硫酸頭孢喹肟乳房注入劑對奶牛乳房炎的療效

薛 梅， 朱俊平， 葛愛民

(山東畜牧獸醫職業學院，山東濰坊 261061)

頭孢喹肟是動物專用的第4代頭孢菌素類抗生素，具有抗菌譜廣，抗菌活性強，吸收快、達峰時間短，殘留少，在肺、乳腺等組織內達高的治療濃度等優點[1-2]。國外臨床已經廣泛用于動物的呼吸道疾病以及奶牛乳房炎的治療[1]。近十幾年來，山東濰坊地區奶牛養殖業迅猛發展，奶牛乳房炎的發病率也不斷升高[3-4]，給奶牛業造成了巨大的經濟損失。在對濰坊市奶牛乳房炎病原菌分離鑒定及抗菌藥耐藥性檢測的基礎上，借鑒國內外治療奶牛乳房炎的成功經驗[5]，選取齊魯動物保健品有限公司開發的新劑型硫酸頭孢喹肟乳房注入劑在濰坊地區進行奶牛乳房炎的療效研究，對于濰坊市奶牛乳房炎的治療具有重要意義。本試驗選取濰坊地區臨床型乳房炎病牛，應用不同劑型頭孢喹諾進行治療。通過臨床療效、牛奶體細胞定性檢測、乳區細菌感染率和細菌學治愈率判定其治療效果，并在用藥后檢測乳汁中頭孢喹肟含量，檢查食品安全性。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗動物 對濰坊地區發生臨床型乳房炎的病牛，選擇臨床癥狀基本相似、泌乳期的乳房炎奶牛40頭作為試驗動物。

1.1.2 培養基 普通營養瓊脂、營養肉湯、改良艾德華瓊脂、S-S瓊脂、麥康凱瓊脂以及細菌生化微量鑒定管等，均購自浙江杭州濱和微生物試劑有限公司。綿羊血瓊脂由山東畜牧獸醫職業學院防疫與檢疫實驗室按郭霄峰提供的方法[6]制備。

1.1.3 試驗藥物 硫酸頭孢喹肟乳房注入劑(泌乳期用)(75 mg/8.0 g)，由齊魯動物保健品有限公司生產提供；硫酸頭孢喹肟注射劑(25 mg/支)，為中牧實業股份有限公司生產，獸藥字(2010)220982320；頭孢喹肟標準品(純度≥99%，CAS登記號為118443-89-3)，上海圻明生物科技有限公司。

1.1.4 診斷試劑 LMT乳房炎診斷試劑，購自中國農業科學院蘭州畜牧與獸藥研究所。

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗分組 對濰坊市臨床型乳房炎的病牛，無菌收取奶樣進行細菌分離培養，從病原鑒定為金黃色葡萄球菌、鏈球菌(無乳鏈球菌、停乳鏈球菌、乳房鏈球菌)、大腸桿菌的病牛中[4]，參考抗菌藥物Ⅱ、Ⅲ期臨床藥效評價試驗指導原則[7]，選擇乳房炎癥狀接近的40頭病牛作為試驗動物。將40頭病牛隨機分成2組，每組20頭。Ⅰ組為硫酸頭孢喹肟乳房注入劑局部用藥(75 mg/個)治療試驗組，Ⅱ組為硫酸頭孢喹肟注射劑肌內注射用藥(1 mg/kg)治療對照組。2組在同樣飼養條件下飼養，日糧組成和營養水平完全一樣。

1.2.2 給藥方案 Ⅰ組病牛先擠凈患病乳區內的乳汁或分泌物，用碘酊和乙醇擦試乳頭管及乳頭。托起乳房，經乳頭管口向乳池內插入連接有膠管的滅菌乳導管，膠管的另一端接注射器，將硫酸頭孢喹肟乳房注入劑(75 mg/個)徐徐注入乳池內，注入完畢抽出導管，用手指輕輕捻動乳頭導管片刻，再以雙掌自乳頭池、乳腺池、腺泡腺管系順序輕輕向上按摩擠壓，使藥液漸次上升并盡可能擴散到腺管腺泡[8]。間隔12 h用藥1次，連用3次。

