按法對兔急性閉合性軟組織損傷影響的實驗研究*

郭銀豐 王 睿 羅華送 任興昌 閆 濤 雷言坤 韓金生

浙江省杭州市中醫院 浙江 杭州 310007

對急性閉合性軟組織損傷實施推拿治療時少有即時實施手法者，而且大都運用多個手法組合或成套手法，形成手法多樣、組合多樣的局面，每個手法的具體作用不明確，也無法確切說明哪些手法、如何組合和如何把握手法的度才能更有效地治療軟組織損傷。而且推拿治療急性軟組織損傷的實驗研究卻極少。基于上述現實，筆者認為需研究單一手法的效用、優勢后方可明確組合依據，形成更嚴密、規范的組合，以提高治療效果。實驗介紹如下。

1 材料

1.1 實驗動物：清潔級中國長耳兔100只，體重在2～2.5kg，實驗動物中心常規飼養。

1.2 實驗主要試劑及儀器：兔前列素E2（PGE2）ELISA試劑盒、兔五羥色胺（5-HT）ELISA試劑盒和兔β（β-EP）內啡肽ELISA試劑盒（上海百沃科貿有限公司）；5804R型高速離心機（艾本德中國有限公司）；680型酶標儀（美國伯樂公司）；電子天平MP120-1（上海第二天平儀器廠）。

2 方法

2.1 造模方法：參照周國林等[1]的方法略加改進制備兔軟組織損傷模型。動物由浙江中醫藥大學動物實驗中心提供，造模前先將中國長耳兔適應性飼養1周，實驗前24h用剪刀剪去兔右側大腿根部（肌肉豐厚處）外側毛，再涂以6%硫化鈉脫毛劑脫毛。將兔子麻醉后，左側在下，并將其固定，將一長30.0cm、直徑3.0cm、內壁光滑的管道下口對準剪毛的部位，使其垂直，將一質量250g、直徑2.5cm的打擊鐵錘置于管道上口，穩定后讓鐵錘自由落下，打在兔子右側大腿根部外側肌肉豐厚處，避開腿骨。連續打擊2次，可見受打擊部位皮膚有細小出血點。每只動物僅打擊右腿。數分鐘后手摸有明顯腫脹觸感及皮溫升高感者說明造模成功，有合并局部皮膚破損或骨折者予以剔除。

2.2 動物分組：將造模成功的100只中國長耳兔隨機平均分為模型組、A組、B組、C組和D組5組，每組20只。再根據處死時間（即初次按壓10min后、第2天按壓10min后、第4天按壓10min后及第7天按壓10min后）分為1、2、3、4四個亞組；命名為模型組1，A1組、B1組、C1組、D1組5組，以此類推，每組5只。

2.3 實驗方法：造模成功后，立即對所有治療組實施不同強度當量按壓。治療各組處死之前每天進行1次按壓治療。模型組：不使用任何治療措施。A組：找準打擊部位施以250g強度當量按壓10min；B組：找準打擊部位施以500g強度當量按壓10min；C組：找準打擊部位施以1000g強度當量按壓10min；D組：找準打擊部位施以2000g強度當量按壓10min。造模完成后進行10min的第1次按壓治療，按壓完畢后抽取耳緣靜脈血4m1左右，然后將所有第1亞組實驗動物處死，并檢測相應指標。第2天在對治療各組的2、3、4亞組于相應時相進行上訴按壓后抽取耳緣靜脈血4m1左右，然后處死所有第2亞組實驗動物，并檢測相應指標。第4天在對治療各組的第3、第4亞組于相應時相進行上訴按壓后抽取耳緣靜脈血4m1左右，然后處死所有第3亞組實驗動物，檢測相應指標。第7天在對治療各組的第4亞組于相應時相進行上訴按壓后抽取耳緣靜脈血4m1左右，然后處死所有第4亞組動物檢測相應指標。

2.4 樣本采集：分述如下。

2.4.1 β-EP的檢測：血樣品的采集：造模成功后所有100只動物取耳緣靜脈血4m1左右，作為治療前各組血樣。在動物干預后處死前再次取耳緣靜脈血4m1左右，作為干預后各組血樣。血樣品處理流程：將所取的血樣靜置4小時。待凝固后以3500r/min轉速離心15分鐘。提取血清量≥600μ1，置于-20℃冷凍保存，集中進行外周血清中β-EP指標檢測。具體操作步驟按照試劑盒要求完成。

