針刺對高尿酸血癥大鼠模型血尿酸等的影響

劉冰云，王心怡，王健彤，王 珊，劉旭峰，陳虹屹，睢明河

（北京中醫藥大學針灸推拿學院，北京 100029）

高尿酸血癥是一種嘌呤與尿酸代謝異常的疾病，隨著病情加重可發展為痛風，因此控制尿酸的升高可有效降低痛風的發病率。

在查閱的25篇關于針灸治療痛風的文獻中，僅有2篇是針對痛風高尿酸血癥的治療，其余均為治療痛風性關節炎，其治療主要起到降低炎癥指標以及緩解局部關節癥狀的作用，而非從致病原因上進行干預，治標而非治本。本實驗基于中醫和西醫對痛風發病原因的認識，所涉及的臟腑病理，擬通過針刺相關臟腑的俞、募、原穴，來調節臟腑功能，從而達到干預痛風高尿酸血癥形成的目的。觀察不同穴組對痛風高尿酸血癥的干預作用。

1 實驗材料及方法

1.1 實驗材料 選用健康6周清潔級Wistar大鼠50只，雄性，體質量（200±20）g。由北京市海淀區興隆實驗動物養殖廠提供。合格號：SCXK-（軍）2007-004。飼養于北京中醫藥大學針灸推拿學院針灸機理實驗室。

1.2 主要試劑及儀器 造模劑：鹽酸乙胺丁醇片（沈陽紅旗制藥有限公司，規格0.25 g×100片，批號H21022349）；腺嘌呤（美國Sigma-aldrich公司，每瓶25 g，批號BCBK3010V）；試劑：尿酸試劑盒、黃嘌呤氧化酶試劑盒、堿性磷酸酶試劑盒（南京建成生物工程研究所）。毫針：直徑0.30 mm，長25 mm（蘇州華佗醫療器械用品有限公司）；直徑0.30 mm，長40 mm（北京漢醫醫療器械中心）。低溫離心機（5810 R，德國Eppendorf 公司）；超低溫冰箱（MDF-U50V，日本三洋公司）；電子天平（ER-182A，日本）；P1000微量可調移液器（100～1 000 μL，芬蘭DRGON）。

1.3 分組與造模 分組：采用完全隨機設計法，利用隨機數字表將Wistar大鼠分為5組：空白組、模型組、俞穴組、原穴組、募穴組，每組10只。除空白組外，另4組制作痛風高尿酸血癥大鼠模型。造模：據熊湘明等[1]文獻記載，自實驗第1天起，模型組、俞穴組、原穴組、募穴組給予造模劑腺嘌呤100 mg/（kg·d）和乙胺丁醇250 mg/（kg·d）的比例，用蒸餾水將兩者混合后，進行灌胃，連續給予21 d，21 d后改為隔日1次，直至第90 d實驗結束，使大鼠始終保持持續性高尿酸血癥。取材后，與空白組比較，模型組SUA、BUN指標含量呈顯著升高（P＜0.05），即提示造模成功。

1.4 取穴 按照余曙光著《實驗針灸學》[2]所附的常用實驗動物針灸穴位取穴，分別為肝俞穴、脾俞穴、腎俞穴、天樞穴、關元穴、太溪穴、太沖穴、太白穴的大鼠對應點，均為雙側取穴。

1.5 各組處置方法 空白對照組：正常同步喂養，不進行任何處理；只做對照。模型組：僅造模，不進行任何針刺干預處理，與各針刺干預組同步捆綁固定，每次15 min；俞穴組：造模同模型組，隔日針刺肝俞、脾俞、腎俞；原穴組：造模同模型組，隔日針刺太沖、太白、太溪；募穴組：造模同模型組，隔日針刺天樞、關元。操作：俞穴組、原穴組、募穴組在造模的同時進行針刺干預，將毫針刺入穴區3～5 mm，每穴作均勻的捻轉行針手法10 s，每次留針15 min，隔日1次，每10次為1療程，每療程結束后休息10 d，共90 d，3個療程。實驗結束后取材。

1.6 檢測指標 SUA、BUN、ALT、AST。檢測方法：于實驗第90天治療結束后禁食，次日將大鼠腹腔注射20%的烏拉坦（1 g/kg）進行麻醉，腹主動脈取血4～5 mL，注入含有惰性分離膠、促凝劑的促凝管中，輕輕搖晃以確保血液和促凝劑充分接觸，不要用力過猛，以免出現溶血現象，血樣在室溫下自然凝血1 h，用離心機以4 000 r/min的數值分離血清，使用Sysmex XS 800 i型全自動生化分析儀檢測各項指標。檢測時間：各組均在實驗結束后第一天，即第91天統一取材。

