miRNA141通過抑制MAP2K4促進大腸癌增殖的研究

肖緒華

【摘要】 目的：探究miRNA141通過抑制MAP2K4對促進大腸癌增殖的效果。方法：本文共選取2016年2月至2018年2月在本院放射科做MRI檢查被診斷為大腸癌的患者24例，提取總RNA，RNA濃度測量使用紫外分光光度法，取5μL RNA樣品，運用RNase對離子水進行稀釋，在對OD值進行測量時需使用紫外分光光度計進行測量。RTPCR擴增，cDNA模版的合成主要是應用PCR逆轉錄反應來實現，RTPCR擴增主要是應用ALLinOne試劑盒，具體的步驟及方法應嚴格按照試劑盒上的說明書開展。結果：大腸癌及腸黏膜的提取方法主要是應用Trizol方法。在對miR141的相對表達量進行檢測時，主要是采用熒光實時定量PCR法。在對細胞轉染WT FL質粒進行檢驗時，主要是使用熒光儀來檢測熒光酶的活性，會發現FL活性下降，突變質粒的FL活性未發生明顯的變化。結論：在大腸癌診斷中MRI發揮了重要作用，miR141的表達水平會隨著大腸癌TNM分期而增高，miR141表達上調，說明大腸癌與miR141之間的發展有直接關系，有助于抑制癌細胞的快速生長。

【關鍵詞】 miRNA141；MAP2K4；大腸癌增殖；大腸癌癌細胞

miRNA141 promotes the proliferation of colorectal cancer by inhibiting MAP2K4

Xiao Xuhua

Affiliated Hospital of Guilin Medical University， Guilin， Guangxi 541000

[Abstract] Objective：To explore the effect of miRNA141 on promoting the proliferation of colorectal cancer by inhibiting MAP2K4. Methods： this article selected from February 2016 to February 2016 in our hospital radiology department do MRI examination， a total of 24 patients with colorectal cancer was diagnosed， extracting total RNA， RNA concentration measurement using uv spectrophotometry， take samples of 5 mu lRNA applying RNase to dilution of ionized water， as measured in the OD value measurement should be carried out using ultraviolet spectrophotometer.Rtpcr amplification， cDNA template synthesis is mainly used PCR rtpcr reaction，RTPCR amplification is mainly applied ALLinOne kit， specific experimental steps and methods should strictly follow the instructions in the kit to carry out the experiment. Results： the extraction method of colorectal cancer and intestinal mucosa mainly used Trizol method. In the detection of the relative expression of miR141， fluorescence realtime quantitative PCR method was adopted. When the cells were transfected with WT FL plasmid， the activity of fluorescein was detected by fluorescence apparatus， and FL activity decreased and the FL activity of mutant plasmid did not change significantly. Conclusion： MRI plays an important role in colorectal cancer diagnosis， the expression of miR141 levels will be increased with colorectal cancer TNM staging， miR141 expression， indicates that the development of colorectal cancer between miR141 and has a direct relationship， helping to suppress cancer cell growth.

[Key words]miRNA141； MAP2K4； Colorectal cancer proliferation； Colorectal cancer cells

大腸癌是一種最常見的癌癥病癥，是引發患者死亡的主要原因，目前主要采用手術切除治療方法，但是在過去的十幾年中，患者的生存率并未發生明顯的變化。近年來，醫學專家學者發現了生物標志物，針對大腸癌患者的疾病情況，制定出了個性化的治療策略，促進了患者生存質量的大大提升。miRNA在抑制蛋白質及調整人類基因上作用顯著，異常miRNA表達式對人類癌癥的侵襲均造成了較大的影響。通過miRNA，有助于促進活化癌基因細胞的快速轉化，對抑制腫瘤發展及增殖作用顯著。本文作者將2016年2月至2018年2月在本院放射科做MRI檢查被診斷為大腸癌的24例患者作為研究對象，探究miRNA141通過抑制MAP2K4對促進大腸癌增殖的效果，現報道如下。

1資料及方法

1.1一般資料

本文共選取于2016年2月至2018年2月在本院放射科做MRI檢查被診斷為大腸癌的患者24例，男性患者為122例，女性患者為12例，年齡為42～76歲，平均年齡為（62.3±2.4）歲。

1.2方法

提取總RNA，RNA濃度測量使用紫外分光光度法，取5μL RNA樣品，運用RNase對離子水進行稀釋，在對OD值進行測量時需使用紫外分光光度計進行測量。RTPCR擴增，cDNA模版的合成主要是應用PCR逆轉錄反應來實現，RTPCR擴增主要是應用ALLinOne試劑盒，具體的步驟及方法應嚴格按照試劑盒上的說明書開展[12]。

1.3統計學處理

研究得出數據通過SPSS 18.0軟件統計處理，計量資料采用（±s）表示，以t檢驗，P<0.05說明差異有統計學意義。

2結果

2.1大腸癌與miR141的miRNA表達水平

大腸癌及腸黏膜的提取方法主要是應用Trizol方法，在對RNA的純度及濃度進行鑒定時，主要是使用瓊脂糖凝膠及紫外分光光度法進行鑒定及測量。在對miR141的相對表達量進行檢測時，主要是采用熒光實時定量PCR法。研究結果見圖1，可見大腸癌組織中的miR14呈升高發展趨勢，相對于癌旁的正常組織有統計學差異（P<0.05）。

