年12月我院收治的食管腺癌患者30例為研究組，男性27例，女性3例，年齡22～56歲，平均(37.2±1.9)歲。同時選取同期胃鏡下食管活檢正常的健康人員30例為對照組，男性26例，女性4例，年齡23～51歲，平均(35.2±2.3)歲。兩組研究對象均知情同意，經過倫理委員會同意。

1.2　方法

1.2.1儀器與試劑脫水機為PELOIUSII，包埋機EGl140H，染色機ST5020，切片機RM2135，顯微鏡DMlOoo，均為德國徠卡公司生產。兔抗人EGFR抗體、兔抗人Her-2抗體、兔抗人HSP90Α抗體，均由上海艾博抗公司生產。兔抗人SP法試劑盒，北京金橋公司生產[2]。

1.2.2實驗方法常規染色，切取厚度5.0 μm的切片，烤箱當中放置1 h，冷卻后相繼添加二甲苯、乙醇15 min，去除之后使用自來水進行沖洗。之后使用蘇木精5 min并使用自來水進行沖洗，酒精脫水之后使用樹膠封片，在顯微鏡條件下觀察[3]。

1.2.3免疫化學檢測檢測食管腺癌組織當中的EGRF表達、HER-2表達以及HSP90Α表達。蠟塊5 μm切片后烤箱干燥2 h，常規脫蠟之后添加二甲苯20 min以及無水乙醇10 min，之后應用自來水進行沖洗?？乖迯头矫?，把切片浸入枸櫞酸液當中浸泡，高壓鍋中修復3 min后冷卻，使用生理鹽水沖洗10 min[4]。室溫條件下孵育20 min，生理鹽水沖洗10 min后滴加一抗(EGRF、HER-2以及HSP90Α)。室溫放置20 min之后生理鹽水沖洗，并DA顯色。自來水沖洗之后使用蘇木精復染，酒精脫水之后應用樹膠進行封片[5]。

1.3　觀察指標

陽性對照方面，應用已知的EGFR、Her-2以及HSP90Α陽性切片使用相同方法染色，作為陽性對照。陰性對照方面，使用生理鹽水PS代替一抗，將操作結果當作陰性對照。由兩名以上的病理科醫師閱片，切片隨機計數20個高倍鏡下(×400)視野當中的陽性細胞，統計染色細胞數量以及強度[6]。

Hsp90α結果分析方面，陽性評分(0～10%計0分，11%～25%計1分，26%～50%計2分，51%～75%計3分，76%～100%計4分，并進行染色強度評分(不著色計0分，淡黃色計1分，棕黃色計2分，棕褐色計3分。相加得到結果，0～1分是(-)，2～3分是(+)，4～5分是(++)，6～7分是(+++)。將(-)以及(+)判斷為陰性，(++)是弱陽性，(+++)定為強陽性，++以上為陽性結果[7]。

EGRF以及HER-2結果分析方面，染色為零是完全陰性-：+，細胞膜染色>10%，同時間斷分布，未曾環繞胞膜；++，>10%的細胞膜中度陽性同時連續染色，環繞細胞膜；+++，>10%的細胞膜強陽性同時連續染色，環繞細胞膜；-及+屬于陰性；++屬于弱陽性，+++屬于強陽性。其中++以上判斷為陽性。

1.4　統計學方法

2　結果

食管腺癌組織中EGFR、Her-2及Hsp90α表達陽性率顯著高于正常鱗狀上皮，差異均有統計學(P<0.05)。見表1。

表1　兩組EGFR、Her-2及Hsp90α表達情況比較(例，%)

HSP90α表達與腫瘤浸潤深度、腫瘤細胞分化、淋巴結轉移、TNM分期以及脈管侵犯等因素相關(P<0.05)，EGFR表達與腫瘤TNM分期、細胞分化、浸潤深度以及淋巴結轉移等因素相關(P<0.05)，Her-2表達與患者的腫瘤細胞分化、淋巴結轉移以及TNM分期等因素相關(P<0.05)，見表2。

食管腺癌組織中Hsp90α表達與EGFR表達存在正相關(P<0.05)，Hsp90α表達與Her-2表達存在正相關(P<0.05)，Her-2表達與EGFR表達無相關性(P>0.05)，具體見表3。

3　討論

食管腺癌發生發展以及轉移等同各方面的因素相關，具體的作用機制還不夠明確，尋找食管腺癌分子靶標還有靶向藥物已經成為臨床研究的熱點[8]。本研究借助于分析食管腺癌組織當中EGFR表達、Her-2表達以及Hsp90a表達情況，同時判斷三者同患者病理特征之間的關系，從而判斷患者的預后情況，也為臨床的靶向治療提供可靠的分子學判斷依據。EGFR屬于酪氨酸激酶的1種，轉導信號的方式同腫瘤侵襲以及轉移等存在著直接的聯系。研究結果顯示，50%左右的食管腺癌患者存在和EGFR的過度表達，并且同患者的預后質量較差存在聯系。EGFR表達同患者的淋巴結轉移、腫瘤分期以及生存期等存在聯系，也跟腫瘤血管增殖、轉移侵襲以及細胞凋亡等因素相關[9]。本研究的結果顯示，食管腺癌患者癌組織當中的EGFR表達要顯著高于正常組織(P<0.05)。病理分析結果顯示，EGFR表達同患者年齡、性別、腫瘤位置以及分化程度等缺乏明顯聯系，同浸潤深度、TNM分期以及淋巴結轉移等因素存在正相關(P<0.05)。有研究顯示，食管腺癌患者手術之后的生存期隨著EGFR的表達上升而逐漸下降[10]。這意味著EGFR表達同食管腺癌患者的浸潤、轉移還有預后等存在聯系。在食管腺癌當中表達的差異，需要在選擇EGFR靶向藥物進行食管腺癌患者治療的過程當中明確具體的治療策略。

