T-SPOT.TB檢測聯合ADA應用于結核性腹膜炎診斷中的價值研究

錢亮棗莊礦業集團棗莊醫院檢驗科，山東棗莊 277101

結核性腹膜炎（Tuberculous peritonitis,TBP）是指結核肝菌所致的腹膜彌漫性、慢性炎癥，主要由血行播散或腹膜內結核直接蔓延而來。由于TBP發病隱匿，加之臨床癥狀與體征無特異性與典型性，所以極易發生漏診與誤診[1]。T細胞斑點試驗（T-SPOT.TB）又稱為結核感染干擾素釋放試驗，其通過預先設計完成的抗體捕獲細胞分泌的特殊因子，并利用酶聯斑點顯色方式檢測，檢測時間僅為16～24 h，為患者診療爭取了寶貴的時間。腺苷脫氨酶（adenosine deaminase,ADA）主要存在于胸腺、脾與其他淋巴組織內，是診斷結核性胸膜炎的重要指標之一[2]。為了進一步完善TBP的臨床診斷質量，該研究回顧性分析2016年5月—2017年5月該院收治的68例結核性腹膜炎患者的臨床資料，分析TSPOT.TB檢測聯合ADA應用于TBP診斷中的價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析該院收治的68例TBP患者的臨床資料，其中男 23 例，女 45 例；年齡 18～73 歲，平均（48.5±5.6）歲。納入標準：所有患者經腹腔鏡、超聲引導下腹腔穿刺獲取腹膜組織，并經病理診斷證實；該次研究內容已告知患者與其家屬知情，并已簽署同意書。排除標準：伴有其他免疫系統疾病與血液系統疾病。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 儀器：自動酶標儀，水浴鍋、CO2培養箱。T-SPOT.TB試劑盒由英國Oxford Immunotec提供，ADA試劑由北京世紀沃德生物科技有限公司提供。

1.2.2 檢測方法 該組68例TBP患者均采用T-SPOT.TB與ADA檢驗。T-SPOT.TB：采集患者靜脈血5 mL，之后以枸櫞酸鈉抗凝，分離靜脈血得到單個核細胞，制成2.0×106/mL細胞懸液（陰性對照），陽性對照為植物血凝素，刺激抗原為結核分枝桿菌特性抗原培養濾液蛋白與早期分泌抗原靶蛋白。將細胞懸液2.5×105/mL個細胞加入每個孔中，并放置在5%二氧化碳培養箱內，培養時間為18～20 h。完成洗板后加入生物素標記的二抗，在2～8℃的狀態下反應1 h，再次洗板，之后加入顯色劑，顯色時間7 min，去離子水沖洗，干燥通風處培養2～3 h，最后在顯微鏡觀察下記錄斑點數。評價標準：實驗孔斑點數-空白孔斑點數在6個或以上，空白孔內斑點數在6個以下為陽性；實驗孔斑點數是空白孔斑點數的2倍及以上，空白孔斑點數在6個及以上為陽性。ADA：經腹腔穿刺獲取患者腹水，標本采集后以3 000 r/min的速度離心15 min，留置上清液，分裝后存儲在-70℃冰箱內待檢，具體檢驗方法嚴格按照說明書內容執行。評價標準：ADA≥40 U/L為陽性。

1.3 觀察指標

①對比單純T-SPOT.TB、ADA檢驗與T-SPOT.TB+ADA聯合檢測該組TBP的陽性率；②對比單純TSPOT.TB、ADA檢驗與T-SPOT.TB+ADA聯合檢測該組TBP的敏感性、特異性、陽性與陰性預測值。

1.4 統計方法

該研究數據均采用SPSS 15.0統計學軟件處理與分析，計數資料以[n（%）]表示，組間對比以 χ2檢驗，檢驗水準α=0.05，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 單純T-SPOT.TB、ADA與T-SPOT.TB+ADA聯合檢測TBP的陽性率對比

T-SPOT.TB+ADA檢驗該組TBP的陽性率為100.00%，高于單純T-SPOT.TB的91.18%與ADA的89.71%（χ2=4.359、5.422，P＜0.05）；單純 T-SPOT.TB 與ADA檢驗該組TBP的陽性率對比差異無統計學意義（χ2=0.851，P＞0.05）。 見表 1。

