片姜黃質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)再評價(jià)研究

朱紅梅，劉　濤，韓　嘯

(成都大學(xué) 藥學(xué)與生物工程學(xué)院，四川 成都　610106)

0　引　言

片姜黃為姜科植物溫郁金的干燥根莖，主產(chǎn)于浙江溫州瑞安等地[1].片姜黃具有破血行氣，通經(jīng)止痛之功效，臨床上常用于胸脅刺痛、胸痹心痛、痛經(jīng)經(jīng)閉、風(fēng)濕肩臂疼痛、跌撲腫痛等癥治療[2].在《中國藥典》2015版一部中，片姜黃的現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)僅包括性狀鑒別、薄層鑒別及揮發(fā)油的含量測定，而未對其中某個(gè)指標(biāo)成分含量進(jìn)行控制.相關(guān)研究表明，片姜黃中含有莪術(shù)醇、莪術(shù)酮、莪術(shù)二酮、吉馬酮與呋喃二烯等成分，且吉馬酮具有抗腫瘤、抗病毒、抗菌、抗炎等藥理作用[3-4].對此，本研究擬在片姜黃的現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中增加吉馬酮的含量測定，擬為其質(zhì)量控制提供依據(jù).

1　材料與儀器

1.1　材　料

實(shí)驗(yàn)所用材料包括：片姜黃(批號，20170226、20171028、20171102)，分別購自北京同仁堂藥業(yè)有限公司與安國藥源商貿(mào)有限公司；吉馬酮對照品(批號，150810，HPLC>98%)，購自四川省維克奇生物科技有限公司；薄層層析硅膠G(批號，20151023)，購自青島海洋化工廠；羧甲基纖維素鈉(批號，20130821)、石油醚(30～60 ℃，批號，2016092201)、乙酸乙酯(批號，2016071501)、甲醇(批號，2017070501)，購自成都科隆化學(xué)品有限公司；HPLC用甲醇、乙腈為色譜純，水為怡寶純凈水，其余試劑均為分析純.

1.2　儀　器

實(shí)驗(yàn)所用儀器包括：BS-6KH電子天平(上海友聲衡器有限公司)；BJ-150型高速多功能粉碎機(jī)(拜杰公司)；FA2004型分析電子天平(上海良平儀器儀表有限公司生產(chǎn))；ichrom-5100型高效液相色譜儀(大連依利特分析儀器有限公司)；KQ-100E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；HH-6型數(shù)顯恒溫水浴鍋(常州國華電器有限公司).

2　方法與結(jié)果

2.1　性狀鑒別

觀察發(fā)現(xiàn)：片姜黃呈長圓形或不規(guī)則的片狀，大小不一，長3～6 cm，寬1～3 cm，厚0.1～0.4 cm；外皮灰黃色，粗糙皺縮，有時(shí)可見環(huán)節(jié)及須根痕；切面黃白色至棕黃色，有一圓環(huán)紋及多數(shù)筋脈小點(diǎn)；質(zhì)脆而堅(jiān)實(shí)，斷面呈灰白色至棕黃色，略呈粉質(zhì)；氣味特異，味微苦而辛涼.

2.2　薄層鑒別

取片姜黃粉末1 g，加石油醚(30 ℃～60 ℃)5 mL，振搖，約30 min，濾過，濾液轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，加石油醚(30 ℃～60 ℃)至刻度，作為供試品溶液.另取片姜黃對照藥材，同法制成對照藥材溶液.

參照薄層色譜法[2]進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，具體步驟為：吸取上述2種溶液各2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30 ℃～60 ℃)—乙酸乙酯(17∶3)為展開劑展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，于100 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，結(jié)果見圖1.

注：1、2，片姜黃對照藥材；3，樣品20170226；4，樣品20171028；5、6，樣品20171102

圖1片姜黃薄層鑒別色譜圖

由圖1可見，供試品溶液中與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯現(xiàn)相同顏色的斑點(diǎn).

2.3　揮發(fā)油含量測定

揮發(fā)油含量測定步驟為：取供試品適量(相當(dāng)于含揮發(fā)油0.5～1.0 mL)，準(zhǔn)確稱定(準(zhǔn)確至0.01 g)，置燒瓶中，加水300～500 mL(或適量)與玻璃珠數(shù)粒，搖勻混合后，連接揮發(fā)油測定器與回流冷凝管，自冷凝管上端加水使其充滿揮發(fā)油測定器的刻度部分并溢流入燒瓶時(shí)為止；然后置電熱套中或用其他適宜方法緩緩加熱至沸，并保持微沸約5 h，至測定器中油量不再增加，停止加熱，放置片刻，開啟測定器下端的活塞，將水緩緩放出，至油層上端到達(dá)刻度線0線上面5 mm處為止.放置1 h以上，再開啟活塞使油層下降至其上端恰與刻度0線平齊，讀取揮發(fā)油量，并計(jì)算供試品中揮發(fā)油的含量(%).實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1.