2.4.2 前列腺素E2的檢測：①剪取處死兔受打擊部位的中心且呈青紫色的肌肉組織；②用生理鹽水漂洗1分鐘，然后濾紙吸干備用，使用天平稱取100mg肌肉組織；③向每10mg肌肉組織加入生理鹽水0.5ml，置于勻漿器中緩慢而均勻地研研磨15min，使得勻漿液呈均勻一致懸濁液；④倒入試管中，在2500r/min轉速下離心15分鐘；⑤收集上部清液，置于-20℃冰箱中備用。用放免法測定前列腺素E2水平。具體操作步驟按照試劑盒要求完成。

2.4.3 5-HT檢測：方法同β-EP檢測方法。

3 結果

3.1 不同強度按法對急性閉合性軟組織損傷兔5-HT表達水平的影響：見表1。

3.2 不同強度按法對急性閉合性軟組織損傷兔PGE2表達水平的影響：見表2。

3.3 不同強度按法對急性閉合性軟組織損傷兔β-EP表達水平的影響：見表3。

表1 不同強度按法對急性閉合性軟組織損傷兔5-HT表達水平的影響（±s，ng/ml）

表1 不同強度按法對急性閉合性軟組織損傷兔5-HT表達水平的影響（±s，ng/ml）

注：與模型組比較，*P＜0.05。

145.07±46.02 80.74±44.99 61.86±18.44 97.75±13.59 84.45±34.92模型組A組B組C組D組167.02±70.00 89.77±27.26*113.94±28.99 102.38±24.57*96.28±26.31*126.25±35.62 127.07±58.39 86.66±20.16 114.47±19.22 115.09±45.61 150.36±59.06 111.77±15.32 115.22±50.32 122.72±62.89 107.44±21.33

表2 不同強度按法對急性閉合性軟組織損傷兔PGE2表達水平的影響（±s，pg/ml）

表2 不同強度按法對急性閉合性軟組織損傷兔PGE2表達水平的影響（±s，pg/ml）

注：與模型組比較，*P＜0.05。

模型組A組B組C組D組66.78±37.97 38.27±29.77 43.32±7.15 57.48±21.37 67.01±13.79 84.91±40.04 27.14±13.49*40.29±6.13*54.14±12.02 54.79±7.98*109.63±44.96 24.62±5.62*40.81±11.76*63.68±35.33*76.02±43.05 119.01±28.88 18.98±14.31*30.12±7.22*44.96±14.27*43.93±7.70*

表3 不同強度按法對急性閉合性軟組織損傷兔β-EP表達水平的影響（±s，ng/ml）

表3 不同強度按法對急性閉合性軟組織損傷兔β-EP表達水平的影響（±s，ng/ml）

注：與模型組比較，*P＜0.05。

模型組A組B組C組D組13.27±2.12 9.38±1.43*7.04±2.26*5.27±1.38*3.97±0.70*9.01±3.67 7.57±2.88 6.22±1.53 6.22±2.63 8.07±2.56 10.19±4.39 9.04±2.12 4.56±1.42 8.03±1.69 7.06±1.75 8.12±2.97 7.56±1.61 7.60±3.19 5.07±9.77 6.26±1.14

4 討論

軟組織損傷屬中醫學中“傷筋”之范疇。《普濟方·折傷門》云：“若因傷折內動經絡，血行之道不得宣通。瘀積不散，為腫為痛?！庇纱丝梢?，損傷的病機主要是氣滯血瘀，疼痛和腫脹是急性損傷主要的臨床表現。因此，必須“疏其血氣，令其條達，而致和平”，而“按之則氣血散，故按之痛止”。

現代醫學認為急性軟組織損傷的病理變化表現為局部組織細胞壞死、毛細血管擴張、炎癥細胞浸潤、水腫、出血等。由于致痛物質組織胺、5-羥色胺、緩激肽、K+、H+等，及創傷性水腫刺激了痛覺感受器，并傳入神經中樞而引起疼痛，此時間致痛物質濃度升高等導致骨骼肌和血管痙攣，形成疼痛—缺血—疼痛之惡性循環。本實驗研究表明按法作用于損傷局部，可能通過降低5-羥色胺濃度對痛覺感受器的刺激，同時減輕了骨骼肌及血管痙攣，降低前列腺素E2含量抑制局部炎癥，從而緩解疼痛。按法在損傷初期降低β-EP釋放，可能是減少白細胞和免疫細胞在損傷部位的聚集造成的。也就是說按法可能對減輕損傷機體應激反應起到了作用。

本研究表明按法可以用于急性閉合性軟組織損傷的立刻治療，無需等24小時后。按法的取效機理可能是通過影響PGE2、β-EP、5-HT的體內含量而對急性閉合性軟組織損傷起到治療作用。有部分數據不盡人意，原因不確定，可能與具體操作、造模時損傷輕、樣本數少等因素有關。

5 參考文獻

[1]周國林,姚全勝,潘玉英.一種動物軟組織損傷的實驗方法[J].中國藥理學通報,1991(5)：396-398.