兩代丙型肝炎病毒抗體(抗-HCV)診斷試劑盒在無償獻血血液篩查中的比較

郭 咚，張 鋼，陳 靜，周 鼎

(長沙血液中心檢驗科，湖南 長沙 410000)

我國丙型肝炎病毒(HCV)感染率大約為0.43%，HCV感染者還在逐年上升，是當今感染HCV人口最多的國家[1]。隨著無償獻血血篩試劑的發展，我國獻血者中HCV流行率逐步下降[2]。 現階段大多數血站實驗室在抗- HCV檢測上選擇四代檢測試劑盒與三代檢測試劑盒聯合檢測。本實驗室通過對無償獻血者血液篩查標本抗- HCV檢測的結果分析，對第三代、第四代抗HCV試劑的性能進行評估。

1 材料與方法

1.1標本：2014年～2016年長沙市無償獻血者常規血液篩查標本417 044份。

1.2試劑和儀器：檢驗設備使用瑞士Hamilton Star全自動加樣儀、瑞士Hamilton FAME24/30全自動酶聯免疫檢測系統；第三代抗-HCV檢測試劑由上海科華生物工程股份有限公司提供，第四代試劑由北京萬泰生物制品有限公司試劑盒提供；各濃度質控物由北京金豪制藥股份有限公司提供；抗-HCV血清盤由北京康徹思坦生物技術有限公司提供。以上試劑及質控物均在有效期內使用。

1.3方法：使用第三代、第四代抗HCV檢測試劑盒對無償獻血者血篩標本進行兩次平行檢測。某種時間初次檢測結果為反應性時，使用原試劑進行雙孔復查。結果判斷：第三代、第四代抗HCV檢測試劑盒均設置灰區范圍(S/CO值：0.5～1.0)整個檢測過程中，按照試劑使用說明書要求，在全自動設備上完成所有步驟。

1.4統計學方法：采用χ2檢驗，將數據導入SPSS 23.0軟件進行統計學分析，P<0.05時差異有統計學意義。

2 結果

2.1使用濃度為1NCU/ml北京金豪抗-HCV質控物(批號20150717)，連續檢測20 d，對精密度進行估計。萬泰四代χ2值=7.57，CV%=9.7%，科華三代χ2值=3.15，VC%=12.8。

2.2康徹思坦丙肝病毒抗體血清盤(批號20160611)，對靈敏度、特異性進行評估。見表2。

2.3檢出限檢測結果：梯度稀釋樣本5份(L1～5)，L5為基質液，其他4份(L1～4)為陽性梯度稀釋樣本。見表3。

表1兩種試劑血清盤檢測結果

標本號確認結果萬泰四代科華三代標本號確認結果萬泰四代科華三代1---21+++2+++22+++3+++23---4---24---5---25+++6+++26---7+++27---8---28---9---29+++10+++30+++11---31+++12---32+++13+++33---14---34---15---35+++16+++36+++17+++37---18---38---19+++39---20+++40+++

表2兩種試劑檢出限結果

標本號L1L2L3L4L5濃度(NCU/ml)4210.5基質液科華三代(S/CO)7.43.21.50.960.01萬泰四代(S/CO)13.76.43.41.80.01

2.4平行檢測2014年～2016年長沙市無償獻血者血液篩查標本417 044份，對兩試劑檢測結果的符合性進行估計，差異有統計學意義(P<0.001)。見表3。

表3兩種試劑平行檢測結果

科華三代萬泰四代 陽性 陰性 總計陽性32635361陰性722415 961416 683總計1 048415 996417 044

3 討論

實驗室使用的第三代檢測試劑盒為間接法，包被于微孔板內飾基因重組表達的丙肝抗原；使用的第四代檢測試劑盒為雙抗原的夾心法，除包被了丙肝抗原外，還加入了生物素化丙肝抗原，形成“包被抗原-抗體-生物素化抗原”復合物。從同濃度的質控品重復性檢測結果以及試劑檢出限檢測結果來看，第四代檢測試劑盒靈敏度較第三代檢測試劑盒有較大的提高。這是因為萬泰第四代檢測試劑盒使用了生物素-親和素級聯放大系統，提升了檢測試劑的靈敏度。而雙抗原夾心法增加了IgM的檢測。IgM較IgG出現的早，縮短了窗口期。同時另外四代檢測試劑加樣量的增加使檢測重復性更好。