1.7 數據處理方法 應用SAS 9.4統計軟件對所得數據進行統計學處理，以均數±標準差（x± s ）表示，多組間比較采用方差分析，組間兩兩比較采用SNK檢驗。

2 實驗結果

2.1 各針刺干預組對SUA的影響 1）與空白組比較，模型組SUA明顯升高，具有統計學差異性（P＜0.05）。2）與模型組比較，各針刺干預組SUA含量明顯下降（P＜0.05）。3）與俞穴組比較，原穴組、募穴組SUA含量明顯降低（P＜0.05）。4）與原穴組比較，募穴組SUA含量明顯偏低（P＜0.05）。見表1。

2.2 各針刺干預組對BUN的影響 1）與空白組比較，模型組BUN明顯升高，具有統計學差異性（P＜0.05）。2）與模型組比較，各針刺干預組BUN含量均下降，具有統計學差異性（P＜0.05）。3）與俞穴組比較，原穴組的BUN含量較高（P＜0.05）。與原穴組比較，募穴組的BUN含量較低（P＜0.05）。

表1 針刺俞、原、募穴對大鼠SUA、BUN的影響（x± s ）

2.3 各針刺治療組對AST、ALT的影響 俞穴組、原穴組、募穴組AST活性較模型組均偏高，ALT活性較模型組均偏低，但差異無統計學意義（P＞0.05）。見表2。

表2 針刺俞、原、募穴對大鼠AST、ALT的影響（x± s ）

3 討論

痛風高尿酸血癥在傳統醫學中屬“痹證”“歷節”等范疇，有內外因素之分，二者相互影響。外因主要責之于風、寒、濕、熱、濁瘀之邪，積聚日久，使氣血運行遲澀，脈絡閉阻，臟腑功能失調而遷延不愈。內因則與肝、脾、腎三臟關系最為密切，同時小腸主受盛與化物，泌別清濁，大腸主津液，傳導糟粕，二者同主飲食的消化吸收及排泄，若肝失疏泄、脾失健運、腎失開闔，則津液代謝失常，濁毒沉積于臟腑經絡，可引發痛風高尿酸血癥[3-6]。現代醫學認為，嘌呤與尿酸的代謝異常是痛風高尿酸血癥最重要的生物化學基礎[7-11]，是導致該病的基本原因。嘌呤核苷酸主要在肝、小腸黏膜和胸腺中合成，在肝、小腸、腎中分解代謝；尿酸是在酶催化嘌呤作用下產生的，通過腎臟以及腸道排泄[12]。由此可見，高尿酸血癥均與肝、腎、小腸、大腸有關[13]。

《靈樞·九針十二原》曰：“五臟有疾，當取十二原。”《類經圖翼》說：“五臟居于腹中，其氣脈俱出于背之足太陽經，是為五臟之俞”。募穴為臟腑之氣所結聚于胸腹部的腧穴，其分布與所屬臟腑位置相近，并與背俞穴相對應，主要治療相關的臟腑疾病，尤以治療六腑病癥為佳。《十四經發揮》又說：“陰陽經絡，氣相交貫，臟腑腹背，氣相通應”。可見，俞穴、原穴、募穴在古代文獻記載中均是治療相關臟腑疾病的重要穴位。同時，現代研究表明，三組腧穴除了在古文中論述的作用外，還與臟腑之間存在著某種特殊或者特定的聯系途徑[14-16]。

本實驗研究發現，針刺俞穴組、募穴組、原穴組對降低SUA、BUN均有影響，募穴組效果最好，降低SUA原穴組好于俞穴組，降低BUN俞穴組好于原穴組。可能是因為當針刺相應腧穴時，可以調節相關臟腑對SUA、BUN的合成、代謝以及排泄等功能，從而達到降低SUA和BUN的作用。AST、ALT的活性程度雖有小幅度波動卻仍在正常值內，各組間均無統計學意義，可能是造模劑未對肝臟造成影響[17]，其原因還需進一步研究。其中募穴組干預效果最為顯著，可能是因為小腸是分解代謝嘌呤核苷酸最旺盛的器官[18]，形成的尿酸均經腸道和腎臟排泄。而消化道中產生的氨、嘌呤代謝過程中產生的氨，都是尿素生成的基礎物質，最終尿素通過腎臟排出體外。因此，SUA和BUN的來源與形成都與腸道有直接關系，是生產、代謝其物質的重要場所。從中醫的角度來分析，痛風高尿酸血癥是濁瘀之毒沉積在臟腑經絡等部位，從而使臟腑功能失調，進一步加重影響各臟腑的氣化功能，以及經絡運行氣血，滋養四肢百骸的功能，使該病纏綿不愈。本實驗中所選用的大、小腸的募穴與另外2組不同，能更直接與其臟腑的解剖位置相對應，大腸募穴“天樞”具有疏通腸腑、理氣通便、消食導滯、活血化瘀之功；小腸募穴“關元”具有導赤通淋、導氣利水的作用。此外，“關元”穴是足三陰和任脈的交會穴，內應胞宮精室，為元陰元陽之氣閉藏之處，具有培元固本之功效，使腎氣充足，不受外邪侵犯。有研究證明[19]，關元穴確實具有養生保健，增強人體免疫力的作用。

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