表2　EGFR、Her-2及Hsp90α表達與食管腺癌病理特征的關系/例

表3　食管腺癌組織中EGFR、Her-2及Hsp90α表達的關系

Her-2同樣是酪氨酸激酶的一種，在各種惡性腫瘤當中呈現出高表達，例如肺癌、結直腸癌以及卵巢癌等。過表達同乳腺癌患者的臨床分期以及分化程度等存在正相關，同患者的預后質量存在負相關，可以說是乳腺癌患者重要的預后判斷指標。近年研究人員發現Her-2在胃癌的發展過程當中同樣發揮著重要的影響，并且曲妥珠單抗經過歐盟以及日本的注冊應用到治療Her-2存在過表達的胃癌患者當中[11]。食管腺癌患者當中Her-2的表達方面，還存在著一定程度的爭議，大部分研究人員認為這一比例不高于30%。有研究人員認為Her-2的過表達同患者的年齡、性別、分化程度以及腫瘤大小等缺乏直接的聯系，但是同腫瘤的浸潤深度還有淋巴結轉移等因素存在密切聯系，并Her-2的過表達會影響到患者的生存率以及生存期現[12]。本研究的結果顯示，食管腺癌患者癌組織當中的Her-2表達率要顯著于正常組織(P<0.05)，同時表達情況同管腺癌患者年齡、性別、分化程度以及腫瘤位置等因素無關，不過同患者腫瘤的浸潤深度存在負相關，同淋巴結轉移還有TNM分期等因素存在正相關。除此之外，也有研究人員認為Her-2表達同食管腺癌患者手術之后的生存期存在聯系，隨著表達程度的上升，患者的生存期越來越短，這表明Her-2同食管腺癌患者的預后質量存在聯系[13]。不過因為Her-2的表達率比較低，同時研究的樣本量不多，因此食管腺癌當中Her-2的變化還需要后續的深入研究。

Her-2以及EGFR的分子學功能存在著密切的聯系，Her-2缺乏顯著的單體活性，需要借助于二聚體才能夠生成活化信號。在細胞膜遭到EGF的處理之后，Her-2以及EGFR就能夠在功能上發揮反向激活效果。EGF同EGFR以及Her-2二聚體之間的結合，要高于EGF受體二聚體的結合。同時異質二聚體同均質二聚體對比而言，無論在人體的正常細胞當中還是在腫瘤細胞當中，生長活性都顯著上升。因為Her-2配體還不夠清晰，傳導信號需要借助于其它的二聚體來發揮相互影響，或者是借助于同EGFR家族當中的受體來發揮作用。與此同時，在食管腺癌轉移過程當中，EGFR以及Her-2共同過表達發揮著不容忽視的重要影響。聯合過表達同食管腺癌患者的發生發展以及預后質量存在這密切的聯系，這一關系得到研究人員的普遍認同。本研究的結果顯示，食管腺癌患者的組織當中，EGFR表達以及HER-2表達存在著正相關，這表明兩者在食管腺癌發病過程當中存在著聯系。

Hsp90α屬于EGFR以及Her-2分子的伴侶，在腫瘤發生發展環節都有重要的影響。Hsp90α在多種人類惡性腫瘤組織當中呈現出高表達的狀態，并且同腫瘤出現、轉移以及惡性行為存在著密切的聯系。有研究人員通過實驗發現，結腸癌患者當中Hsp90的表達表達率超過72%，要明顯高于患者癌旁組織當中的40%以及正常黏膜組織當中的20%，同時腫瘤浸潤加深之后，Hsp90表達也越來越高。也有研究人員分析宮頸癌患者病理組織當中Hsp90的表達情況，結果表明示Hsp90表達同宮頸癌患者的病理分級缺乏顯著的關聯性[14]。食管腺癌患者當中Hsp90表達同患者手術之后生存時間的對比還不夠明確。本研究的結果顯示，食管腺癌組織當中的Hsp90α表達率要顯著高于正常組織(P<0.05)，并且同食管腺癌患者年齡、性別、腫瘤分化程度以及腫瘤位置無明顯聯系，同食管腺癌的TNM分期、浸潤深度還有淋巴結轉移等因素存在正相關(P<0.05)。有研究人員借助于檢測食管腺癌患者的Hsp90α表達情況，同患者的生存時間進行對比，結果顯示Hsp90α的表達程度同食管腺癌患者手術之后的生存期存在著直接的聯系，Hsp90α的表達越強，那么食管腺癌患者的生存期也就越短。這意味著Hsp90α能夠當作食管腺癌患者預后質量判斷的可靠指標。食管腺癌患者當中Hsp90α表達以及EGFR表達存在正相關，因此理論層面而言，聯合應用將Hsp90還有EGFR當作靶點的治療藥物可以提高藥物治療的敏感性，降低腫瘤患者的耐藥性還有藥物治療造成的不良反應。除此之外，EGFR表達、Her-2表達以及Hsp90α表達在食管腺癌組織當中存在著表達差異，并且同病理特征之間的關系以及對患者手術治療之后的生存期也有著各自的影響，需要引起醫務人員的重視。

綜上所述，食管腺癌患者當中EGFR、Her-2及Hsp90α表達陽性率顯著高于健康人群，并且同TNM分期以及細胞分化的因素存在密切聯系。研究分析腫瘤當中蛋白過度表達同腫瘤之間的關系，對指導臨床治療以及評估患者預后都有重要價值。