2014年～2016年長沙市無償獻血者血液篩查標本417044份的兩種試劑平行檢測符合性結果為99.8%，尤其是四代檢測試劑的灰區和假陽性標本大幅度減少，說明該試劑檢測特異性較好。另外，由于血清中非特異性IgG以及類風濕因子等的干擾而造成的假陽性反應。而萬泰四代使用了基因工程重組表達的抗原作為原料取代了酶標二抗，原料純度大幅度高，提高了特異性。

目前我國大多數血站對獻血者抗- HCV初篩檢測仍采用兩遍的ELISA法，其初篩反應性樣本的正確率約為30%左右[3]；而各血站對試劑的灰區設置非常的嚴格，初篩檢測灰區淘汰的獻血者和單試劑反應性淘汰的獻血者確認陽性率則會更低。而這部分獻血者被檢測結果為“不合格”而被淘汰。試劑靈敏度的提高提前了窗口期，保證了血液安全弱陽性標本能夠檢出，保證了血液安全；特異性的提升，使灰區及假陽性的標本減少，避免了灰區標本重復試驗帶來的成本增加和工作量增加，避免血液報廢節約成本、避免獻血員的流失血源緊張。

因此，這幾年我國越來越多血站開始關注獻血者歸隊問題，并根據各自實驗室的情況，制定對淘汰的獻血員再次抽取血液進行確證試驗，并對假陽性相對應的獻血者保留資格[4]。同時通過各種大型的招募活動，培養獻血者的忠誠度，發展固定的獻血者隊伍，也是血站保障血液安全的措施[5]。但是近幾年有高危行為獻血者也參與到無償獻血中，也給采供血機構提出了巨大的挑戰。有研究顯示，男男同性戀者中抗-HCV流行率約為0.07%～2.9%，其感染HCV的危險性是一般人群的3倍[6]。

2015年國家衛計委要求核酸檢測覆蓋全國無償獻血標本篩查，仍有但經核酸檢測為陰性而ELISA檢測為陽性的報道[7]。所以核酸檢測 HCV RNA雖可以縮短窗口期，但還是存在漏檢風險[8]，NAT檢測為陰性而 ELISA檢測為陽性，則說明 ELISA法在血液篩查的作用仍然不能被忽略。ELISA檢測的是其抗體，而核酸檢測的是HCV RNA，就檢測原理的理論上來說，這兩種方法對同一標本的兩次檢測結果是互補的。2015版血站技術操作規程血液檢測方法中增加了針對血清學標志物的其他檢測手段，即化學發光免疫分析試驗(CLIA)。朱為剛，曾勁峰等研究表明[9]，將化學發光法與NAT檢測相結合的方案，在采供血機構值得推廣，能進一步保障血液安全。

4 參考文獻

[1] 潘華偉,苑 遠.丙型肝炎病毒感染的流行病學研究進展[J].吉林醫藥學院學報,2017,38(2):123.

[2] 楊海英,汪 峰,費靜嫻,等.浙江省湖州地區無償獻血人群丙肝感染危險因素分析[J].臨床血液學雜志(輸血與檢驗),2017,30(02):305.

[3] 張秀慧,鐘政榮,余加宏.獻血者抗-HCV檢測及確認結果研究進展[J].安徽醫學,2015,36(1):122.

[4] 李 玲,劉 忠.初篩反應性獻血者確證方案與歸隊策略分析[J].中國輸血雜志,2016,29(1):1.

[5] 康瑞博,王 戴.無償獻血者抗-HCV篩查結果與ALT檢測結果關系的分析[J].吉林醫學,2012,33(05):906.

[6] Hahné Susan J M，Veldhuijzen I K，Lucas W，et al.Infection with hepatitis B and C virus in Europe：a systematic review of prevalence and cost-effectiveness of screening[J].Bmc Infectious Diseases，2013，13(1):181.

[7] 劉峭梅,覃柳燕.獻血者血液單人份核酸檢測及血清學檢測結果的分析[J].檢驗醫學與臨床,2014,11(1):102.

[8] 蔣昵真,胡文佳,朱勝江,等.江蘇省反應性獻血者屏蔽、保留與歸隊情況分析[J].國際檢驗醫學雜志,2017,38(10):1299.

[9] 朱為剛,曾勁峰,李 彤,等.一種化學發光檢測試劑在血液篩查中的應用評估[J].中國輸血雜志,2016,29(06):581.