主要是利用miR141 anatagomirs、Lipofectamin 2000轉染miR 141模擬物對miR141與大腸癌癌細胞之間的生長關系進行研究，研究結果顯示，miR141模擬物轉染的提高水平是miR141表達水平的3～4倍。與此相反，miR141 anatagomirs是導致miR141濃度減少的主要原因。從圖2中可以看出，miR414模擬物轉染miR141表達水平明顯提高，anatagomirs是引發miR141表達水平下降的主要原因。

2.3miR141對MAP2K4表達的影響

在對miR141的下游靶基因進行預測時，主要是應用MiRanda法做進一步的研究。在對細胞轉染WT FL質粒進行檢驗時，主要是使用熒光儀來檢測熒光酶的活性，會發現FL活性下降，突變質粒的FL活性未發生明顯的變化。說明在調控MAP2K4中，miR141發揮了抑制性作用，說明miR141大腸癌自爆中的靶目標很有可能是MAP2K4。與相應的對照相比，突變型及轉染野生型質粒的大腸癌細胞熒光素酶活性有統計學差異（P<0.05）。見圖3。圖2miR41表達水平

3討論

大腸癌是我國癌癥疾病中的常見類型，是引發患者死亡的主要原因。microRNA作為一項潛在的新型腫瘤標志物，受到了廣大醫學專家學者的高度關注[34]，加大對大腸癌進行早期診斷及治療具有必要性，有助于提升患者預后質量。miRNA作為新一類的癌癥基因調節因子，在大腸癌治療中發揮了重要作用[56]。在過去的很多年中，醫學專家學者對miRNA進行了大量的研究和分析，研究結果表明其為癌癥基因的調節因子，miR141在促進癌癥發展及抑制基因MAK2K4中作用顯著，被廣泛應用于結腸腫瘤治療中。miRNA自身具有較強的穩定性，在抑制腫瘤及癌基因上效果顯著，實現了對細胞凋亡及增殖過程的調節。miR141作為一種進化上保留，使miRNA基因遠端長期處于異常的甲基化過程中，會降低DNA甲基轉移酶的表達水平，提升miR141表達水平。

本研究結果顯示，miR141能夠有效抑制腫瘤及基因MAK2K4，在腫瘤治療中發揮了重要作用。需要將miR141作為一類藥物靶標，為大腸癌的診斷及治療提供可靠依據。miRNA在腫瘤抑制基因及癌基因中作用顯著，通過對細胞的凋亡及增殖進行調節，促進了腫瘤細胞的快速凋亡及分化[78]。miR141保留在不穩定的miRNA家族中，在大腸癌中的分子機制是導致DNA甲基轉移酶基因表達水平下降的主要原因，因此需要加大對miR141的表觀遺傳學機制進行調節[910]。

綜上所述，在大腸癌診斷中MRI發揮了重要作用，miR141的表達水平會隨著大腸癌TNM分期而增高，miR141表達上調，說明大腸癌與miR141之間的發展有直接關系，有助于抑制癌細胞的快速生長。

參考文獻

[1] 宋剛，蘇宇，劉麗波，等.MiR21在大腸癌中的表達及其對SW480細胞增殖侵襲的影響[J].解剖科學進展，2017，23（06）：572575.

[2] 曾偉，梁慧，王云啟，等.腸復方對裸鼠人大腸癌原位移植瘤增殖和凋亡影響[J].遼寧中醫藥大學學報，2017，19（07）：5356.

[3] 茆家定，胡迪，吳佩.胃泌素調控ERK信號通路在促進大腸癌CACO2細胞增殖中的作用[J].中國臨床藥理學與治療學，2017，22（04）：401405.

[4] 吾熱婭提古麗·克維爾，艾百拉·熱合曼，胡尼其古麗·阿巴克，等.蜂膠黃酮短葉松素3乙酸酯對人宮頸癌SiHa和大腸癌HT29細胞增殖及凋亡的影響[J].中國新藥雜志，2016，25（24）：28812886.

[5] 王成楓，余養生，何燕珠.細胞增殖指數TK1、Ki67對大腸癌的臨床價值比較[J].中外醫療，2016，35（33）：710.

[6] 孫朝文，張廣鈺，趙辰，等.凋亡大腸癌CT26細胞對小鼠T淋巴細胞增殖及活性的影響[J].廣西醫學，2016，38（09）：12011206，1210.

[7]奚松陽，陳彥，滕鈺浩，等.基于PI3K/Akt通路探討健脾化瘀方對大腸癌SW480增殖的影響[J].中國實驗方劑學雜志，2016，22（16）：97102.

[8] 劉集鴻，蔣楠楠，張麗科，等.靶向cmyc基因的siRNA基因干擾對大腸癌Lovo細胞增殖與凋亡的影響[J].分子診斷與治療雜志，2016，08（02）：109113，118.

[9] 文玉，李曉燕，羅娟.Wee1及pWee1對大腸癌增殖的調控機制[J].世界華人消化雜志，2015，23（32）：51645170.

[10]楊映映，秦甜甜，錢樹樹，等.不同濃度蜜炙紫菀水煎劑對大腸癌LOVO細胞增殖和周期的影響[J].世界中醫藥，2015，10（11）：17551759.