表1 單純T-SPOT.TB、ADA檢驗與T-SPOT.TB+ADA聯合檢測TBP的陽性率對比[n（%）]

2.2 單純T-SPOT.TB、ADA檢驗與T-SPOT.TB+ADA聯合檢測TBP的敏感性、特異性、陽性與陰性預測值對比

T-SPOT.TB+ADA檢測該組TBP的敏感性、特異性、陽性預測值與陰性預測值分別為100.00%、98.53%、100.00%、98.53%，均高于單純T-SPOT.TB的91.18%、87.88%、88.57%、90.63%與 ADA 的 89.71%、89.39%、89.71%、89.39%（與 T-SPOT.TB 對比，χ2=4.526、4.052、4.868、4.256，P＜0.05； 與 ADA 對 比 ，χ2=4.856、4.756、4.856、4.756，P＜0.05）。 單純 T-SPOT.TB 與 ADA 檢驗該組TBP的敏感性、特異性、陽性預測值與陰性預測值對比差異無統計學意義 （χ2=0.845、1.526、1.056、0.685，P＞0.05）。 見表 2。

表2 單純T-SPOT.TB、ADA檢驗與T-SPOT.TB+ADA聯合檢測TBP的敏感性、特異性、陽性與陰性預測值對比（%）

3 討論

據相關調查顯示，TBP的發生率約占腹部結核的31%～58%，在肺外結核中位列第6名[3-4]。目前，TBP診斷除了依靠患者腹腔積液常規化驗，以及臨床癥狀與體征，最常用的方法則為結核菌素試驗。然而，部分研究發現，結核菌素試驗、非結核分枝桿菌與卡介菌的抗原易出現交叉反應，而在我國非結核分枝桿菌感染率與卡介苗接種率較高的情況下，結核菌素試驗診斷TBP的假陽性情況十分常見，且特異度較低[5-6]。同時，結核菌素試驗可以受到免疫因素的影響，對于慢性營養不良、年老體虛、妊娠女性、嬰幼兒、HIV感染等群體均可出現假陰性，靈敏度不夠理想。雖然腹水培養是診斷TBP 的“金標準”，但檢驗周期過長（1～2個月），易延誤患者的治療時機[7]。壞死肉芽組織等病理學方法也可以診斷TBP，但因獲取病理對機體損傷性較大，所以臨床開展仍有一定的局限性[8]。因此，探尋一種有效的檢驗手段，保證TBP患者的診療質量十分必要。

T-SPOT.TB是診斷結核分枝桿菌的新技術，因其高敏感度，現已在臨床得到了廣泛的應用[9]。T-SPOT.TB的原理是：機體在結核桿菌抗原的刺激作用下，其外周血核淋巴細胞形成特異性T淋巴細胞，此類T淋巴細胞與同類抗原結合后可以產生γ-干擾素。T-SPOT.TB通過檢測體內分泌γ-干擾素的細胞數目，繼而判定有無結核桿菌感染。學者鐘一鳴等[10]報道，T-SPOT.TB診斷肺結核的特異度為87.93%，敏感率為90.63%。同時，ADA是嘌呤核苷代謝中重要的酶類，主要分布在胸腺、脾和其他淋巴組織中[11-12]。結核是T淋巴細胞所介導的細胞免疫，TBP患者腹水與血清內ADA活性均明顯增高。學者周樂亮等[13]將ADA≥30 U/L作為陽性診斷界值，檢測TBP的特異度為100.00%，敏感度為36.4%。ADA在體內活性較高，且與機體免疫系統具有密切的相關性，當免疫細胞受到刺激時，細胞內ADA水平即可呈現出高表達[14]?，F階段，已有許多研究證實TSPOT.TB與ADA在結核性胸膜炎、胸腔積液等疾病的診斷中具有重要的應用價值，但對于二者應用于TBP診斷中的報道十分少見[15]。該研究對T-SPOT.TB檢測聯合ADA應用于TBP診斷中的效果進行分析，結果顯示，T-SPOT.TB+ADA檢驗該組TB檢測聯合ADA應用于TBP患者中，可以有效提高診斷質量，具有顯著的臨床應用價值。

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