Ⅱ組病牛肌內注射硫酸頭孢喹肟注射劑[8]，劑量為 1 mg/kg，間隔24 h用藥1次，連用3次。試驗期間，試驗奶牛不使用其他藥物治療。

1.2.3 檢查指標

1.2.3.1 臨床治療效果檢查 觀察試驗牛給藥前和停藥后1、3、5、7、14 d的臨床表現，記錄發病乳區數，用藥后痊愈乳區數和好轉乳區數，計算治愈率、有效率。療效判斷標準為[9]：乳房紅腫消退，疼痛反應消失，泌乳恢復正常，乳汁眼觀正常為痊愈；乳房紅、腫、熱、痛等癥狀基本消失或減輕，乳汁凝塊減少為有效；乳房癥狀無好轉或轉為慢性炎癥，甚至愈趨嚴重，乳汁依然異常甚至失去泌乳能力為無效。

1.2.3.2 細菌學檢查 2組奶牛分別于給藥前和停藥后1、3、5、7、14 d無菌取奶樣進行細菌分離培養和鑒定[4]，計算乳區細菌感染率和細菌學治愈率。作為藥物療效的判定情況之一。

1.2.3.3 牛奶體細胞定性檢測 2組奶牛分別于給藥前和停藥后1、3、5、7、14 d取奶樣采用LMT進行牛奶體細胞定性檢測。判定標準為[10-11]：混合物均勻、流動性好、無沉淀物，判定為陰性(-)，體細胞數為0～200 L；混合物呈液狀、有少許絮狀物或沉淀，判定為可疑(±)，體細胞數為 150～500 L；有明顯絮狀物或沉淀物、不成膠狀、有一定黏附性，判定為弱陽性(+)，體細胞數為400～1 500 L；沉淀物較多、較黏稠、有少量膠狀物，判定為陽性(++)，體細胞數為800～5 000 L；混合物的大部分或全部參與形成明顯膠狀物，判定為強陽性(+++)，體細胞數為5 000 L以上。

1.2.3.4 牛奶中頭孢喹肟殘留量檢測 最后一次給藥后5、7 d取奶樣，依照國家標準GB/T 22989—2008《牛奶和奶粉中頭孢匹林、頭孢氨芐、頭孢洛寧、頭孢喹肟殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法》，嚴鳳等建立了動物源性食品中頭孢喹肟的確證檢測方法[12]，賈濤檢測了牛奶中頭孢喹肟的殘留濃度[13]。

1.2.4 數據處理與分析

使用SPSS 17.0軟件統計分析2組的顯著性差異。

2 試驗結果

2.1 臨床治療效果

由表1可知，Ⅰ組在停藥后1、3、5、7、14 d，治愈率分別為22.58%、41.94%、64.52%、77.42%、83.87%。Ⅱ組在停藥后1、3、5、7、14 d，治愈率分別為17.24%、37.93%、55.17%、58.62%、58.62%。Ⅰ組(試驗組)在停藥后1、3、5 d的治愈率與Ⅱ組(對照組)相比，均有顯著差異(P<0.05)；在停藥后7、14 d的治愈率Ⅰ組與Ⅱ組相比，均有顯著差異(P<0.05)。

2.2 細菌檢出結果

由表2可知，在停藥后1、3、5、7、14 d，Ⅰ組對金黃色葡萄球菌的細菌學治愈率分別為6.67%、46.67%、73.33%、86.67%、93.33%，Ⅱ組對金黃色葡萄球菌的細菌學治愈率分別為0、42.86%、64.29%、71.43%、78.57%。Ⅰ組(試驗組)在停藥后的1、3、5、7、14 d的細菌學治愈率均高于Ⅱ組(對照組)；在停藥后1、3、5 d，Ⅰ組細菌學治愈率與Ⅱ組相比均有顯著差異(P<0.05)；在停藥后7、14 d，Ⅰ組細菌學治愈率與Ⅱ組相比均有顯著差異(P<0.05)。