表1　3批片姜黃揮發(fā)油含量測定結(jié)果

根據(jù)《藥典》2015版一部項(xiàng)下相關(guān)規(guī)定，確定本品含揮發(fā)油不得少于1.0%(mL/g).

2.4　吉馬酮含量測定

2.4.1色譜條件.

實(shí)驗(yàn)色譜條件為：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈—水(60∶40)為流動(dòng)相，檢測波長為215 nm，流速為1 mL/min.

2.4.2對照品溶液制備.

取吉馬酮對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含367.2 μg的對照品溶液.精密量取上述對照品溶液，配制成濃度分別為73.44 μg/mL、29.376 μg/mL、14.688 μg/mL、5.8275 μg/mL的對照品溶液.

2.4.3供試品溶液制備.

取片姜黃粉末約2.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加25 mL甲醇，稱定，超聲處理30 min，放冷，稱定，用甲醇補(bǔ)足減少的質(zhì)量，過濾，制得供試品溶液.

2.4.4線性關(guān)系考察.

分別吸取“2.4.2”項(xiàng)下5種對照品溶液，按照“2.4.1"項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測定峰面積．以峰面積為縱坐標(biāo)，吉馬酮進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為，y=2881.9x+11.709(R2=1).結(jié)果表明，吉馬酮在0.058～3.672 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系(見圖2).

圖2吉馬酮對照品線性關(guān)系圖

2.4.5精密度實(shí)驗(yàn).

精密量取吉馬酮對照品溶液10 μL，按照“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6次，測定吉馬酮峰面積，計(jì)算其RSD為0.78%．結(jié)果表明，儀器的精密度良好.

2.4.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn).

稱取片姜黃適量(批號，20170226)，按照“2.4.3"項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別于0、1、2、4、8、12、16 h時(shí)按“2.4.1"項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣10 μL，測定吉馬酮峰面積，計(jì)算其RSD為2.60%.結(jié)果表明，供試品溶液在16 h內(nèi)基本穩(wěn)定.

2.4.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn).

稱取同一批片姜黃適量(批號，20170226)，按照“2.4.3"項(xiàng)下方法制備方法制備供試品溶液，平行6份，按“2.4.1"項(xiàng)下色譜條件各進(jìn)樣10 μL，測定吉馬酮峰面積，計(jì)算其RSD為2.90%.結(jié)果表明，本方法具有良好的重復(fù)性.

2.4.8加樣回收實(shí)驗(yàn).

精密稱取已知含量的片姜黃(批號，20170226)，精密加入對照品溶液0.8 mL(367.2 μg/mL)，按照“2.4.3"項(xiàng)下方法制備供試品溶液，平行6份，按“2.4.1"項(xiàng)下色譜條件各進(jìn)樣10 μL，測定吉馬酮峰面積，計(jì)算得其平均回收率為94.8%、RSD為4.50%，結(jié)果見表2.結(jié)果表明，本方法回收率良好.

表2　加樣回收實(shí)驗(yàn)

2.4.9吉馬酮含量測定及限量確定.

取3批片姜黃樣品(批號，20170226、20171028、20171102)，按照“2.4.3"項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.4.1"項(xiàng)下色譜條件各進(jìn)樣10 μL，測定吉馬酮含量，結(jié)果見表3、圖3.

表3　3批樣品中吉馬酮含量測定結(jié)果

圖3片姜黃HPLC色譜圖

根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，本研究認(rèn)為，可暫規(guī)定本品含吉馬酮(C15H22O)不得少于0.020%.

3　結(jié)　論

本研究根據(jù)《中國藥典》一部項(xiàng)下相關(guān)規(guī)定對3批片姜黃樣品進(jìn)行性狀鑒別、薄層鑒別及揮發(fā)油的含量測定檢驗(yàn)，樣品均合格.在此基礎(chǔ)上，本研究建立了高效液相色譜法直接測定片姜黃中吉馬酮含量的方法，通過方法學(xué)考察表明，線性關(guān)系、精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性及加樣回收率均較好，同時(shí)測定了3批不同批次的片姜黃中吉馬酮的含量并規(guī)定其限度.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該定量檢測方法可靠性較強(qiáng)，可為片姜黃中吉馬酮的分析提供可信的檢測手段，同時(shí)，也為其進(jìn)一步的質(zhì)量控制提供了依據(jù).