表1 奶牛臨床型乳房炎的臨床治療效果

表2 給藥前后乳區金黃色葡萄球菌檢出結果

由表3可知，在停藥后1、3、5、7、14 d，Ⅰ組對鏈球菌(無乳鏈球菌、停乳鏈球菌、乳房鏈球菌)的細菌學治愈率分別為5.26%、52.63%、73.68%、84.21%、89.47%，Ⅱ組對鏈球菌(無乳鏈球菌、停乳鏈球菌、乳房鏈球菌)的細菌學治愈率分別為0、47.06%、64.29%、70.59%、70.59%。Ⅰ組(試驗組)在停藥后的1、3、5、7、14 d的細菌學治愈率均高于Ⅱ組(對照組)；在停藥后1、3、5 d的細菌學治愈率，Ⅰ組與Ⅱ組相比，均差異顯著(P<0.05)；在停藥后7、14 d的細菌學治愈率，Ⅰ組與Ⅱ組相比，均差異顯著(P<0.05)。

由表4可知，在停藥后1、3、5、7、14 d，Ⅰ組對大腸桿菌的細菌學治愈率分別為25.0%、75.0%、100.0%、100.0%、100.0%，Ⅱ組對大腸桿菌的細菌學治愈率分別為12.5%、62.5%、87.5%、87.5%、87.5%。Ⅰ組(試驗組)在停藥后的1、3、5、7、14 d的細菌學治愈率均高于Ⅱ組(對照組)；Ⅰ組與Ⅱ組相比均有極顯著差異(P<0.01)。

2.3 牛奶體細胞定性檢測結果

由表5可知，在停藥后1、3、5、7、14 d，Ⅱ組呈LMT-的乳區個數都增多，呈LMT+++的乳區消失， 呈LMT++乳區個數都減少，表明牛奶中的體細胞數均下降。

表3 給藥前后乳區鏈球菌(無乳鏈球菌、停乳

表4 給藥前后乳區大腸桿菌檢出結果

表5 給藥前后牛奶體細胞定性檢測(LMT)結果

Ⅰ組(試驗組)在停藥后的1、3、5、7、14 d的LMT陰性率(LMT-的乳區數/治療乳區數)均高于Ⅱ組(對照組)；Ⅰ組與Ⅱ組相比均差異顯著(P<0.05)。

2.4 牛奶中頭孢喹肟殘留量

由表6可知，Ⅰ組(試驗組)、Ⅱ組(對照組)在停藥后 5 d 所取奶樣中頭孢喹肟殘留量分別為(0.416±0.182)、(0.418±0.186) μg/kg，無明顯差異，均遠低于我國農業部235號公告規定的頭孢喹肟在牛奶中的最大殘留限量 20 μg/kg。Ⅰ組與Ⅱ組在停藥后7 d所取奶樣中均未檢出頭孢喹肟。

表6 牛奶中頭孢喹肟殘留量

3 討論與結論

從治療效果(臨床療效、牛奶體細胞定性檢測、乳區細菌感染率和細菌學治愈率)看，硫酸頭孢喹肟乳房注入劑對奶牛乳房炎有很好的治療效果。

Ⅰ組(試驗組)在停藥后的1、3、5 d的臨床治愈率、細菌學治愈率、LMT陰性率與Ⅱ組(對照組)相比，均有顯著差異(P<0.05)；在停藥后7、14 d，Ⅰ組(試驗組)的臨床治愈率、細菌學治愈率、LMT陰性率與Ⅱ組(對照組)相比，均有顯著差異(P<0.05)。說明硫酸頭孢喹肟乳房注入劑局部用藥(75 mg/個)的治療效果明顯好于硫酸頭孢喹肟注射劑肌內注射用藥(1 mg/kg)的治療效果。

在停藥后5 d所取奶樣中頭孢喹肟殘留量遠低于我國農業部235號公告規定的頭孢喹肟在牛奶中的最大殘留限量，在停藥后7 d所取奶樣中未檢出頭孢喹肟。

硫酸頭孢喹肟乳房注入劑性能穩定，刺激性低，通過乳導管注入乳區而發揮局部治療作用。藥物在乳腺中達峰時間短，濃度高，藥物作用發揮更快；藥物在血液中分布濃度少，內臟殘留較注射用藥更少，藥物在牛奶中殘留低，符合用藥安全的規定[1-2，5，8]。

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